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松木層孔菌多糖PP60-S1分離、結(jié)構(gòu)表征及抗氧化活性研究

2014-03-03 08:27金月忠胡江寧王如偉孫培龍
食品工業(yè)科技 2014年20期
關(guān)鍵詞:孔菌菌子松木

楊 開,金月忠,邢 辰,胡江寧,王如偉,孫培龍,*

(1.浙江工業(yè)大學食品科學與工程系,浙江杭州 310014;2.浙江中藥與天然藥物研究院,浙江杭州 310052)

松木層孔菌多糖PP60-S1分離、結(jié)構(gòu)表征及抗氧化活性研究

楊 開1,2,金月忠1,邢 辰1,胡江寧2,王如偉2,孫培龍1,*

(1.浙江工業(yè)大學食品科學與工程系,浙江杭州 310014;2.浙江中藥與天然藥物研究院,浙江杭州 310052)

松木層孔菌子實體水提物經(jīng)乙醇分級醇沉和DEAE-Sepharose Fast Flow離子柱層析及Sephacryl S-300凝膠柱層析純化,獲得均一多糖PP60-S1,其分子量為3.56×104u,是由葡萄糖、甘露糖和半乳糖組成的雜多糖,單糖摩爾比為9.24∶1.00∶0.76,甲基化分析PP60-S1主要由1-Glc、1,3-Glc、1,6-Glc、1,3-Gal、1,6-Gal、1,3,6-Man 6種糖苷鍵連接方式,主鏈主要由1,6-Glc構(gòu)成。PP60-S1的體外抗氧化活性研究表明其具有一定的DPPH自由基和ABTS+自由基清除活性以及FRAP總抗氧化能力。

松木層孔菌,多糖,分離純化,結(jié)構(gòu)表征,抗氧化

松木層孔菌(Phellinus pini),又名松針層孔菌和松白腐菌,是針層孔菌屬真菌,屬于大型真菌,子實體木質(zhì),呈褐色。其主要活性成分有多糖、酚類、萜類物質(zhì)等[1-2]。多糖作為松木層孔菌的主要生物活性成分之一,在抗氧化、免疫調(diào)節(jié)、抗病毒、抗腫瘤等方面均表現(xiàn)出了較好的效果[3-4]。在松木層孔菌發(fā)酵物多糖研究方面,裴麗娟等[5]從發(fā)酵菌絲體中分離得到了一種由甘露糖、半乳糖和葡萄糖構(gòu)成的堿提水溶性多糖(PEP),此多糖對小鼠離體淋巴細胞具有較顯著的促增殖作用。袁蕾等[6]從發(fā)酵液中分離得到了一種胞外多糖(PPE),是以甘露糖(93.29%)為主要組成的雜多糖組分。在子實體多糖研究方面,劉安軍等[7]提取分離得到的水溶性β-雜多糖組分PS1,能夠顯著提高小鼠機體的免疫能力。Lee等[8]從松木層孔菌子實體中分離得到了兩種高分子量的多糖(EP-AV1和EP-AV2),均以β-1,3葡聚糖構(gòu)成為主,并具有一定的抗病毒活性(包括HSV-1和CVB3)。近幾十年的研究表明,一種來源的菌物多糖往往由幾個不同結(jié)構(gòu)的多糖組成,而且多糖的結(jié)構(gòu)(如分子量、連接方式、糖苷鍵類型、分支度和聚合度等)是其發(fā)揮各種生理活性的物質(zhì)基礎(chǔ)。然而與同屬的其他真菌相比,如裂蹄 針 層 孔 菌(Phellinus linteus)、針 層 孔 菌(Phellinus igniarius)和鮑氏針層孔菌(Phellinus baumii),目前有關(guān)松木層孔菌多糖結(jié)構(gòu)特性的研究還很少。因此,本文進行了松木層孔菌子實體多糖的提取和分離純化,并對一個純化多糖組分開展了結(jié)構(gòu)表征和體外抗氧化活性研究,有利于進一步了解該珍稀菌物多糖的結(jié)構(gòu)和生物活性,也為其醫(yī)藥保健產(chǎn)品的研發(fā)利用提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

松木層孔菌子實體(Phellinus pini) 購于浙江五養(yǎng)堂藥業(yè)有限公司,由浙江省農(nóng)科院園藝研究所食藥用菌研究室蔡為明研究員鑒定;DEAE-Sepharose Fast Flow 、Sephadex G-25 Fine 和 Sephacryl S300 High-Resolution 均購自美國GE公司;葡聚糖標準品(analytical standard for GPC,CAS:9004-54-0)、單糖標準品:L-巖藻糖(≥99%,CAS:2438-80-4)、D-木糖(≥99%,CAS:58-86-6)、D-甘露糖(≥99%,CAS:3458-28-4)、L-鼠李糖 (≥99%,CAS:10030-85-0)、D-半乳糖(≥99%,CAS:59-23-4)、D-葡萄糖(≥99.5%,CAS:50-99-7)、碘甲烷、2,2-Diphenyl-picrylhydrazyl(DPPH)、2,2-Azino-bis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid) diammonium salt(ABTS)、2 ,4 ,6-Tris(2-pyridyl)-s-triazine(TPTZ) 均 購 自 美 國 Sigma公司;三氟乙酸、硼氫化鈉 購于德國Merck公司;其余試劑 均為國產(chǎn)分析純。

RE-2000A旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器 上海亞榮生化儀器廠;CR21GⅡ型高速冷凍離心機 日本日立儀器有限公司;UV-2450紫外可見分光光度儀 日本島津公司;Alpha 2-4 LD Plus真空冷凍干燥機 德國Christ公司;Waters 1525高效液相色譜儀、Waters 2414示差檢測器 美國Waters公司;TSKgel G4000PWXL高效液相色譜柱 日本Tosoh公司;XK雙層層析柱(26mm× 100cm) 美國GE公司;Nicolet 6700傅里葉變換紅外光譜儀、Finnigan Trace Ultra-DSQⅡ氣-質(zhì)聯(lián)用色譜儀 美國Thermo公司;Agilent 7890A氣相色譜 美國Agilent公司。

1.2 實驗方法

1.2.1 松木層孔菌子實體多糖的提取 松木層孔菌子實體切成小塊后用粉碎機粉碎,過60目篩,60℃烘干至恒重,稱取干燥粉末500g,用10倍體積95%乙醇浸提過夜脫脂,布氏漏斗過濾,重復3次。殘渣置陰涼通風處風干,加20倍蒸餾水,沸水提取2h,10000r/min離心10min,渣液分離,濾渣復提2次,合并3次提取液,50℃以下減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮,濃縮液攪拌過程中緩慢加入95%乙醇至終乙醇體積濃度為30%,靜置過夜,10000r/min,離心10min;上清液繼續(xù)加入95%乙醇至終乙醇體積濃度為60%,10000r/min,離心10min,收集沉淀,醇沉物再經(jīng)無水乙醇、丙酮洗滌,72h冷凍干燥后得松木層孔菌子實體粗多糖,命名為PP60。

1.2.2 松木層孔菌子實體多糖的分離與純化 將粗多糖PP60溶于蒸餾水中,配成1.0mg/mL溶液,10000r/min離 心10min,取 上 清 液 經(jīng) DEAE-Sepharose Fast Flow離子柱(XK26mm×100cm)層析,每次上樣10mL,流速3.0mL/min,依次用蒸餾水,0~0.4mol/L NaCl溶液線性梯度洗脫,自動部分收集,每管10mL,糖含量經(jīng)苯酚-硫酸法跟蹤檢測,根據(jù)顯色反應收集多糖組分。離子柱洗脫下來的多糖組分PP60-S配成一定濃度的糖 溶 液 后 經(jīng)Sephadex G-25 Fine凝 膠 柱(XK26mm × 100cm)脫鹽,收集全部脫鹽后的PP60-S多糖溶液 ,再 用 Sephacryl S-300 High-Resolution 凝 膠 柱(XK26mm×100cm)進一步純化,蒸餾水洗脫,自動部分收集,得到PP60-S1組分,收集,濃縮,凍干,儲存于干燥器中備用。

1.2.3 多糖PP60-S1的均一性和平均分子量測定 采用高效液相色譜法(HPLC)對松木層孔菌純化多糖PP60-S1進行均一性及分子量的測定。色譜柱:TSKgel G4000PWXL(7.8 ×300mm);流 動 相 :0.1mol/L NaNO3溶液,流速:0.8mL/min;進樣量:10μL;柱溫:(30±1)℃;檢測器:Waters 2414示差檢測器。取多糖PP60-S1 2.0mg溶于2.0mL 0.1mol/L NaNO3溶液,微孔濾膜過濾,取濾液10μL進樣,測得保留時間,根據(jù)標準曲線計算分子質(zhì)量。

1.2.4 多糖PP60-S1的理化特性分析

1.2.4.1 多糖PP60-S1的紫外-可見光光譜全掃描檢測 將PP60-S1配成1.0mg/mL水溶液,采用紫外-可見分光光度計在200~400nm進行全波長掃描檢測。

1.2.4.2 多糖PP60-S1的傅里葉變換紅外光譜分析 取2.0mg干燥的PP60-S1樣品,采用KBr壓片,在4000~400cm-1內(nèi)進行紅外光譜掃描。

1.2.5 多糖PP60-S1的單糖組成分析 稱取PP60-S1樣品2.0mg,放入薄壁長試管中,加入2.0mol/L的三氟乙酸(TFA)4.0mL,在110℃水解2h。水解后,試管中溶液低于40℃減壓蒸干,然后加入甲醇蒸干,重復操作4~5次,以完全除去TFA。將完全水解的樣品重新溶于3.0mL蒸餾水中,加入20~30mg硼氫化鈉(NaBH4),密塞,室溫下還原3h,然后用冰醋酸中和過量的NaBH4,加入少量甲醇,減壓濃縮蒸干,重復4~5次,真空干燥過夜。次日,加入4.0mL醋酐,100℃反應1h,然后加入3.0mL甲苯,減壓蒸干。將乙?;蟮漠a(chǎn)物用氯仿溶解后轉(zhuǎn)移至分液漏斗,加入等量的蒸餾水充分混勻,靜置分層后,除去上層水溶液,重復3~4次。氯仿層以適量無水硫酸鈉干燥、過濾,定容至10mL,待GC分析。

色譜條件:Agilent 7890N儀器配備HP-5毛細管柱(30m ×0.32mm ×0.25μm),氫 火 焰 離 子 化 檢 測 器(FID),高純度氮氣最為載氣。程序升溫:初始柱溫為120℃,以10℃/min升溫至240℃,恒溫6.5min,進樣量2.0μL,進樣口溫度為250℃,分流比1∶50,檢測器溫度為250℃,氫氣流速為35mL/min,空氣流速350mL/min,尾吹氣流速30mL/min,柱內(nèi)流速為1.0mL/min。

1.2.6 多糖PP60-S1的糖苷鍵連接方式分析 充分干 燥 的 樣 品 2.0mg,加 入 0.5mL DMSO,水 浴 超 聲2min,然后加入0.025g/mL NaOH-DMSO懸液0.6mL和0.6mL碘甲烷,密封、渦旋混合器上混合7min后加入4.0mL蒸餾水終止反應,用等量的氯仿進行萃取,棄去上層水相,下層有機相用蒸餾水萃取5次,有機相40℃下減壓蒸干,用IR檢查至3400cm-1處無-OH吸收峰,即得完全甲基化多糖。將甲基化多糖溶于甲酸溶液中,100℃下解聚3h。再用TFA在100℃下封管水解6h后用NaBH4進行還原,再將上述處理過的樣品用醋酐進行乙?;磻R阴;蟮漠a(chǎn)物用等體積氯仿和蒸餾水進行萃取,待GC-MS分析。

色譜條件:Finnigan Trace Ultra-DSQⅡ氣-質(zhì)聯(lián)用色譜儀配備DB-5毛細管柱(30m×0.25mm×0.25μm)。程序升溫:初始柱溫為120℃,以10℃/min升溫至240℃,保持6.5min,接口溫度為250℃,離子源溫度為250℃,進樣量2.0μL,以氦氣做載氣,流速為1.0mL/min。

1.2.7 多糖PP60-S1的體外抗氧化活性測定

1.2.7.1 清除DPPH自由基活性測定 測定方法參考Milardovic等[9]的報道并略有改動。用80%甲醇溶液配制成0.2mmol/L的DPPH試劑,取1.0mL稀釋的提取液與3.0mL DPPH試劑混合,暗處反應1h,然后在515nm下測定吸光值。以80%甲醇溶液作為空白對照。其結(jié)果表達為清除率達到50%時所對應的多糖濃度(即EC50)。

式中:A0:空白對照的吸光值;A1:樣品的吸光值。

1.2.7.2 清除ABTS+·活性測定 測定方法參考Miller等[10]的報道并略有改動。取140mmol/L的過硫酸鉀溶液加入到7.0mmol/L的ABTS溶液中混合,暗處反應12~16h。測定前用無水乙醇將ABTS+·溶液稀釋至吸光值為0.70±0.02(734nm)。取0.2mL稀釋過的提取液與 3 .8mL 的 ABTS+·溶 液 混 合 搖 勻 ,在 室 溫 下 反 應10min后,在734nm下測定吸光值。以80%甲醇溶液作為空白對照。其結(jié)果表達為清除率達到50%時所對應的多糖濃度(即EC50)。清除率公式同1.2.7.1。

1.2.7.3 FRAP總抗氧化活性測定 測定方法參照Benzie等[11]的 報 道 并 略 有 改 動 。FRAP 試 劑 的 準 備 :0.1mol/L的醋酸緩沖試劑(pH3.6),19mmol/L的TPTZ,20mmol/L氯化鐵按體積10∶1∶1的體積比混合。3.9mL FRAP試劑工作液加入0.1mL稀釋過的提取液,混合均勻,置37℃恒溫水浴10min,然后在593nm下測其吸光值。以FeSO4為標準溶液(標準曲線:y=0.5450x-0.0031,R2=0.9992),根據(jù)反應后的吸光值,在標準曲線上求得相應的FeSO4的濃度,定義為FRAP值,結(jié)果以每毫克多糖相當FeSO4還原力的相當量表示(mmol FeSO4/mg多糖),F(xiàn)RAP值越大,抗氧化活性越強。

1.2.8 數(shù)據(jù)處理 所有實驗數(shù)據(jù)重復測定3次,所得結(jié)果 以 平均 值 ±標 準 差(±s)來 表示,采用Origin 8.5軟件進行繪圖與數(shù)據(jù)的分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 松木層孔菌多糖PP60-S1的分離純化

經(jīng)乙醇脫脂的松木層孔菌子實體粉末,熱水浸提,乙醇沉淀后得到粗多糖PP60,其得率為6.29%(w/w),經(jīng)苯酚-硫酸法測定,總糖含量為66.32%±3.61%。PP60 經(jīng)DEAE-Sepharose Fast Flow離 子 柱 層 析 后 得到3個組分:PP60-W(蒸餾水洗脫)、PP60-S(0.1mol/L NaCl溶 液 洗 脫)和PP60-S-1(0.2mol/L NaCl溶 液 洗脫)。洗脫曲線如圖1所示。收集含量較多組分PP60-S,經(jīng)Sephadex G-25 Fine凝膠柱脫鹽后,再經(jīng)Sephacryl S-300 High-Resolution(圖2)進一步純化后得到純化組分PP60-S1,收集、濃縮、冷凍干燥后得到白色固體粉末。

圖1 PP60 DEAE-Sepharose Fast Flow離子柱層析洗脫曲線Fig.1 Elution curves of PP60 by DEAE-Sepharose Fast Flow column chromatography

圖2 PP60-S脫鹽后Sephacryl S300洗脫曲線Fig.2 Elution curves of desalted PP60-S by Sephacryl S300 column chromatography

2.2 多糖PP60-S1的純度及平均分子質(zhì)量測定結(jié)果

標準曲線用標準葡聚糖(分子量分別為1.0、5.0、12、50、80、150、270、670ku) 的保留時間進行繪制。以分子量的對數(shù)為縱坐標(y),保留時間為橫坐標(x,min),繪制得標準曲線:y=-0.4925x+10.071,R2= 0.9953。

PP60-S1經(jīng)HPLC檢測為單一對稱峰(圖3),說明PP60-S1為均一多糖,根據(jù)保留時間及標準葡聚糖分子量曲線,計算其平均分子質(zhì)量為3.56×104u。經(jīng)苯酚-硫酸法測定,PP60-S1總糖含量為99.07%± 0.28%。

圖3 PP60-S1 HPLC曲線Fig.3 HPLC determination of PP60-S1

2.3 紫外-可見光光譜全掃描檢測結(jié)果

松木層孔菌多糖PP60-S1的紫外-可見光譜全掃描結(jié)果見圖4所示。其顯示在210nm波長左右處有強的多糖吸收峰,而在260nm和280nm波長處未發(fā)現(xiàn)核酸和蛋白質(zhì)等雜質(zhì)峰,表明PP60-S1不含核酸和蛋白質(zhì)。

圖4 PP60-S1紫外全掃描光譜圖Fig.4 UV scanning curve of PP60-S1

2.4 傅里葉變換紅外光譜分析

PP60-S1在4000~400cm-1區(qū)具有多糖官能團特征吸收峰(圖5)。由圖5可見,3412.8cm-1的寬而強的吸收峰是糖分子中-OH基團的伸縮振動吸收峰;2928.0cm-1的吸收峰是C-H的伸縮振動峰;1658.0cm-1附近的吸收峰是多糖的水合振動峰;1378.8cm-1左右的吸收峰是C-H的彎曲振動吸收峰;1076.5cm-1的吸收峰為C=O伸縮振動特征峰,包括吡喃糖環(huán)的C-O-C伸縮振動和吡喃環(huán)中與羥基連接的C-O伸縮振動,說明其中的單糖以吡喃糖苷的形式存在[12-13];1730cm-1及1258cm-1附近沒有特征吸收峰,表明該糖不含糖醛酸[14]。

圖5 PP60-S1的紅外光譜圖Fig.5 FT-IR spectrum of PP60-S1

2.5 多糖PP60-S1的單糖組成分析

混合單糖標準品和PP60-S1乙酰化衍生物氣相色譜圖見圖6。根據(jù)圖6(b)得出,多糖PP60-S1組成單糖有三種,與標準單糖保留時間對比圖6(a),根據(jù)保留時間順序為甘露糖、葡萄糖和半乳糖,葡萄糖含量明顯大于甘露糖和半乳糖。樣品中三種糖的摩爾比為甘露糖∶葡萄糖∶半乳糖=1.00∶9.24∶0.76。這一結(jié)果與文獻報道的松木層孔菌發(fā)酵菌絲體胞外多糖(主要由甘露糖組成)相比存在明顯的差異[6]。

圖6 乙?;苌餁庀嗌V圖Fig.6 Gas chromatogram of acetyl derivatives

2.6 多糖PP60-S1的糖苷鍵連接方式分析

PP60-S1經(jīng)甲基化、酸水解、還原及乙?;杉谆谴家宜狨パ苌?,對其進行GC-MS分析。根據(jù)相應保留時間的碎片離子峰和相關(guān)文獻[15-19]對比得出PP60-S1的甲基化多糖及單糖連接位點歸納如表1所示。甲基化糖醇衍生物中占絕大部分的為2,3,4-Me3-Glcp,說明多糖PP60-S1分子的主鏈可能主要是通過1,6葡萄糖糖苷鍵連接組成,而且結(jié)構(gòu)中還存在末端Glc。計算得到的甲基化單糖摩爾比與GC分析得出的單糖摩爾比基本符合,主要由葡萄糖組成,證明推斷合理。從1-Glc和1,3,6-Man的摩爾比(1∶1)看,兩者可能是相互連接的。

2.7 多糖PP60-S1的體外抗氧化活性測定結(jié)果

多糖PP60-S1的體外抗氧化活性結(jié)果見表2。結(jié)果發(fā)現(xiàn)在實驗的濃度范圍內(nèi),松木層孔菌多糖PP60-S1對DPPH和ABTS+·自 由 基 的 清 除 率 均 隨 濃 度 增加而增加,呈量效關(guān)系,對DPPH自由基的半清除濃度(EC50)為 4.18mg/mL;對 ABTS+·自 由 基 的 半 清 除 濃度(EC50)為7.62mg/mL;反映總抗氧化能力的FRAP值為0.18mmol FeSO4/mg多糖。通過體外抗氧化活性的研究,發(fā)現(xiàn)松木層孔菌子實體純化多糖PP60-S1具有一定的清除DPPH和ABTS+自由基活性和FRAP總抗氧化能力,但不及文獻報道的松木層孔菌子實體粗多 糖 體 外 抗 氧 化 活 性[20],其 原 因 可 能 與 提 取 的 粗 多糖(未經(jīng)純化)連有蛋白質(zhì)、核酸、酚類化合物等其他 活 性 成 分[21-22]有 關(guān) ,其 具 體 原 因 需 要 進 一 步 研 究證實。

表1 松木層孔菌多糖PP60-S1的甲基化分析結(jié)果Table 1 Methylation analysis of Phellinus pini polysaccharide PP60-S1

表2 松木層孔菌多糖PP60-S1體外抗氧化活性結(jié)果Table 2 In vitro antioxidant activities of Phellinus pini polysaccharide PP60-S1

3 結(jié)論與討論

真菌多糖主要存在于真菌子實體、菌絲體和發(fā)酵培養(yǎng)液中,并具有多種生物活性,如抗腫瘤、抗衰老、免疫調(diào)節(jié)、降血壓、降血脂、降血糖等。作為一種天然的生物大分子,真菌多糖因其優(yōu)良的生物活性和無毒性的特點,成為了生物學和醫(yī)學領(lǐng)域的研究熱點。本實驗通過對松木層孔菌子實體粗多糖的提取和分離純化,獲得了一種均一性較好的水溶性多糖PP60-S1,此多糖主要由葡萄糖、甘露糖和半乳糖組成,其摩爾比為9.24∶1.00∶0.76。與文獻已報道的松木層孔菌發(fā)酵菌絲體堿提多糖[5]和胞外多糖[6](主要由甘露糖組成)相比存在明顯的差異,與劉安軍[7]和Lee等[8]提取到的子實體多糖單糖組成較相符。經(jīng)甲基化和GC-MS初步分析,PP60-S1主要由1,6-Glc構(gòu)成,還存在少量其他的糖苷鍵,與Lee等得到的多糖組分EP-AV1和EP-AV2(以β-1,3葡聚糖為主)有一定的差別。另外,通過3種體外實驗模型研究了松木層孔菌子實體多糖PP60-S1的體外抗氧化活性。結(jié)果表明,多糖PP60-S1對DPPH自由基和ABTS+自由基均表現(xiàn)出一定的清除活性以及FRAP總抗氧化能力。目前有研究表明,對具有抗氧化活性的多糖進行硫酸化、硒化及酯化等結(jié)構(gòu)修飾和改造后,所得的修飾多糖抗氧化活性將會有較大的改善[23-24],因此通過對松木層孔菌多糖結(jié)構(gòu)進行改造和修飾,有望得到一種更加安全高效和經(jīng)濟實用的天然抗氧化劑產(chǎn)品,對于松木層孔菌資源的開發(fā)利用具有一定的意義。

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Study on isolation,structural characterization and antioxidant activity evaluation of polysaccharide PP60-S1 from Phellinus pini

YANG Kai1,2,JIN Yue-zhong1,XING Chen1,HU Jiang-ning2,WANG Ru-wei2,SUN Pei-long1,*
(1.Department of Food Science and Technology,Zhejiang University of Technology,Hangzhou 310014,China;2.Zhejiang Chinese Traditional Medicine and Natural Drug Research Institute,Hangzhou 310052,China)

The homogeneous polysaccharide PP60-S1 was obtained by water extraction ,ethanol precipitation and purified by DEAE-Sepharose F.F.and Sephacryl S-300 from the fruiting bodies of Phellinus pini.The polysaccharide PP60-S1 was composed of glucose,mannose and galactose with a molar ratio of 9.24∶1.00∶0.76,with an average molecular weight of 3.56 ×104u.The results of methylation analysis indicated that six kinds of glycosidic linkages were detected in the structure of PP60-S1:1-Glc、1,3-Glc、1,6-Glc、1,3-Gal、1,6-Gal、1,3,6-Man,respectively.The main chain contained mainly 1,6-Glc.Otherwise,the polysaccharide PP60-S1 exhibited a certain degree of antioxidant activity ,evaluated by in vitro assay of DPPH·, ABTS+· and ferricreducing antioxidant power(FRAP).

Phellinus pini;polysaccharide;purification;structural characterization;antioxidant activity

TS201.2

A

1002-0306(2014)20-0076-06

10.13386/j.issn1002-0306.2014.20.008

2014-02-24

楊開(1978-),男,博士,副研究員,研究方向:生物活性物質(zhì)提取分離與結(jié)構(gòu)表征。

* 通訊作者:孫培龍(1964-),男,博士,教授,博士生導師,研究方向:食品化學與資源利用。

浙江省自然科學基金資助項目(LY13C200011);國家科技支撐計劃資助項目(2013BAD16B07)。

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