戴衛(wèi)紅，李云霞，孫成宏

高效液相色譜法測(cè)定芪芨散中黃芩苷的含量

戴衛(wèi)紅，李云霞，孫成宏

目的建立芪芨散中黃芩苷的高效液相色譜測(cè)定方法。方法 采用Agilent C18(150 mm×4．6 mm，5μm)柱分離，甲醇－水－三乙胺(50∶50∶0．25)(磷酸調(diào)節(jié)pH值3．0)進(jìn)行洗脫，在277 nm處測(cè)定芪芨散中黃芩苷的含量。結(jié)果 黃芩苷在11．28～90．24μg/m l范圍內(nèi)質(zhì)量濃度與峰面積呈良好的線性關(guān)系，平均回收率為99．38%(相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差=0．78%，n=9)。結(jié)論 本方法準(zhǔn)確度高，簡(jiǎn)便，重現(xiàn)性好，可作為芪芨散的質(zhì)量控制方法之一。

芪芨散;黃芩苷;色譜法，高效液相

隨著現(xiàn)代生活節(jié)奏的不斷加快，人們的壓力不斷增大，飲食不規(guī)律、無(wú)節(jié)制以及幽門螺旋桿菌的感染等導(dǎo)致消化道疾病呈現(xiàn)出高發(fā)態(tài)勢(shì)，特別是胃及十二指腸潰瘍較多見，該病以反復(fù)發(fā)作的節(jié)律性上腹痛為特點(diǎn)，并常伴噯氣、泛酸、惡心、嘔吐，給患者帶來(lái)了極大痛苦。臨床治療消化性潰瘍常使用中西醫(yī)結(jié)合的方法，取得了良好的效果。芪芨散是由黃芪、黨參、茯苓、白及、黃芩等十味中藥經(jīng)提取加工制成的散劑，具有健胃止痛的作用，黃芩是其中的主要藥味之一，黃芩的有效藥用成分為黃芩苷，干燥品含黃芩苷量不低于9．0%［1］。為了有效控制芪芨散的質(zhì)量，本研究采用高效液相色譜法測(cè)定其有效成分黃芩苷的含量。

1 儀器與試劑

Agilent 1100型高效液相色譜儀(包括G1322型在線脫氣機(jī)，G1311A型四元泵，G1313A型自動(dòng)進(jìn)樣器，G1314A型紫外檢測(cè)器，A08化學(xué)工作站);色譜柱Agilent ZORBAX SB-C18(150 mm×4．6 mm，5μm);BT-211D型電子分析天平(北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司);pHS-3B精密pH計(jì)(上海雷磁儀器廠);CSB-3L-120型超聲波清洗器(天津市考德斯科技有限公司)。黃芩苷(中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào):110715-200514);芪芨散(筆者所在醫(yī)院制劑室，批號(hào):20120325，20120714，20121106)。甲醇和三乙胺為色譜純，其余試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱:Agilent C18(150 mm×4．6 mm，5μm);流動(dòng)相:甲醇 － 水 － 三乙胺(50∶50∶0．25)(磷酸調(diào)節(jié) pH 3．0);流速:1．0 ml/min;檢測(cè)波長(zhǎng):277 nm;柱溫:25℃;進(jìn)樣量:10 μl［2-6］。

2.2 溶液的配制

2.2.1 對(duì)照品溶液制備:精密稱取黃芩苷對(duì)照品22．56 mg，置100 ml量瓶中，用50%甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品儲(chǔ)備液［7-12］。精密量取0．5、1．0、1．5、2．0、2．5、3．0、3．5、4．0 ml對(duì)照品儲(chǔ)備液置10 ml量瓶中，加50%甲醇定容，搖勻，制備成一系列濃度為 11．28、33．84、45．12、56．40、67．68、78．96 和90．24 μg/ml的對(duì)照品溶液。

2.2.2 供試品溶液制備:取芪芨散1．0 g，精密稱定，置于50 ml量瓶中，加入50%甲醇約40 ml，超聲處理30 min，取出，放置至室溫，加入50%甲醇稀釋至刻度，搖勻，用0．45μm微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液，即得。

圖1 芪芨散高效液相色譜色譜圖

2.2.3 陰性樣品溶液制備:按處方比例稱取除黃芩以外的其余藥材，按芪芨散的制備工藝制成缺黃芩的陰性樣品;按“2．2．2”項(xiàng)下方法操作，制成缺黃芩的陰性樣品溶液。

2.3 系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 取對(duì)照品溶液、陰性樣品溶液和供試品溶液分別注入液相色譜儀，在該色譜條件下，黃芩苷的保留時(shí)間為12．2 min，測(cè)定無(wú)干擾，結(jié)果見圖1。

2.4 線性關(guān)系考察 精密吸取“2．2．1”項(xiàng)下的系列對(duì)照品溶液，注入高效液相色譜儀進(jìn)行分析，記錄黃芩苷色譜峰面積。以峰面積(Y)對(duì)濃度(X)進(jìn)行回歸運(yùn)算，黃芩苷的回歸方程為 Y=9．8456X－8.1418，r=0.9999，結(jié)果表明黃芩苷在 11.28～90.24μg/ml濃度范圍內(nèi)，濃度與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

2.5 精密度試驗(yàn) 取“2.2.1”項(xiàng)下的對(duì)照品溶液，按上述色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6次，測(cè)得黃芩苷色譜峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)為1.01%。

2.6 重復(fù)性試驗(yàn) 取芪芨散樣品(批號(hào):20120325)，按“2.2.2”項(xiàng)下的制備方法平行制備5份供試品溶液，分別測(cè)定含量。黃芩苷的含量測(cè)定結(jié)果RSD為1.85%(n=5)。

2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一供試品溶液(批號(hào):20100526)，分別在 0、2、4、6、8、10、12 h 進(jìn)樣，測(cè)定黃芩苷峰面積，RSD為1.63%(n=7)。結(jié)果表明供試品溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.8 加樣回收率測(cè)定 精密稱取已知含量的樣品(批號(hào):20120325)共9份，分別加入黃芩苷對(duì)照品儲(chǔ)備液3.2、4.0、4.8 m l，按“2.2.2”項(xiàng)下操作，各精密吸取10μl，注入液相色譜儀進(jìn)行分析，記錄黃芩苷峰面積。測(cè)得黃芩苷的平均回收率為99.38%(RSD=0.78%，n=9)，見表1。

表1 芪芨散中黃芩苷加樣回收率測(cè)定結(jié)果(n=9)

2.9 樣品含量測(cè)定 取3批芪芨散，按“2．2．2”項(xiàng)下方法操作，注入液相色譜儀進(jìn)行分析，外標(biāo)法計(jì)算黃芩苷的含量，結(jié)果見表2。

表2 芪芨散中黃芩苷含量測(cè)定結(jié)果(n=3)

3 討論

黃芩具有清熱燥濕、瀉火解毒、止血、安胎的作用［1］，方中加入黃芩主要治療郁熱型潰瘍。目前含有黃芩的藥品較多，為保證臨床用藥的安全有效，可以選擇測(cè)定黃芩苷的含量以控制藥品質(zhì)量［11-15］。

本研究參考《中國(guó)藥典》2010年一部，使用70%乙醇為提取溶劑，發(fā)現(xiàn)雜質(zhì)峰較多、分離度差，后經(jīng)改用50%甲醇超聲提取30 min，所得供試品溶液雜質(zhì)峰減少，主峰分離完全，取得滿意效果。

試驗(yàn)中曾使用甲醇－水－磷酸為流動(dòng)相［1］，分離效果很差，色譜峰拖尾嚴(yán)重，后經(jīng)試驗(yàn)，在水相中加入三乙胺，可以有效地減輕拖尾現(xiàn)象;pH對(duì)保留時(shí)間和峰形有較大影響，實(shí)驗(yàn)中用磷酸調(diào)節(jié)酸度，pH為3時(shí)，峰形較好，有效地增加了主峰與雜峰的分離度。

本方法操作簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、重復(fù)性好，可為含有黃芩的中藥制劑的質(zhì)量控制提供科學(xué)依據(jù)。

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High Performance Liquid Chromatography in Determ ination of Baicalin Content in Qiji San Medication

DAIWei-hong，LIYun-xia，SUN Cheng-hong(Departmentof Pharmacy，Bethune International Peace Hospital of PLA，Shijiazhuang 050082，China)

ObjectiveTo establish high performance liquid chromatography(HPLC)in detection of Baicalin content in Qiji San．MethodsThe contentwas detected in Agilent C18(150 mm ×4．6 mm，5 μm)column disassociation and elution with methanol-water-triethylamine(50∶50∶0．25，adjusted to pH 3．0 phosphoric acid at the 277 nm of detection wavelength．ResultsThe good linear correlation betweenmass concentration and peak areawas obtained in the concentration range of 11．28-90．24 μg/m l，and the average recovery was 99．38%(relative standard deviation=0.78%，n=9)．ConclusionThemethod is accurate and simple with good reproducibility，and can be used to control the quality of Qiji Sanmedication．

Qiji San;Baicalin;Chromatography，high performance liquid

R927．11

A

2095-140X(2014)05-0079-03

10．3969/j．issn．2095-140X．2014．05．022

050082石家莊，解放軍白求恩國(guó)際和平醫(yī)院藥劑科

2013-12-25 修回時(shí)間:2014-01-22)

·論著·