楊銀花 王佳寧 韓 雪 石安華 姚 政 譚麗萍 賈 勇 陳文慧

云南中醫(yī)學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，云南昆明 650500

膈下逐瘀湯對(duì)早期非酒精性脂肪肝大鼠肝臟脂質(zhì)代謝的影響

楊銀花 王佳寧 韓 雪 石安華 姚 政 譚麗萍 賈 勇 陳文慧

云南中醫(yī)學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，云南昆明 650500

目的 探討膈下逐瘀湯對(duì)早期非酒精性脂肪肝大鼠體重、肝濕重、肝指數(shù)、肝脂的影響。方法 采用高脂飼料法制備非酒精性脂肪肝大鼠模型，50只雄性SD大鼠隨機(jī)分為正常組(A組)20只、模型組20只(B組)、膈下逐瘀湯組(C組)10只。模型組、膈下逐瘀湯組給予高脂飼料（普通飼料基礎(chǔ)上加10%豬油，2%膽固醇）喂養(yǎng)持續(xù)12周，正常組給予基礎(chǔ)飼料喂養(yǎng),8周末開(kāi)始模型組給予生理鹽水灌胃，膈下逐瘀湯組給予膈下逐瘀湯灌胃。分別于造模第6周末、12周末測(cè)定正常組及模型組體重、肝濕重、肝指數(shù)、肝脂，光鏡觀察肝組織病理變化。結(jié)果 高脂飼料喂養(yǎng)6周，造模組大鼠體重、肝濕重、肝指數(shù)、肝質(zhì)較正常組顯著升高(P<0.05，P<0.01)，造模組肝組織病理切片觀察到單純性脂肪肝病理改變；12周末模型組、膈下逐瘀湯組與正常組比以上指標(biāo)改變更加明顯，第12周末膈下逐瘀湯組大鼠肝濕重、肝指數(shù)、肝質(zhì)比模型組顯著降低(P<0.01)。結(jié)論 高脂飼料喂養(yǎng)大鼠6周能成功復(fù)制非酒精性脂肪肝動(dòng)物模型；膈下逐瘀湯可改善模型大鼠肝臟脂質(zhì)代謝紊亂。

早期非酒精性脂肪肝；膈下逐瘀湯；肝指數(shù)；肝脂

非酒精性脂肪肝（NAFL）是一種無(wú)過(guò)量飲酒史，肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞脂肪變性和脂肪貯積為特征的臨床病理綜合征。隨著肥胖和代謝綜合征全球化的流行趨勢(shì)，NAFL已成為21世紀(jì)全球重要的公共健康問(wèn)題之一，亦是我國(guó)愈來(lái)愈重視的慢性肝病問(wèn)題[1]。該實(shí)驗(yàn)通過(guò)2012年10月—2013年1月間復(fù)制早期非酒精性脂肪肝大鼠模型，觀察活血化瘀方膈下逐瘀湯對(duì)早期非酒精性脂肪肝大鼠肝臟脂質(zhì)代謝的影響，為臨床應(yīng)用活血化瘀藥治療非酒精性脂肪肝提供理論依據(jù)。現(xiàn)報(bào)道如下。

1材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

該實(shí)驗(yàn)于2012年10月—2013年1月結(jié)束，雄性SD大鼠50 只，清潔級(jí)，體重（150±10）g，昆明醫(yī)科大學(xué)實(shí)物中心提供，生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK(滇）11-0004（5939180），飼養(yǎng)于云南中醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，室溫適應(yīng)性飼養(yǎng)l周后用于實(shí)驗(yàn)。

1.2 實(shí)驗(yàn)藥物

膈下逐瘀湯藥材購(gòu)自云南省中醫(yī)醫(yī)院。

1.3 試劑及儀器

10%中性福爾馬林液（云南中醫(yī)學(xué)院病理實(shí)驗(yàn)室配制），全自動(dòng)生化分析儀(上海市離心機(jī)械研究所)、BD．600LT-86L。

1.4 方法

1.4.1 早期非酒精性脂肪肝動(dòng)物模型制備及標(biāo)本的制備

1.4.1.1 早期非酒精性脂肪肝動(dòng)物模型制備 50只雄性SD大鼠隨機(jī)分為正常組20只、模型組20只、膈下逐瘀湯組10只。模型組、膈下逐瘀湯組給予高脂飼料喂養(yǎng)大鼠持續(xù)12周，正常組給予基礎(chǔ)飼料喂養(yǎng)。從第8周末開(kāi)始正常組、模型組給予生理鹽水灌胃，膈下逐瘀湯組給予膈下逐瘀湯灌胃。

1.4.1.2 標(biāo)本的制備 6周末從正常組及模型組各隨機(jī)抽取10只大鼠，12周末正常組、模型組、膈下逐瘀湯組各10只大鼠麻醉剖殺取血，處死后迅速取肝臟，肝左葉存于10%中性福爾馬林中用于病理切片，肝右葉凍存用于制備肝勻漿測(cè)肝脂。

1.5 觀察指標(biāo)及測(cè)定

大鼠體重，進(jìn)食量、飲水量，肝指數(shù)：肝濕重／大鼠體重；肝組織勻漿檢測(cè)肝脂水平（ELISA法）；HE染色光鏡下觀察肝臟組織形態(tài)學(xué)改變。

1.6 統(tǒng)計(jì)方法

實(shí)驗(yàn)結(jié)果用SPSS18.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s)表示,數(shù)據(jù)符合正態(tài)分布、方差齊用方差分析，方差不齊用非參數(shù)檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 一般情況

前4周正常組和模型組大鼠進(jìn)食情況正常，第5周后模型組進(jìn)食量及體重增加較快，大便稀軟，部分大鼠出現(xiàn)便溏現(xiàn)象。第8周末后模型組體重增長(zhǎng)放緩，進(jìn)食量減少，行動(dòng)較為遲緩。

2.2 早期非酒精性脂肪肝大鼠 6周末體重、肝濕重、肝指數(shù)、肝脂含量變化

模型組與正常組比大鼠體重、肝臟濕重、肝脂顯著升高（P<0.05或0.01），肝指數(shù)與正常組比有升高趨勢(shì)，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見(jiàn)表1。

2.3 早期非酒精性脂肪肝大鼠 6周末肝臟組織病理學(xué)

正常組大鼠肝索沿中央靜脈呈放射狀分布，肝細(xì)胞無(wú)水樣變性及脂肪變性；模型組大鼠肝細(xì)胞體積增大，質(zhì)內(nèi)可出現(xiàn)大小不等的脂肪空泡。

2.4 早期非酒精性脂肪肝大鼠 12周末肝指數(shù)、肝脂含量變化及膈下逐瘀湯干預(yù)作用

與模型組比較，膈下逐瘀湯組肝濕重、肝指數(shù)、肝脂顯著降低（P<0.01），體重稍有降低，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見(jiàn)表2。

3 討論

中醫(yī)認(rèn)為非酒精性脂肪性肝大多歸屬于“積聚”等范疇[2]。氣滯、痰阻、血瘀是其主要病理產(chǎn)物，而血瘀在脂肪肝的發(fā)生發(fā)展中起重要作用，活血化瘀是治療脂肪肝的基本法則[3]。該實(shí)驗(yàn)以高脂飼料復(fù)制早期非酒精性脂肪性肝大鼠模型，從瘀血這一病機(jī)出發(fā)，采用活血化瘀中藥膈下逐瘀湯進(jìn)行干預(yù)，觀察膈下逐瘀湯對(duì)早期非酒精性脂肪性肝大鼠肝臟脂代謝的影響。實(shí)驗(yàn)觀察到高脂飼料喂養(yǎng) 6周后，造模組大鼠體重（394.00±33.07）g、肝濕重（11.80±1.34）g 及肝甘油三酯（0.82±0.04）mmol/L、肝總膽固醇（4.90±0.37）mmol/L 較正常組顯著升高(P<0.05 或 0.01)，肝指數(shù)也有升高趨勢(shì)，表明采用高脂飼料喂養(yǎng)6周可成功復(fù)制早期NAFL大鼠模型，該方法造模具有制作方法簡(jiǎn)便、重復(fù)性好、價(jià)格低廉、動(dòng)物死亡率低、復(fù)制率高,病變有漸進(jìn)性發(fā)展過(guò)程,造模停止后病變逆轉(zhuǎn)緩慢便于藥物干預(yù)研究的優(yōu)點(diǎn),為國(guó)內(nèi)外最常用的脂肪肝模型[4]。該課題前期研究者張順貞[5]的前期實(shí)驗(yàn)用該造模方法成功復(fù)制脂肪肝大鼠模型，也證實(shí)了該造模方法的優(yōu)點(diǎn)。

表1 早期非酒精性脂肪肝大鼠 6周末體重、肝濕重、肝指數(shù)、肝脂含量變化（±s)

表1 早期非酒精性脂肪肝大鼠 6周末體重、肝濕重、肝指數(shù)、肝脂含量變化（±s)

注：與正常組比較，*P<0.05,**P<0.01。

組別 體重(g)肝濕重(g)A組(n=10)B組(n=10)337.±40.78（394.00±33.07）*9.14±1.47（11.80±1.34）*肝指數(shù)(%)肝甘油三脂(mmol/L) 肝總膽固醇(mmol/L)2.75±0.57 3.01±0.30 0.38±0.05（0.82±0.04）**2.51±0.39（4.90±0.37）**

表2 早期非酒精性脂肪肝大鼠12周末肝指數(shù)、肝脂含量變化及膈下逐瘀湯干預(yù)作用（±s)

表2 早期非酒精性脂肪肝大鼠12周末肝指數(shù)、肝脂含量變化及膈下逐瘀湯干預(yù)作用（±s)

注：與正常組比較，★P＜0.05，★★P＜0.01；與模型組比較，▲P＜0.05，▲▲P＜0.01。

組別 體重(g)肝濕重(g)A組(n=10)B組(n=10)C組(n=10)391.20±37.26（444.30±23.58）★★（439.38±36.37）★★10.44±1.24（14.22±1.62）★★（11.59±1.93）▲▲肝指數(shù)(%)肝甘油三脂(mmol/L) 肝總膽固醇(mmol/L)2.67±0.22（3.20±0.26）★★（2.63±0.33）▲▲0.24±0.08（1.39±0.10）★★（0.58±0.07）★★▲▲1.90±0.29（8.80±0.52）★★（3.73±0.25）★★▲▲

有學(xué)者研究表明：血瘀證在早期脂肪肝就已經(jīng)存在[6]，孫云霞[7]等實(shí)驗(yàn)證明活血化痰方高劑量組可明顯降低模型動(dòng)物肝臟中脂質(zhì)水平。該實(shí)驗(yàn)觀察到應(yīng)用膈下逐瘀湯臨床等效量干預(yù)4周后，膈下逐瘀湯組大鼠肝濕重（11.59±1.93）g、肝指數(shù)（2.63±0.33）%、肝甘油三酯（0.58±0.07）mmol/L、肝總膽固醇含量（3.73±0.250）mmol/L較模型組大鼠顯著降低(P<0.01)，脂肪肝病理改變減輕。該實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示：活血化瘀中藥膈下逐瘀湯臨床等效量可改善早期非酒精性脂肪肝大鼠肝臟脂質(zhì)代謝紊亂。另外有研究[8]顯示，血液黏度的與脂肪肝發(fā)生率呈正相關(guān)性，因此活血化瘀藥方膈下逐瘀湯治療脂肪肝有理論及實(shí)踐依據(jù)。至于活血化瘀方改善肝臟脂質(zhì)代謝的機(jī)制有待進(jìn)一步研究。

[1]范建高.非酒精性脂肪肝治療研究進(jìn)展[J].中華肝臟病雜,2008,16(11):801.

[2]李軍祥,陳治水,危北海.非酒精性脂肪性肝病的中西醫(yī)結(jié)合診療共識(shí)意見(jiàn)[J].中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合雜志,2011(2):198-199.

[3]蔡丹莉,陳芝蕓,嚴(yán)茂祥，等.膈下逐瘀湯對(duì)血瘀型非酒精性脂肪性[J].中國(guó)中醫(yī)藥科技,2012,19(4):303-305.

[4]翁小剛,朱曉新,楊慶,等.非酒精脂肪肝的實(shí)驗(yàn)研究進(jìn)展[J].中國(guó)試驗(yàn)方劑,2009,15(11):104-108.

[5]張順貞.去脂軟肝方對(duì)早期脂肪肝大鼠血液流變干預(yù)作用的[D].昆明:云南中醫(yī)學(xué)院,2012：1-66.

[6]張順貞，陳文慧．活血化瘀法對(duì)脂肪肝血液流變學(xué)的影響研究[J]．江西中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2011，23(3)：31-33．

[7]孫云霞,杜斌,王濤.活血化痰方治療大鼠非酒精性脂肪肝[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志,2012,18(22):236-239.

[8]陳麗娟.80脂肪肝患者的血脂及血液流變學(xué)分析[J].檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床,2011，8(8):966-967.

R285.5

A

1674-0742（2014）11（c）－0079-02

云南省運(yùn)用基礎(chǔ)研究“基于CD62p研究大鼠早期脂肪肝與血瘀證的相關(guān)性”（11FB075）。云南省運(yùn)用基礎(chǔ)研究“從微環(huán)境角度研究大鼠脂肪肝痰瘀的蛋白質(zhì)分子基礎(chǔ)”（13FZ093）。 國(guó)家自然學(xué)科學(xué)基金資助，基于血小板活化研究大鼠早期脂肪肝與血瘀證的相關(guān)性（81160492）。

楊銀花（1976-），女，云南祥云人，碩士（在讀），中西醫(yī)結(jié)合主治醫(yī)師，主要從事中西醫(yī)結(jié)合肝病基礎(chǔ)與臨床研究工作。

陳文慧，教授，碩士研究生導(dǎo)師，研究方向：中西醫(yī)結(jié)合肝病基礎(chǔ)與臨床研究。

2014-08-29)