李知敏，孫彥敏，王 妹，彭 亮，*，任 鵬

（1.江西科技師范大學(xué)藥學(xué)院，江西南昌330013；2.西南科技大學(xué)生命科學(xué)與工程學(xué)院，四川綿陽621010）

江香薷不同極性提取物的抗菌活性研究

李知敏1，孫彥敏1，王 妹1，彭 亮1，*，任 鵬2

（1.江西科技師范大學(xué)藥學(xué)院，江西南昌330013；2.西南科技大學(xué)生命科學(xué)與工程學(xué)院，四川綿陽621010）

采用溶劑萃取法制備5種江香薷提取物，并用紙片法和肉湯稀釋法比較了這5種提取物分別對金黃色葡萄球菌、大腸桿菌和枯草芽孢桿菌等常見菌的體外抗菌效果，結(jié)果顯示江香薷的乙酸乙酯提取物對三種檢測細(xì)菌的MIC為15.60μg/mL，石油醚提取物、正丁醇提取物和醇溶物的MIC為31.25μg/mL，而水提物在實驗濃度范圍內(nèi)抗菌作用不明顯。由此可知江香薷具有抗菌活性，其中以乙酸乙酯提取物作用最顯著。

江香薷，抗菌，枯草芽孢桿菌，金黃色葡萄球菌，大腸桿菌

江香薷（Mosla chinensis‘Jiangxiangru’）為唇形科石薺苧屬植物，2010年版《中國藥典》收載的正品香薷之一，江西省道地藥材，分布于分宜、宜春、新余等地[1]。香薷始載于《名醫(yī)別錄》：“味辛微溫，主霍亂腹痛，吐下散水腫”，有發(fā)汗解表、祛暑化濕、利水消腫之功效，《本草綱目》云：“世醫(yī)治暑病，以香薷為首藥”。臨床用于治療惡寒發(fā)熱、頭痛無汗、腹痛吐瀉、小便不利等癥的暑濕感冒。江香薷化學(xué)成分含有黃酮類[2]及揮發(fā)油[3]，但有關(guān)其藥效活性研究非常缺乏，僅有極少量文獻(xiàn)報道江香薷中的揮發(fā)油成分具有抗菌、解痙、鎮(zhèn)靜和鎮(zhèn)痛作用[4-5]，而對江香薷其他成分的生物活性則未見研究報道。

現(xiàn)如今，隨著抗菌藥物的廣泛使用，耐藥細(xì)菌不斷出現(xiàn)，同時細(xì)菌的耐藥性也在不斷增強(qiáng)。耐藥菌，尤其是多重耐藥菌的不斷增加，給疾病的治療帶來了極大困難。因此，對細(xì)菌耐藥性的檢測、監(jiān)測和評價就非常必要且十分迫切。測定抗菌藥物在體外對微生物有無抑制作用的方法稱為藥物敏感性實驗，簡稱藥敏實驗[6]。細(xì)菌藥敏實驗常用方法按其效果可分為量藥物最低抑菌濃度（minimal inhibitory concentration，M IC）的肉湯稀釋法和瓊脂稀釋法，測量含藥紙片抑菌圈直徑大小的K-B（Kirby-Bauer）紙片瓊脂擴(kuò)散法及稀釋法和擴(kuò)散法相結(jié)合的E-test實驗（Epsilometer-test）[7]。本研究采用溶劑萃取法制備5種江香薷提取物，并用紙片法和肉湯稀釋法研究江香薷5種提取物對黃色葡萄球菌、大腸桿菌和枯草芽孢桿菌等常見菌的體外抗菌效果。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

江香薷藥材 購自江西黃慶仁棧大藥房；大腸桿菌（Escherichia.coli）、金黃色葡萄球菌（Staphylococcus. aureus）和枯草芽孢桿菌（Bacillus subtilis） 由西南科技大學(xué)生命科學(xué)與工程學(xué)院提供；蛋白胨、牛肉浸膏、營養(yǎng)瓊脂粉、MH培養(yǎng)基 廣東環(huán)凱微生物科技

有限公司。

FDU-1100型凍干機(jī) 日本東京理化；LR4000型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀 德國海道夫；BHC-1000II型生物安全柜 蘇凈安泰；SPX-100B-Z型生化培養(yǎng)箱 蘇州江東精密儀器有限公司；LDZM-40KCS型滅菌鍋 河南兄弟儀器公司。

1.2 實驗方法

1.2.1 江香薷提取物的制備[8]江香薷藥材以75%的乙醇溶液按1∶10料液比，于80℃下回流提取2h，重復(fù)3次，合并提取液，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至無醇味后，分別用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇依次萃取，每次萃取5次。合并各萃取液后，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去大部分萃取溶劑，將萃取液懸浮于少量蒸餾水中，繼續(xù)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去剩余溶劑，凍干后得江香薷的石油醚提取物（MCJ-1）、乙酸乙酯提取物（MCJ-2）、正丁醇提取物（MCJ-3）和醇溶物（MCJ-4）。經(jīng)過乙醇提取后的藥材殘渣以1∶10料液比的沸水回流提取2h，重復(fù)3次，合并提取液，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去大部分水后，凍干得江香薷水提物（MCJ-5）。

MCJ-1、MCJ-2、MCJ-3和MCJ-4用DMSO助溶，再用無菌水配制為10mg/m L的母液，MCJ-5直接用無菌水配制為相同濃度的母液。各提取物的母液在實驗前過濾除菌，再用無菌水分別稀釋至62.50、31.25、15.60、7.80μg/m L，DMSO在藥液中的終濃度最大不超過5%。1.2.2 紙片法檢測江香薷提取物的抑菌活性 用移液槍接種檢測菌（含菌量約107CFU/m L，接種量為0.1m L）到平板上，用涂布環(huán)涂布均勻，接種后的平板在室溫中干燥3～5m in，使培養(yǎng)基表面的水分吸收。把滅菌后的紙片（d=6mm）放于相應(yīng)的藥物濃度中浸泡，將浸泡后的紙片視為含藥濃度為相應(yīng)濃度。在37℃條件下培養(yǎng)24h，取出觀察并記錄抑菌圈大小，取其平均值。并以氨芐西林藥物在同條件下觀察其抑菌圈作為對照。以抑菌圈直徑＞15mm為高度敏感、10～15mm為中度敏感，7～9mm為低度敏感，低于7mm視為沒有抑菌效果。

1.2.3 最低抑菌濃度（MIC）的測定 取4支試管，分別加入2m L MH液體培養(yǎng)基。以二倍稀釋法配制各管抗菌藥物的最終濃度依次為62.50、31.25、15.60、7.80μg/m L。另取1支試管加入2m L MH液體培養(yǎng)基，作為對照。用移液槍吸取0.1m L檢測菌液加入到各試管中，所有的試管在35℃下孵育24h后觀察結(jié)果，以肉眼未見細(xì)菌生長的最低藥物濃度為該藥對檢測菌的MIC，并輔以對不同濃度的提取液處理過后的菌液涂布平板，進(jìn)行菌落計數(shù)，驗證結(jié)果。

2 結(jié)果與分析

2.1 江香薷提取物的抑菌活性

不同極性的江香薷提取物在62.50、31.25、15.60、7.80μg/m L四個濃度下，對大腸桿菌、金黃色葡萄球菌和枯草芽孢桿菌的抑制作用分別見表1～表3。

從表1～表3的數(shù)據(jù)可以看出，江香薷的水提物在實驗濃度范圍內(nèi)，對三種細(xì)菌無明顯的抑制作用。而其余4種江香薷提取物則具有不同程度的抑菌活性，而且隨著藥物濃度的增加，抑菌活性也有所增加。從抑菌圈大小來看，江香薷醇溶物對大腸桿菌和枯草芽孢桿菌的抑制作用顯著，江香薷正丁醇提取物對金黃色葡萄球菌的抑制作用顯著。

表1 江香薷提取物對大腸桿菌的抑菌圈直徑（mm±s，n=5）Table 1 The inhibition effect on Escherichia.coli of Mosla chinensis‘Jiangxiangru’extracts（mm，±s，n=5）

表1 江香薷提取物對大腸桿菌的抑菌圈直徑（mm±s，n=5）Table 1 The inhibition effect on Escherichia.coli of Mosla chinensis‘Jiangxiangru’extracts（mm，±s，n=5）

注：“-”表示無抑菌作用；表2、表3、表4同。

樣品 濃度（μg/mL）7.80 15.60 31.25 62.50 MCJ-1 9.64±0.32 9.65±0.88 9.85±0.65 11.67±0.97 MCJ-2 9.50±1.32 10.11±0.26 10.67±1.05 11.69±0.96 MCJ-3 8.95±0.61 9.53±0.81 9.67±0.67 11.59±1.23 MCJ-4 10.68±0.62 10.80±0.75 11.43±0.64 13.44±0.59 MCJ-5 - - - -

表2 江香薷提取物對金黃色葡萄球菌的抑菌圈直徑（mm，±s，n=5）Table 2 The inhibition effecton Staphylococcus.aureus of Mosla chinensis‘Jiangxiangru’extracts（mm，±s，n=5）

表2 江香薷提取物對金黃色葡萄球菌的抑菌圈直徑（mm，±s，n=5）Table 2 The inhibition effecton Staphylococcus.aureus of Mosla chinensis‘Jiangxiangru’extracts（mm，±s，n=5）

樣品 濃度（μg/mL）7.80 15.6 31.250 62.50 MCJ-1 8.30±0.36 8.79±0.91 10.03±1.27 11.93±1.69 MCJ-2 7.55±0.14 7.85±0.58 8.00±0.7 10.05±1.04 MCJ-3 7.63±0.32 10.30±1.28 11.65±0.82 12.49±1.55 MCJ-4 8.97±0.93 10.43±0.49 10.73±1.21 11.02±1.68 MCJ-5 - - - -

表3 江香薷提取物對枯草芽孢桿菌的抑菌圈直徑（mm，±s，n=5）Table 3 The inhibition effecton Bacillus subtilis of Mosla chinensis‘Jiangxiangru’extracts（mm，±s，n=5）

表3 江香薷提取物對枯草芽孢桿菌的抑菌圈直徑（mm，±s，n=5）Table 3 The inhibition effecton Bacillus subtilis of Mosla chinensis‘Jiangxiangru’extracts（mm，±s，n=5）

樣品 濃度（μg/mL）7.80 15.60 31.25 62.50 MCJ-1 7.92±0.49 9.83±0.71 10.20±0.62 11.15±0.84 MCJ-2 9.80±0.56 9.97±0.55 11.12±0.56 11.23±0.35 MCJ-3 10.53±0.55 10.89±0.42 11.21±1.52 11.62±0.33 MCJ-4 9.53±0.57 10.25±0.72 10.62±0.84 11.77±0.70 MCJ-5 - - - -

2.2 江香薷提取物的最低抑菌濃度

5種不同極性的江香薷提取物對三種檢測細(xì)菌的最低抑菌濃度（MIC）見表4。

Study on bacteriostatic activity of Mosla chinensis ‘Jiangxiangru’ extracts

LIZhi-m in1，SUN Yan-m in1，WANG M ei1，PENG Liang1，*，REN Peng2
（1.School of Pharmacy，Jiangxi Science&Technology Normal University，Nanchang 330013，China；2.School of Life Science and Engineering，Southwest University of Science and Technology，Mianyang 621010，China）

Five different polarity extracts from Mosla chinensis ‘Jiangxiangru’ were prepared by solvent extractionmethod. To compare the bacteriostatic activity of different extracts on Staphylococcus.aureus，Escherichia.coliand Bacillus subtilis，disk diffusion method and broth dilution method were used. The results showed that fourorganic solvent extracts had various bacteriostatic activities on the tested germ ，but the aqueous extracthad little bacteriostatic activity. In addition ，the ethyl acetate extract had the lowest MIC（minimal inhibitoryconcentration ） ，which was 15.60μg/mL. While ，MIC of petroleum ether extract and ethanol extract were31.25μg/mL. Thus，Mosla chinensis ‘Jiangxiangru’ had antibacterial activity，and the ethyl acetate extract hadthe most significant effect.

Mosla chinensis ‘Jiangxiangru’ ；bacteriostatic activity ；Bacillus subtilis ；Staphylococcus aureus ；Escherichia coli

表4 江香薷提取物的最低抑菌濃度（μg/mL）Table 4 Minimal inhibitory concentration（MIC）of Mosla chinensis‘Jiangxiangru’extracts（μg/mL）

TS201.2

：A

：1002-0306（2014）16-0115-03

10.13386/j.issn1002-0306.2014.16.016

2013－11－07 *通訊聯(lián)系人

李知敏（1980-），女，碩士研究生，研究方向：天然藥物化學(xué)。

江西省自然科學(xué)基金（20122BAB215017）；江西科技師范大學(xué)科研項目（KY2010ZY10）。