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（1.青海省動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，青海西寧 810001；2.四川農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院，四川雅安 625014）

青海省牦牛、藏羊萊姆病血清流行病學(xué)調(diào)查

馬睿麟1，王毅2，王曉潤(rùn)1，蔡金山1，沈艷麗1，王謝忠1，張茂華1

（1.青海省動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，青海西寧 810001；2.四川農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院，四川雅安 625014）

為了解青海省牛羊萊姆病感染情況，在2013年5月至10月間，我們對(duì)青海省27個(gè)縣（市、區(qū)）種畜場(chǎng)進(jìn)行了萊姆病抗體情況調(diào)查。共采集血清樣品1375份，其中牛血清樣品804份，藏系綿羊血清樣品571份，采用間接免疫熒光法檢測(cè)上述樣品中的萊姆病抗體，采用χ2檢驗(yàn)比較不同縣（市、區(qū)）陽性率之間的差異。結(jié)果顯示，牛血清陽性樣品為97份，陽性率12.06%；羊血清陽性樣品為57份，陽性率9.98%。各縣（市、區(qū)）之間陽性率存在差異，部分縣（市、區(qū)）陽性率差異顯著。部分地區(qū)牛羊抗體陽性率均較高，顯示了青海省可能存在萊姆病的自然疫源地。

萊姆??；間接免疫熒光試驗(yàn)；血清學(xué)調(diào)查；牦牛；藏羊

萊姆病是一種蜱傳染自然疫源性疾病，其具有分布廣、傳播快、發(fā)病率高和致殘率高的特點(diǎn)；自1977年美國(guó)STERE博士首次報(bào)道后，現(xiàn)已證實(shí)萊姆病是一種全球分布性疾病。牛羊被攜帶病原體的蜱叮咬而感染，可引起一系列臨床癥狀，如關(guān)節(jié)腫脹，跛行、母畜產(chǎn)奶降低或停止，出現(xiàn)繁殖障礙，影響動(dòng)物的生長(zhǎng)和生產(chǎn)，嚴(yán)重危害畜牧業(yè)的生產(chǎn)。同時(shí)，畜類也是病原攜帶體，該病感染途徑除通過蜱叮咬傳染外，也可通過感染動(dòng)物的尿、血、乳或未殺死螺旋體感染動(dòng)物的肉及內(nèi)臟時(shí)，人也會(huì)接觸感染，根據(jù)張哲夫、林濤[1]（中國(guó)萊姆病螺旋體生物媒介的初步調(diào)查）報(bào)道，此病人和動(dòng)物中都可垂直傳播。

病原學(xué)研究證實(shí)有17個(gè)?。ㄊ?、自治區(qū)）存在萊姆病的自然疫源地。在朱琦[2]等對(duì)新疆兵團(tuán)農(nóng)八師150團(tuán)的641只綿羊用IFA檢測(cè)，平均陽性率高達(dá)47%，對(duì)326頭牛用IFA檢測(cè)，平均陽性率達(dá)13.8%。特別是劉增加[3]等研究報(bào)告指出，在甘肅西部森林草原地帶，家畜（牦牛）萊姆病自然感染率高達(dá)70%、旱獺50%和野兔25%，報(bào)道指出受到萊姆病感染的家畜臨床表現(xiàn)不盡相同，表現(xiàn)各式各樣。這些提示說明，在新疆、甘肅、寧夏和陜西地區(qū)不僅廣泛存在人畜共患萊姆病，而且萊姆病病原—伯氏疏螺旋體可能存在不同的基因型別。

青海省位于我國(guó)西北，青藏高原的東北部，地形復(fù)雜，地貌多樣，全省海拔平均3000m，總面積72萬km2，人口530余萬，有漢、藏、回、土、撒拉、蒙古等民族?，F(xiàn)轄西寧、海東、海西、海北、海南、黃南果洛、玉樹8個(gè)州（地、市）和47個(gè)縣（區(qū)、市）。境內(nèi)野生動(dòng)物主要有藏羚羊、野牦牛、藏野驢、白唇鹿、普氏原羚和黑頸鶴等青藏高原特有品種和其他動(dòng)物品種共233種。全省可利用草場(chǎng)面積達(dá)57.8萬畝。除西寧、海東市外，其他6州在生產(chǎn)經(jīng)營(yíng)上以放牧為主，在全省農(nóng)牧業(yè)經(jīng)濟(jì)中占有很大的比例。

青海省人間感染萊姆病的報(bào)道近期也不斷出現(xiàn)，如劉光潤(rùn)[4]等（青海省三縣林區(qū)萊姆病血清流行病學(xué)調(diào)查），姜雙應(yīng)[5]等（青海省同德縣萊姆病血清流行病學(xué)調(diào)查分析），岳建寧[6]等（青海省部分林區(qū)萊姆病流行病學(xué)調(diào)查），孫毅[7]等（中華硬蜱、越原血蜱和青海血蜱經(jīng)期傳播萊姆病螺旋體的實(shí)驗(yàn)研究）說明，此病至少存在蜱與人、蜱與家畜牛羊存在水平傳播。同時(shí)，省內(nèi)亦棲息眾多的小型嚙齒動(dòng)物和蜱類昆蟲可能是萊姆?。ú鲜杪菪w）的自然循環(huán)宿主，綜上所述，青海省具備萊姆病的生態(tài)學(xué)和生物學(xué)基礎(chǔ)。

為了解省內(nèi)牛羊萊姆病感染狀況，2013年5—10月，筆者選擇了在省內(nèi)27個(gè)生產(chǎn)方式以牧為主和農(nóng)牧各半的縣（區(qū)、市、種畜場(chǎng)）進(jìn)行采樣，共采集牦牛血清804份，藏系綿羊血清571份，以了解采樣地區(qū)牛、羊萊姆病的自然感染情況。

1 材料

1.1 采集省內(nèi)27個(gè)縣（區(qū)、市、種畜場(chǎng)）牦牛，藏系綿羊靜脈血5mL，5ml離心管，移液器，離心機(jī)等。

2 方法

2.1 樣品采集和處理

對(duì)所采牛、羊血靜置后離心，分離出血清、血球后置4 oC冰箱待檢。對(duì)其進(jìn)行編號(hào)待檢。

2.2 樣品檢測(cè)方法與結(jié)果判定

檢測(cè)方法：血清抗體檢測(cè)采用間接免疫熒光法，其中萊姆病抗原片及陽性血清均購(gòu)自軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院微生物流行病研究所。間接免疫熒光法操作程序：將血清用PBS從1∶16 開始稀釋，取稀釋好的血清滴加于抗原片孔中，37 oC孵育45 min，取出用PBS及蒸餾水沖洗晾干，點(diǎn)上FITC標(biāo)記的熒光二抗，37 oC孵育45 min，沖洗晾干后，置熒光顯微鏡下觀察。

應(yīng)用χ2檢驗(yàn)比較不同縣（區(qū)、種畜場(chǎng)）陽性率的差異，統(tǒng)計(jì)處理應(yīng)用SPSS（10.0）軟件。

3 結(jié)果與分析

3.1 牛羊血清中萊姆病抗體檢測(cè)結(jié)果

此次共采集27個(gè)縣（是、區(qū)、種畜場(chǎng)）牛血804份，檢測(cè)到97份標(biāo)本陽性，藏系綿羊血清571份，檢測(cè)到57份標(biāo)本陽性，基本涵蓋了省內(nèi)放牧地區(qū)，牛羊總陽性率為11.2%。陽性結(jié)果見圖1。

圖1萊姆病血清抗體檢測(cè)結(jié)果

3.2 不同縣（市、區(qū)、場(chǎng)）抗體陽性率的χ2分析

此次檢測(cè)的27個(gè)縣中，有森林地貌的湟中縣、大通種牛場(chǎng)、民和縣、互助縣、循化縣、門源縣、治多縣陽性率為高，達(dá)到10%以上，這與上述地區(qū)廣泛分布青海血蜱有一定的聯(lián)系；而以草原及荒漠草原地貌的德令哈市、都蘭縣、天峻縣、三角城種羊場(chǎng)、同德縣、曲麻萊縣有草原革蜱大量分布，有極強(qiáng)的關(guān)聯(lián)性，上述各縣陽性率明顯高于其他縣（p＜0.05），不同地區(qū)血清陽性率分布情況具體見表1。

4 討論

萊姆病是一種通過蜱傳染的自然疫源性人畜共患疾病，主要傳播媒介昆蟲是蜱，其他傳播主要通過動(dòng)物和人類、人類之間傳播。由于青海省位于青藏高原東麓，地貌千變?nèi)f化，既有適應(yīng)青海血蜱生長(zhǎng)的森林地帶，也有適應(yīng)草原革蜱生長(zhǎng)的高原草場(chǎng)、荒漠草場(chǎng)；況且牛羊全為放牧飼養(yǎng)，蜱蟲接觸機(jī)會(huì)多，叮咬牛羊，給萊姆病的傳播提供了有利的條件，綜合本次調(diào)查結(jié)果，在省內(nèi)放牧地區(qū)牛羊感染率均較高，如何防控家畜萊姆病是我們必須重視的課題，如何避開蜱蟲放牧，在牲畜圈舍搞好滅蜱措施，對(duì)發(fā)病嚴(yán)重的家畜治療等，都是今后要做的工作。

表1不同地區(qū)血清陽性率分布情況

筆者在青海省內(nèi)從宿主動(dòng)物（嚙齒動(dòng)物）、傳播媒介（各類蜱蟲）和易感家畜（牛羊）三個(gè)流行環(huán)節(jié)進(jìn)行系統(tǒng)的分子流行病學(xué)調(diào)查后，獲得自然疫源地的本底資料，意在闡明青海省內(nèi)是否存在新的伯氏疏螺旋體基因型，是否存在與國(guó)內(nèi)其他地區(qū)不同的媒介蜱種，以便根據(jù)已知菌株與測(cè)定菌株間的差異來鑒定未知菌株，準(zhǔn)確地判定自然發(fā)生的疾病流行和人為的生物襲擊，為病原體快速識(shí)別和來源追蹤奠定基礎(chǔ)。

[1] 張哲夫，林濤.中國(guó)萊姆病螺旋體生物媒介的初步調(diào)查[J].中華流行病學(xué)雜志，1992，1（5）：42.

[2] 朱琦，王東.新疆兵團(tuán)農(nóng)八師150團(tuán)牛羊萊姆病的血清流行病學(xué)調(diào)查[J].石河子大學(xué)學(xué)報(bào)，2006，8（6）：457-459.

[3] 劉增加，華滿堂，石淑珍.西北部分地區(qū)萊姆病與人、家養(yǎng)動(dòng)物、嚙齒動(dòng)物關(guān)系的研究[J].醫(yī)學(xué)動(dòng)物防制；2000，16（6）：298-301.

[4] 劉光潤(rùn)，馬秀蘭.青海省三縣林區(qū)萊姆病血清流行病學(xué)調(diào)查[J].中國(guó)公共衛(wèi)生學(xué)報(bào)，1995，4（6）：202.

[5] 姜雙應(yīng)，易虎.青海省同德縣萊姆病血清流行病學(xué)調(diào)查分析[J].青海醫(yī)藥雜志，2001，12（31）：51-52.

[6] 岳建寧，石燕.青海省部分林區(qū)萊姆病流行病學(xué)調(diào)查[J].中國(guó)媒介生物學(xué)及控制雜志，2009，4（4）：358.

[7] 孫毅，許榮滿，劉增加，等.中華硬蜱、越原血蜱和青海血蜱經(jīng)期傳播萊姆病螺旋體的實(shí)驗(yàn)研究[J].昆蟲學(xué)報(bào)，2003，46（6）：667-673.

Seroepidemiological Investigation of Lyme Disease in Yak and Sheep in Qinghai province

Ma Ruilin1，Wang Yi2，Wang Xiaorun1，Cai Jingshan1，Sheng Yanli1，Wang Xiezhong1，Zhang Maohu1
（1.Qinghai Center for Animal Disease Control and Prevention，Xining，Qinghai 810001；2.College of Animal Sciences and Technology，Sichuan Agricultural University，Ya’an，Sichuan 625014）

In order to understand the infection status of Lyme disease in yak and tibetan sheep in Qinghai province，from May to October，2013，1375 serum samples were collected，including 804 yak serum samples and 571 Tibetan sheep serum samples for investigation of Lyme disease antibodies in the breeding animal farms in the province’s 27 counties（city or district）by indirect immunofuorescence assay，χ2was used to compare differences of the positive rates among different counties（city or district）. The results showed，yak serum positive samples was 97，with a positive rate of 12.06%；Tibetan sheep serum positive samples was 57，with a positive rate of 9.98%. The positive rates were different among the investigated counties（city， district），The positive rates in yak and Tibetan sheep in some counties were higher in the province， suggesting that there may be a natural focus of Lyme disease in Qinghai province.

Lyme disesae；IFA；seroepidemiology；yak；Tibetan sheep

S813.6

：B

：1005-944X（2014）06-0062-03