呂銘瀟，張 騫

（1.山東服裝職業(yè)學(xué)院，山東 泰安 271000；2.山東農(nóng)業(yè)大學(xué) 植物保護(hù)學(xué)院，山東 泰安 271018）

家蠶(Bombyx moriL.) 在我國(guó)已有5 000多年的飼養(yǎng)史，是我國(guó)農(nóng)業(yè)生態(tài)環(huán)境系統(tǒng)中重要的經(jīng)濟(jì)昆蟲(chóng)。家蠶是我國(guó)農(nóng)藥登記中所列環(huán)境生態(tài)的非靶標(biāo)生物之一，同時(shí)也是對(duì)農(nóng)藥十分敏感的生物。在實(shí)際生產(chǎn)中因農(nóng)藥中毒而造成蠶繭質(zhì)量下降、產(chǎn)量下降、甚至顆粒無(wú)收的事件時(shí)有發(fā)生[1-4]。近年來(lái)，隨著生態(tài)農(nóng)業(yè)的逐漸興起，有關(guān)農(nóng)藥對(duì)家蠶急性毒性評(píng)價(jià)的研究也越來(lái)越多[5-7]，同時(shí)試驗(yàn)條件和方法也在不斷改進(jìn)[8-10]。隨著新農(nóng)藥及其混劑的迅速增長(zhǎng)，及時(shí)評(píng)價(jià)這些藥劑對(duì)養(yǎng)蠶業(yè)的潛在風(fēng)險(xiǎn)，對(duì)保障蠶業(yè)生產(chǎn)的穩(wěn)定與發(fā)展十分重要。

農(nóng)藥對(duì)家蠶的安全性需要考慮農(nóng)藥急性毒性、安全用藥間隔期、慢性毒性和傳染性等幾個(gè)方面，本文從農(nóng)藥對(duì)家蠶急性毒性方面入手，研究幾種特異性殺菌劑的急性毒性。這些特異性殺蟲(chóng)劑具有專(zhuān)一的靶標(biāo)，這種特性也往往會(huì)被誤解為其只作用于病菌，而對(duì)非靶標(biāo)生物的影響較小。本研究根據(jù)中華人民共和國(guó)國(guó)務(wù)院頒布的“農(nóng)藥管理?xiàng)l例”的規(guī)定，遵照國(guó)家環(huán)境保護(hù)局頒布的“化學(xué)農(nóng)藥環(huán)境安全評(píng)價(jià)試驗(yàn)準(zhǔn)則”的要求[11]，測(cè)定了7種藥劑對(duì)家蠶的急性毒性，為農(nóng)藥環(huán)境毒性評(píng)價(jià)、農(nóng)藥的登記注冊(cè)和桑樹(shù)病蟲(chóng)害防治合理用藥提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 供試家蠶和桑樹(shù)品種

家蠶品種為菁松·皓月，購(gòu)自山東廣通蠶種集團(tuán)有限公司。供試桑樹(shù)為處于桑葉盛產(chǎn)期的6年生桑樹(shù)。

1.2 供試藥劑

甲氧基丙烯酸酯類(lèi)殺菌劑：50%嘧菌酯水分散粒劑(Azoxystrobin, 50% WG )，三唑類(lèi)殺菌劑：20%戊菌唑水劑（Penconazole, 20%AS），400 g/L苯醚甲環(huán)唑懸浮劑（Difenoconazole, 400 g/L SC），20%氟硅唑可濕性粉劑（Flusilazole, 20%WP）；三唑類(lèi)殺菌劑：12.5%氟環(huán)唑懸浮劑（Epoxiconazole, 12.5% SC），甲氧基丙烯酸酯類(lèi)殺菌劑：50% 醚菌酯水分散粒劑（Kresoxim-methyl, 50%WG），10%己唑醇懸浮劑（Hexaconazole, 10%SC）。

1.3 試驗(yàn)方法

采用國(guó)家《化學(xué)農(nóng)藥環(huán)境安全評(píng)價(jià)試驗(yàn)準(zhǔn)則》推薦的食下毒葉法[11-13]，并略作改動(dòng)。在預(yù)試明確藥劑有效濃度范圍的基礎(chǔ)上，將藥劑用水稀釋成5～7個(gè)系列濃度，從桑樹(shù)上采集第2、3片健康的葉片，擦干凈葉面上的塵土等雜物，用不同濃度的藥液定量浸漬桑葉，以10 mL藥液浸漬5 g桑葉，并且盡量使藥液均勻浸在桑葉上，浸葉時(shí)間應(yīng)控制為10 s。自然晾干后放入直徑15 cm培養(yǎng)皿內(nèi)，每皿接入20頭家蠶2齡第2天幼蟲(chóng)（3個(gè)重復(fù)共計(jì)60頭）。以清水浸桑葉為空白對(duì)照組，如果有助溶劑還需要做溶劑對(duì)照。處理后的試蟲(chóng)置于26 ℃恒溫養(yǎng)蟲(chóng)室內(nèi)（保持相對(duì)濕度80%±5%），連續(xù)喂食染毒桑葉96 h，分別于24 h、48 h及96 h檢查死亡、存活家蠶頭數(shù)，并連續(xù)觀察記錄存活個(gè)體中毒癥狀。對(duì)照組死亡率小于10%的試驗(yàn)為有效試驗(yàn)。

1.4 毒性評(píng)價(jià)依據(jù)

計(jì)算死亡率、校正死亡率，用SPSS12.0統(tǒng)計(jì)分析軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，求出各藥劑對(duì)家蠶的LC5O值及95%置信限：依據(jù)中華人民共和國(guó)國(guó)家環(huán)境保護(hù)總局《化學(xué)農(nóng)藥環(huán)境安全評(píng)價(jià)試驗(yàn)準(zhǔn)則》，農(nóng)藥對(duì)家蠶96 h的急性毒性按LC50的大小劃分為4個(gè)等級(jí)：低毒性(LC5O＞200 mg/L)；中等毒性(20 mg/L＜LC5O≤200 mg/L)；高毒性(0.5 mg/L＜LC5O≤20 mg/L)；劇毒（LC5O≤0.5 mg /L）。

2 結(jié)果與分析

2.1 中毒癥狀觀察

不同殺蟲(chóng)劑對(duì)家蠶引起的中毒癥狀表現(xiàn)出多種相似的特征（見(jiàn)表1），如吐液、拒食、身體扭曲呈“C”或“S”形、靜臥等。但有些藥劑也表現(xiàn)異樣，如同屬三唑類(lèi)殺菌劑，戊菌唑有“C”形扭曲和體縮癥狀，而苯醚甲環(huán)唑有吐液和擺頭癥狀。

表1 家蠶接觸不同殺菌劑的中毒癥狀觀察（96 h）

2.2 毒性評(píng)價(jià)

比較7種殺菌劑對(duì)家蠶的96 h的LC50值（見(jiàn)表2），按毒力大小排列依次為：苯醚甲環(huán)唑＞戊菌唑＞氟硅唑＞醚菌酯＞氟環(huán)唑＞己唑醇＞嘧菌酯。其中苯醚甲環(huán)唑?qū)倚Q的毒性最高；毒性最小的是嘧菌酯。比較7種殺菌劑對(duì)家蠶的96 h的LC5O值，按毒力大小排列依次為：苯醚甲環(huán)唑＞戊菌唑＞氟硅唑＞醚菌酯＞氟環(huán)唑＞己唑醇＞嘧菌酯。其中苯醚甲環(huán)唑?qū)倚Q的毒性最高；毒性最小的是嘧菌酯。

表2 7種殺菌劑對(duì)家蠶的毒性（96 h）

2.3 毒性分級(jí)及風(fēng)險(xiǎn)性評(píng)價(jià)

表3 農(nóng)藥對(duì)家蠶的毒性與風(fēng)險(xiǎn)性等級(jí)劃分

依據(jù)中華人民共和國(guó)國(guó)家環(huán)境保護(hù)總局《化學(xué)農(nóng)藥環(huán)境安全評(píng)價(jià)試驗(yàn)準(zhǔn)則》(表3)，在本實(shí)驗(yàn)室條件下，嘧菌酯、己唑醇、氟環(huán)唑?qū)倚Q急性毒性等級(jí)劃分為“低毒”，風(fēng)險(xiǎn)性等級(jí)低等；氟硅唑、醚菌酯對(duì)家蠶急性毒性等級(jí)劃分為“中毒毒”，風(fēng)險(xiǎn)性等級(jí)中毒；戊菌唑、苯醚甲環(huán)唑?qū)倚Q急性毒性等級(jí)劃分為“高毒”，具有較高的風(fēng)險(xiǎn)性等級(jí)。

3 討 論

本研究旨在明確7種不同殺菌劑品種對(duì)家蠶的毒性大小、家蠶的中毒癥狀以及農(nóng)藥對(duì)家蠶的風(fēng)險(xiǎn)性差異。同時(shí)，為化學(xué)防治桑園害蟲(chóng)和蠶農(nóng)科學(xué)用藥提供理論支持及技術(shù)指導(dǎo)，并對(duì)多種農(nóng)藥進(jìn)行毒性評(píng)價(jià)，為這些農(nóng)藥的登記及安全使用提供必要的環(huán)境毒理學(xué)資料。

生產(chǎn)實(shí)踐中，在桑園周邊不合理的噴灑殺蟲(chóng)劑導(dǎo)致農(nóng)藥?kù)F滴漂移，間接影響到家蠶的生長(zhǎng)發(fā)育，導(dǎo)致蠶農(nóng)經(jīng)濟(jì)損失嚴(yán)重。近些年，在加強(qiáng)了對(duì)農(nóng)藥的科學(xué)使用宣傳、農(nóng)藥施用方法的改善以及蠶農(nóng)自身經(jīng)驗(yàn)積累后，家蠶中毒現(xiàn)象有所減少。殺蟲(chóng)劑作用于昆蟲(chóng)體內(nèi)的靶標(biāo)，導(dǎo)致其對(duì)昆蟲(chóng)的毒性較大。

但是，人們誤認(rèn)為殺菌劑作用于細(xì)菌、真菌等病菌內(nèi)部的靶標(biāo)，對(duì)昆蟲(chóng)毒性較小。通過(guò)本文章的數(shù)據(jù)可知，甲氧基丙烯酸酯類(lèi)殺菌劑嘧菌酯對(duì)家蠶“低毒”，醚菌酯對(duì)家蠶“中毒”；三唑類(lèi)殺菌劑己唑醇、氟環(huán)唑?qū)倚Q“低毒”，氟硅唑?qū)倚Q“中毒”，戊菌唑、苯醚甲環(huán)唑?qū)倚Q“高毒”。由此可見(jiàn)，不同作用機(jī)制的殺菌劑對(duì)家蠶的毒性不同，即使是同一類(lèi)作用機(jī)制的殺菌劑，不同的藥劑對(duì)家蠶的毒性也不同，甚至毒性差異顯著。因此，在防治桑園害蟲(chóng)時(shí)應(yīng)盡量避免使用上述殺蟲(chóng)劑。在桑園周邊農(nóng)田中防治其他作物害蟲(chóng)時(shí)，應(yīng)選擇對(duì)家蠶風(fēng)險(xiǎn)性小的藥劑，并注意各藥劑的安全間隔期。同時(shí)，應(yīng)避免在有風(fēng)天氣施藥，并嚴(yán)格控制施藥方法、施藥時(shí)間和施藥時(shí)期。對(duì)于急性毒性低的殺菌劑能否使用在桑園及其周邊，還需要從藥劑殘毒期、慢性毒性和傳染性等方面深入研究。朱久生等[14]報(bào)道，幼蠶經(jīng)微量農(nóng)藥處理后體重減輕，蟲(chóng)體開(kāi)始收縮變小，一些幼蟲(chóng)不能吐絲結(jié)繭，大部分幼蟲(chóng)在吐絲過(guò)程中死于蔟格中；部分幼蟲(chóng)雖能正常結(jié)繭，但不能化蛹；對(duì)蛹而言，蛹體變小，有些不能發(fā)育成成蟲(chóng)或成蟲(chóng)發(fā)育不全，或在羽化前后死亡。因此，還需要繼續(xù)研究藥劑影響家蠶安全性的其他方面，獲得足夠的資料來(lái)確定此藥劑是否可以在蠶區(qū)安全施用。

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