郭中華，鄭彩英，金 靈

（1.寧夏大學(xué)物理電氣信息學(xué)院，寧夏銀川 750021；2.寧夏沙漠信息智能感知重點實驗室，寧夏銀川 750021）

基于近紅外高光譜成像的冷鮮羊肉表面細(xì)菌總數(shù)檢測

郭中華1，2，鄭彩英1，金 靈1

（1.寧夏大學(xué)物理電氣信息學(xué)院，寧夏銀川 750021；2.寧夏沙漠信息智能感知重點實驗室，寧夏銀川 750021）

細(xì)菌總數(shù)是反映肉品被污染和腐敗狀況的重要指標(biāo)，為尋找快速有效的冷鮮羊肉表面細(xì)菌總數(shù)無損檢測方法，本研究利用近紅外高光譜（900～1700nm）成像技術(shù)對20d貯藏期內(nèi)的冷鮮羊肉表面細(xì)菌總數(shù)進(jìn)行快速無損檢測。由80個樣本表面高光譜圖像獲取目標(biāo)區(qū)域反射光譜，采用多元散射校正和二階導(dǎo)數(shù)相結(jié)合（MSC+SD）的方法進(jìn)行預(yù)處理。將用主成分分析法對光譜降維后獲得6個特征波長作為輸入變量，分別采用偏最小二乘回歸（PLS）、誤差反向傳遞人工神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)（BP-ANN）和徑向基函數(shù)人工神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)（RBF-ANN）三種方法建立模型對冷卻羊肉表面細(xì)菌總數(shù)進(jìn)行預(yù)測，均取得較好預(yù)測結(jié)果，其中，神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)建模效果優(yōu)于PLS，預(yù)測效果最好的是RBF-ANN 模型，相關(guān)系數(shù)R為0.9988，均方根誤差RMSEP為0.2507。結(jié)果表明，NIR高光譜圖像技術(shù)可用于冷鮮羊肉表面細(xì)菌總數(shù)的快速無損檢測。關(guān)鍵詞：高光譜成像，冷鮮羊肉，細(xì)菌總數(shù)，無損檢測

我國是羊肉生產(chǎn)大國和消費大國，生產(chǎn)量和消費量均居世界第一。2006年，清真羊肉產(chǎn)業(yè)更是被列入寧夏回族自治區(qū)四大支柱產(chǎn)業(yè)之一，確定了其在農(nóng)業(yè)經(jīng)濟發(fā)展中戰(zhàn)略性主導(dǎo)地位。2008年，國家農(nóng)業(yè)部發(fā)布的《優(yōu)勢農(nóng)產(chǎn)品區(qū)域布局規(guī)劃》中，寧夏清真羊肉被確定為全國重點發(fā)展的11種優(yōu)勢農(nóng)產(chǎn)品之一[1-3]。隨著居民生活水平的提高，對健康、營養(yǎng)、安全等重視程度的增加，冷鮮羊肉由于其營養(yǎng)好，風(fēng)味佳，更是代表了未來羊肉類產(chǎn)品主流方向之一。然而，由于冷鏈系統(tǒng)不夠完善，在貯藏、加工等過程中，冷鮮羊肉表面微生物的大量繁殖不僅使冷卻肉的顏色、氣味等感官性質(zhì)發(fā)生改變，更會導(dǎo)致病原體、毒素的形成，如假單胞菌、乳酸菌、黃桿菌及腸桿菌等[4]，對人體健康造成危害。傳統(tǒng)的肉品表面細(xì)菌總數(shù)的檢測方法效率低、周期長、肉品破損嚴(yán)重，這已嚴(yán)重制約著我國羊肉產(chǎn)業(yè)的發(fā)展[5]。因此，對于肉類的質(zhì)量安全控制愈加嚴(yán)格的大環(huán)境下，對于準(zhǔn)確、高效、簡便的監(jiān)測手段的需求也愈加迫切，快速無損檢測技術(shù)具有重要現(xiàn)實意義。高光譜圖像技術(shù)同時具有光譜分辨能力和圖像分辨能力，克服了近紅外（NIR）光譜技術(shù)只能對農(nóng)產(chǎn)品的光譜信息進(jìn)行處理，而無法獲得被測樣的圖像信息的局限性[6]，可以同時獲取研究對象的外部品質(zhì)和內(nèi)部成分信息，是多信息融合檢測農(nóng)產(chǎn)品的首選技術(shù)[7]，近年來在農(nóng)畜產(chǎn)品內(nèi)外品質(zhì)檢驗中成為熱點之一，應(yīng)用高光譜成像處理技術(shù)對肉品質(zhì)檢測主要包括禽類表面污染檢測[8-9]、肉類表面大理石花紋[10-11]、肉類嫩度[12-13]、新鮮度[14]及含水量[15]等方面的檢測。在微生物檢測方面，陶斐斐等[16]以冷卻豬肉為對象，利用高光譜成像系統(tǒng)（400～1100nm）結(jié)合支持向量機的方法，研究其在14d貯藏期內(nèi)，表面菌落總數(shù)與高光譜圖像的關(guān)系，選取五個最佳波長，采用支持向量機的方法，對豬肉細(xì)菌總數(shù)進(jìn)行預(yù)測，相關(guān)系數(shù)r=0.87，取得了較好的預(yù)測效果，但相關(guān)報道多集中于禽類、豬肉及牛肉等，鮮有對羊肉的研究，且研究使用建模方法較為單一，未作對比研究。本實驗選取儲藏期內(nèi)冷鮮羊肉表面為研究對象，對其表面細(xì)菌總數(shù)進(jìn)行檢測。在近紅外高光譜成像系統(tǒng)（900～1700nm波長范圍）進(jìn)行實驗，采集樣品的光譜和圖像數(shù)據(jù)，獲取目標(biāo)區(qū)域反射光譜，確定最佳預(yù)處理方法并優(yōu)選特征波長，結(jié)合多種方法建立預(yù)測模型加以分析比較，實現(xiàn)冷鮮羊肉表面細(xì)菌總數(shù)的無損檢測，為高光譜成像技術(shù)應(yīng)用于羊肉安全質(zhì)量實時檢測系統(tǒng)開發(fā)提供理論依據(jù)和技術(shù)支持。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

羊肉 寧夏本地羊肉，將采回樣本分割為5cm× 5cm×2cm（長×寬×厚）的肉塊，共計80個樣本，裝入密封保鮮袋中，置于4℃冰箱中貯存待測，實驗期間依次對樣本進(jìn)行標(biāo)記與編號。

高光譜成像系統(tǒng)（900～1700nm） 主要由高光譜成像光譜儀（ImspectorN17E）、CCD相機（Zelos-285GV）、4個35W的鹵鎢燈（HSIA-LS-TDIF）、暗箱、移動平臺（PSA200-11-X）和筆記本電腦等部件組成，光譜分辨率5nm，共256個波段；LRH-150B生化培養(yǎng)箱 廣東省醫(yī)療器械廠；LDZM-80KSC立式壓力蒸汽滅菌鍋 上海申安醫(yī)療器械廠；HDLAPPARATUS超凈工作臺 北京東聯(lián)哈爾儀器制造廠。

1.2 微生物測定

微生物測定參考GB 4789.2-2010食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)法[17]。采用平板計數(shù)法對冷鮮羊肉樣本表面的細(xì)菌總數(shù)測定。

1.3 光譜測定

貯藏期20d測量期間，每天隨機從4℃冰箱內(nèi)拿出4個待測樣品，將其置于室溫下30min后采集樣品的高光譜圖像。光譜數(shù)據(jù)采集前系統(tǒng)設(shè)置：光譜范圍900～1700nm，曝光時間為10ms，曝光速度為15mm/s，掃描寬度為180mm，以確保圖像清晰不失真。在采集樣本圖像之前，為校正相機暗電流和室內(nèi)照明對圖像的影響，進(jìn)行黑白校正[18]。

式中，R為校正后的高光譜圖像，R0為原始高光譜圖像，W為白板圖像，D為暗圖像。后期實驗中所用數(shù)據(jù)的分析均是基于黑白校正后的高光譜圖像。

1.4 建模方法

1.4.1 BP-ANN建模 BP神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)由輸入層、隱含層、輸出層組成，是一種多層前饋神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)，信號向前傳遞，誤差向后傳播。輸入層包含6個節(jié)點，確定隱含層節(jié)點數(shù)為10，迭代次數(shù)為1000，目標(biāo)誤差為0.001。

1.4.2 RBF-ANN建模 RBF神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)屬于前向神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)類型，其基本思想是用RBF作為隱單元的基構(gòu)成隱藏層空間，隱含層對輸入變量進(jìn)行變換，將低維模式的輸入數(shù)據(jù)變換到高維空間內(nèi)，使得低維空間內(nèi)線性不可分的問題在高維空間內(nèi)線性可分。輸入層包含6個節(jié)點，隱含層節(jié)點數(shù)為10。

1.4.3 模型的評價參數(shù) 通過模型評價指標(biāo)相關(guān)系數(shù)（R）和預(yù)測集均方根誤差（RMSEP）來評價模型擬合精度和模型的預(yù)測能力。R值越接近1，RMSEP值越小，所建模型性能就越好。

1.5 數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計分析

1.5.1 光譜數(shù)據(jù)預(yù)處理 在光譜信息采集過程中，由于受到測量的條件、環(huán)境等因素的影響，光譜中除了樣本信息外還包含有噪聲信號，因此，在分析數(shù)據(jù)之前需要對原始光譜進(jìn)行預(yù)處理分析，獲得低背景干擾、高信噪比的分析信號，提高模型的檢測精度和穩(wěn)定性。本實驗中使用多元散射校正（MSC）、導(dǎo)數(shù)法（derivative）、標(biāo)準(zhǔn)正態(tài)變量變換（SNV）以及其相結(jié)合的算法等十種方法對原始光譜進(jìn)行預(yù)處理。最后代入建立羊肉表面的細(xì)菌總數(shù)（TVC）建立模型，通過評價指標(biāo)進(jìn)行比較分析。

1.5.2 主成分分析提取最優(yōu)波段 經(jīng)預(yù)處理后光譜，在900～1700nm波長范圍，共有256個波段，數(shù)據(jù)中必然存在大量的冗余信息，通過主成分分析（PCA），去除無關(guān)信息，提取有用的信息，降低數(shù)據(jù)分析的計算量，提高分析模型的精度，找出局部相關(guān)系數(shù)極大值或極小值所對應(yīng)的波長作為特征波長。實驗中選取的6個局部相關(guān)系數(shù)極大值和極小值作為特征波長，分別是987、1022、1106、1234、1440、1631nm建立冷鮮羊肉表面TVC預(yù)測模型，這6個主成分就能最大限度表征原始光譜的信息。

2 結(jié)果與分析

2.1 細(xì)菌總數(shù)測定

樣本的高光譜圖像數(shù)據(jù)采集后，立即對其進(jìn)行表面細(xì)菌總數(shù)標(biāo)準(zhǔn)值的獲取，按照1∶10比例梯度稀釋倒平板，恒溫培養(yǎng)48h后計數(shù)，取對數(shù)值作為參考數(shù)據(jù)，采用平板計數(shù)法獲得的冷鮮羊肉表面細(xì)菌總數(shù)的參考值統(tǒng)計如表1所示。共計80個樣本，隨機分為校正集和預(yù)測集，校正集為60個樣本，預(yù)測集為20個樣本，成3∶1的比例。

2.2 光譜數(shù)據(jù)處理與分析

2.2.1 光譜值的獲取 高光譜圖像數(shù)據(jù)分析采用ENVI4.6軟件平臺。對校正后羊肉樣本高光譜圖像，選取它表面一個目標(biāo)區(qū)域ROI并計算平均反射光譜作為樣本原始光譜，依次對所有樣本進(jìn)行處理，得到80個樣本的原始反射光譜曲線如圖1所示。

表1 貯藏期20d內(nèi)細(xì)菌總數(shù)參考測量值統(tǒng)計（log CFU/g）Table 1 Descriptive statistics for reference measurements in 20 days（log CFU/g）

圖1 樣本表面原始光譜圖Fig.1 Mean reflectance spectrum extracted from the hyperspectral image in ROI for all samples

2.2.2 光譜數(shù)據(jù)預(yù)處理 采用多種方法對原始光譜進(jìn)行預(yù)處理，通過建模評價指標(biāo)反映，可以得出細(xì)菌總數(shù)建模的最佳光譜預(yù)處理方法為多元散射校正和二階導(dǎo)數(shù)相結(jié)（MSC+SD），此預(yù)處理方法能夠很好地解決由基線漂移、散射等的影響。圖2為80樣本原始光譜經(jīng)MSC+SD預(yù)處理后所得的光譜圖，即TVC建模的最佳預(yù)處理光譜圖。

圖2 建模最佳預(yù)處理光譜圖（MSC+SD）Fig.2 The best preprocessed spectroscopy of prediction model（MSC+SD）

2.3 模型的建立及預(yù)測結(jié)果

本實驗使用PLS及神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)建立模型并進(jìn)行預(yù)測，比較各種建模方法預(yù)測細(xì)菌總數(shù)的能力。將經(jīng)MSC+SD預(yù)處理及主成分分析提取最優(yōu)波段后的光譜數(shù)據(jù)進(jìn)行建模，依據(jù)所建模型對預(yù)測集樣品進(jìn)行驗證。表2列出了使用PLS、BP-ANN以及RBF-ANN三種建模方法建立的冷鮮羊肉表面細(xì)菌總數(shù)的預(yù)測模型的評價參數(shù)數(shù)值。由表2可知，三種方法均取得了較好的預(yù)測效果，其相關(guān)系數(shù)（R）分別達(dá)到了0.9847、 0.9906和0.9988，預(yù)測集均方根誤差（RMSEP）分別為0.5414、0.3331和0.2507，且兩種神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)模型評價參數(shù)優(yōu)于PLS。

圖3分別給出了經(jīng)過三種建模方法預(yù)測的預(yù)測值和實際值之間的關(guān)系。從圖3中可以看出，當(dāng)預(yù)測值越接近理想預(yù)測線，說明其相關(guān)性越好，也說明所建模型的精度越高其中，由此可以看出圖3（c）所對應(yīng)的RBF-ANN模型預(yù)測值和實際值相關(guān)性最好，預(yù)測效果最佳，優(yōu)于其他兩種方法。

表2 PLS、BP-ANN和RBF-ANN建模比較Table 2 Comparison of PLS，BP-ANN and RBF-ANN

圖3 定量模型預(yù)測集相關(guān)圖Fig.3 Correlation diagram of prediction set in quantitative model

3 討論

通過三種預(yù)測模型PLS、BP-ANN和RBF-ANN與化學(xué)計量方法結(jié)合，均取得了較好的預(yù)測效果。分析比較可知，由于神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)通過訓(xùn)練使得誤差達(dá)到最小，且較好地解決了樣本數(shù)據(jù)的非線性關(guān)系，較大的提升了模型的精度，預(yù)測效果優(yōu)于PLS。其中，RBFANN由于具有自適應(yīng)確定、不易陷入局部最小、學(xué)習(xí)速度快和函數(shù)逼近能力強等特點，模型預(yù)測效果最好，其相關(guān)系數(shù)接近1，達(dá)到0.9988，而均方根誤差RMSEP較小。由此表明，RBF-ANN可以作為近紅外高光譜成像技術(shù)檢測冷鮮羊肉表面細(xì)菌總數(shù)的有效工具。利用NIR高光譜成像技術(shù)檢測冷卻羊肉表面細(xì)菌總數(shù)，較之于傳統(tǒng)的檢測方法，大大縮短了檢測時間，對肉品沒有破壞，且降低了人為檢測因素的影響，大大提升了檢測精度，這也將為高光譜成像技術(shù)應(yīng)用于羊肉安全質(zhì)量實時檢測系統(tǒng)開發(fā)提供參考。

4 結(jié)論

本實驗使用近紅外高光譜圖像技術(shù)及化學(xué)計量方法，對冷鮮羊肉表面的細(xì)菌總數(shù)的檢測方法進(jìn)行研究，對預(yù)處理后的樣品光譜數(shù)據(jù)進(jìn)行主成分分析降維。最后分別采用PLS、RBF-ANN和BP-ANN建立冷鮮羊肉表面細(xì)菌總數(shù)預(yù)測模型，結(jié)果表明RBF-ANN模型預(yù)測效果最好，相關(guān)系數(shù)達(dá)到0.9988，均方根誤差為0.2507。說明高光譜圖像技術(shù)結(jié)合化學(xué)計量學(xué)分析方法能夠?qū)崿F(xiàn)對冷鮮羊肉表面細(xì)菌總數(shù)的快速、無損檢測，為實際的生產(chǎn)和生活提供了重要的理論依據(jù)。接下來應(yīng)擴充實驗樣本的數(shù)量及多樣性，考慮結(jié)合羊肉內(nèi)部品質(zhì)對其進(jìn)行綜合評價，多波段比較分析，進(jìn)一步完善預(yù)測模型。

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Measurement of total viable count on chilled mutton surface based on near-infrared hyperspectral imaging technique

GUO Zhong-hua1，2，ZHENG Cai-ying1，JIN Ling1
（1.School of Physics and Electronic Information Engineering，Ningxia University，Yinchuan 750021，China；2.Ningxia Key Laboratory of Intelligent Sensing for Desert Information，Yinchuan 750021，China）

Total viable count（TVC） is an important index to reflect the contamination and corruption of meat.In order to look for a quick and efficient detection method of TVC on chilled mutton surface ，NIR hyperspectral（900 ～1700nm） imaging technique was applied to the nondestructive detective of TVC on chilled mutton surface，there were 80 samples stored 1 to 20 days in this study.Spectral reflectance curves obtained from the target area of hyperspectral imaging of all samples.Two mixed methods：multiplicative scatter correction adding second derivative （MSC+SD） for pretreatment were used.Then dimensions were reduced by principal component analysis （ PCA ） to get six characteristic wavelengths as the input variables.Three models were established by using partial least squares（PLS），BP artificial neural network（BP-ANN） and radial basis function artificial neural network （ RBF-ANN ） ， all of them had achieved better prediction results ， in which the neural network modeling was better than PLS.Overall，the best prediction result was based on the radial basis function artificial neural network （RBF-ANN） model，the correlation coefficient and the root mean square error of prediction were 0.9988 and 0.2507.Therefore ，hyperspecctral imaging technique could be used for the nondestructive detection of TVC on chilled mutton surface.

hyperspectral imaging；chilled mutton；total viable count；nondestructive detection

TS251.7

A

1002-0306（2014）20-0066-04

10.13386/j.issn1002-0306.2014.20.005

2014-02-24

郭中華（1973-），男，博士，教授，研究方向：電路與系統(tǒng)，信號處理與檢測。

寧夏自然科學(xué)基金課題（NZ14047）。