陳先國(guó)，潘騰飛，劉 祎，蘇 陽，梁朝朝

Raptor和Rictor在慢性前列腺炎和前列腺癌的表達(dá)及意義

陳先國(guó)，潘騰飛，劉 祎，蘇 陽，梁朝朝

免疫組化檢測(cè)Raptor和Rictor在慢性前列腺炎（CP）及前列腺癌（PCa）中的表達(dá)。Raptor和Rictor在CP和PCa組織中均有不同程度的表達(dá)；與CP組織比較，PCa中Raptor和Rictor的表達(dá)均明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。Raptor和Rictor在CP惡變?yōu)镻Ca過程中具有重要的作用，為PCa的預(yù)防和分子靶向治療提供理論依據(jù)。

慢性前列腺炎；前列腺癌；Raptor；Rictor

慢性前列腺炎（chronic prostatitis，CP）是男性常見病和多發(fā)病，CP由于發(fā)病機(jī)制尚不明確，在某些不確定因素的存在下，前列腺處于長(zhǎng)期或過度反應(yīng)時(shí)，炎癥反應(yīng)無法轉(zhuǎn)變成內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定狀態(tài)［1］，會(huì)引起機(jī)體的嚴(yán)重后果。前列腺癌（prostate cancer，PCa）是西方國(guó)家男性最常見的惡性腫瘤，在美國(guó)其發(fā)病率居男性腫瘤的第一位［2］。目前，PCa的病因仍然不清，可能與遺傳、年齡、生活方式、環(huán)境因素等有關(guān)。哺乳動(dòng)物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）有2種不同的復(fù)合體mTORC1和mTORC2，mTORC1主要由mTOR和mTOR調(diào)節(jié)相關(guān)蛋白（Raptor）組成［3］，mTORC2主要由mTOR和雷帕霉素不敏感性mTOR（Rictor）［4］組成。mTOR在調(diào)節(jié)機(jī)體的代謝、生長(zhǎng)、增殖和細(xì)胞周期等過程中起關(guān)鍵作用。目前發(fā)現(xiàn)約20%的癌癥由慢性感染或炎癥所引發(fā)，其中包括肝癌、結(jié)腸癌、胃癌以及膀胱癌等［1］。最近研究［5］顯示CP在PCa發(fā)生發(fā)展中起重要作用。該文就mTOR復(fù)合體在CP和PCa的表達(dá)做一研究，為PCa的預(yù)防和治療提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料及主要試劑CP 42例和PCa 38例標(biāo)本均來自安徽醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院病理科存檔蠟塊，所有病理結(jié)果均由我院病理科2位資深醫(yī)師進(jìn)行診斷。Raptor及Rictor兔抗人抗體購自美國(guó)Cell Signaling公司。

1.2 方法

1.2.1 免疫組化 采用SP法，染色步驟按說明書進(jìn)行：組織切片脫蠟、水化；PBS洗3次，每次5 min；微波爐抗原修復(fù)；H2O2去除內(nèi)源性過氧化物酶活性，PBS洗3次，每次5 min；滴加兔抗人Raptor及Rictor抗體（1∶500），37℃恒溫孵育1h；PBS沖洗3次，每次5 min；加生物素標(biāo)記二抗，37℃恒溫孵育1h；PBS沖洗3次，每次5 min；DAB顯色，蘇木精復(fù)染，中性樹膠封片、鏡檢。

1.2.2 結(jié)果判斷 在高倍鏡下，對(duì)每張切片隨機(jī)選擇10個(gè)視野，凡細(xì)胞膜及細(xì)胞質(zhì)出現(xiàn)棕黃色顆粒的細(xì)胞計(jì)為陽性細(xì)胞。將陽性細(xì)胞所占百分比進(jìn)行評(píng)分，0分：0%；1分：＜10%；2分：10%～50%；3分：＞50%；將細(xì)胞染色強(qiáng)弱進(jìn)行評(píng)分，0分：細(xì)胞質(zhì)/細(xì)胞膜上無棕黃色顆粒；1分：細(xì)胞質(zhì)/細(xì)胞膜上有淡棕黃色顆粒；2分：細(xì)胞質(zhì)/細(xì)胞膜上有染色較清晰的棕黃色顆粒，染色介于強(qiáng)弱之間；3分：細(xì)胞質(zhì)/細(xì)胞膜上有大量深棕黃色顆粒。綜合上述結(jié)果，將染色強(qiáng)度定為4級(jí)：0分為陰性；2分為弱陽性；3～4分為陽性；5～6分為強(qiáng)陽性。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS 11.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，等級(jí)資料采用秩和檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 Raptor在CP和PCa組織中的表達(dá)免疫組化顯示Raptor在CP或PCa中的細(xì)胞質(zhì)/細(xì)胞膜表達(dá)為棕黃色顆粒。Raptor在CP組織中陰性表達(dá)9例、弱陽性表達(dá)24例、陽性表達(dá)7例、強(qiáng)陽性表達(dá)2例；在PCa組織中陰性表達(dá)0例、弱陽性表達(dá)6例、陽性表達(dá)11例、強(qiáng)陽性表達(dá)21例，Raptor在CP和PCa組織中表達(dá)的陽性率分別為78.6%和100.0%；與CP組織比較，Raptor在PCa中的表達(dá)明顯升高（P＜0.05）。見圖1。

2.2 Rictor在CP和PCa組織中的表達(dá)免疫組化顯示Raptor在CP或PCa中的細(xì)胞質(zhì)/細(xì)胞膜表達(dá)為棕黃色顆粒。Rictor在CP組織中陰性表達(dá)13例、弱陽性表達(dá)22例、陽性表達(dá)6例、強(qiáng)陽性表達(dá)1例；Rictor在PCa組織中陰性表達(dá)5例、弱陽性表達(dá)7例、陽性表達(dá)12例、強(qiáng)陽性表達(dá)14例，Rictor在CP和PCa組織中表達(dá)的陽性率分別為69.0%和86.8%；與CP組織比較，Rictor在PCa中的表達(dá)明顯升高（P＜0.05）。見圖1。

圖1 Raptor、Rictor在CP、PCa組織中的表達(dá) ×400

3 討論

流行病學(xué)、組織病理學(xué)以及分子生物學(xué)研究［6］顯示，CP患者在各種損傷性因素刺激下，可能轉(zhuǎn)變?yōu)榍傲邢偕掀?nèi)瘤變（prostatic intraepithelial neoplasia，PIN），并最終惡變?yōu)镻Ca。Daniels et al［7］發(fā)現(xiàn)CP和PCa的發(fā)生發(fā)展明顯呈正相關(guān)。CP患者患有PCa的風(fēng)險(xiǎn)明顯提高，慢性炎癥刺激時(shí)間越長(zhǎng)，患PCa的風(fēng)險(xiǎn)可能性越高。MacLennan et al［8］發(fā)現(xiàn)約20%的CP患者5年內(nèi)被確診為PCa，而非CP患者5年內(nèi)患PCa的僅占6%。這些研究從流行病學(xué)上均提示CP促進(jìn)PCa的發(fā)生發(fā)展。在組織學(xué)上，慢性炎癥刺激常常在外周帶前列腺上皮發(fā)生增生性萎縮（proliferative inflammatory atrophy，PIA）［9］，而外周帶也是PCa好發(fā)部位，這些PIA區(qū)域進(jìn)而進(jìn)展為PIN和PCa［6］。分子生物學(xué)上，有研究［5］表明，炎癥細(xì)胞刺激后釋放一些細(xì)胞因子，與前列腺上皮細(xì)胞DNA相互作用，引起基因變化，如基因重排、點(diǎn)突變和刪除等，最終導(dǎo)致PCa。PCa的發(fā)生可能與微生物感染及其形成的炎癥反應(yīng)有關(guān)，有學(xué)者對(duì)小鼠進(jìn)行多次盆底乳酸注射誘發(fā)前列腺炎癥，取組織標(biāo)本進(jìn)行HE染色，結(jié)果顯示，標(biāo)本中除炎癥組織外，還觀察到了較為明顯的腺泡上皮增生，類似于人類的PIN。

mTOR是機(jī)體炎癥、營(yíng)養(yǎng)、能量、生長(zhǎng)因子等感受器，感受外界的刺激，促進(jìn)mTOR活化，導(dǎo)致癌癥的發(fā)生。最近研究［10－12］顯示，mTOR復(fù)合體調(diào)控機(jī)體炎癥反應(yīng)，當(dāng)炎癥信號(hào)刺激機(jī)體后，通過mTORC1和mTORC2信號(hào)途徑調(diào)控下游靶蛋白從而對(duì)炎癥產(chǎn)生影響，此外使用mTORC1和mTORC2雙重抑制劑也能明顯減輕炎癥反應(yīng)，這進(jìn)一步證實(shí)了mTOR調(diào)控機(jī)體炎癥反應(yīng)［13］。2013年JCI在線發(fā)表研究［14］成果：IL-6在炎癥轉(zhuǎn)變?yōu)槟[瘤過程中起關(guān)鍵作用，其機(jī)制是IL-6結(jié)合其亞基GP130而激活mTORC1信號(hào)途徑的，使用mTORC1抑制劑后發(fā)現(xiàn)減少了腫瘤的血管生成和細(xì)胞增殖。

本研究顯示Raptor和Rictor在CP和PCa組織中均有不同程度的表達(dá)。與CP相比，PCa中Raptor和Rictor的表達(dá)明顯升高，表明mTOR復(fù)合體在CP惡變?yōu)镻Ca過程中發(fā)揮重要作用，mTOR復(fù)合體的異?；罨赡苁荘Ca發(fā)生發(fā)展過程中一個(gè)早期的分子事件?；蛟S可以解釋Majumder et al［15］的發(fā)現(xiàn)：對(duì)mTOR高度活化的轉(zhuǎn)基因小鼠使用mTOR抑制劑，小鼠的PIN變完全消失。

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AbstarctThe expression of Raptor and Rictor in chronic prostatitis and prostate cancer was examed by immunohistochemical.Raptor and Rictor were differently expressed in chronic prostatitis and prostate cancer；the expression of Raptor and Rictor in prostate cancer was markedlyhigher than chronic prostatitis（P＜0.05）.Raptor and Rictor play important roles chronic prostatitis malignant to prostate cancer，and provide the theory base for the prevention and molecular targeted therapy of prostate cancer.

The expression and significance of mTOR complex in the chronic prostatitis and prostate cancer

Chen Xianguo，Pan Tengfei，Liu Yi，et al
（Dept of Urology，The First Affiliated Hospital of Anhui Medical University，Hefei 230022）

chronic prostatitis；prostate cancer；Raptor；Rictor

R 697＋.33

A

1000－1492（2014）04－0545－03

2013－12－20接收

國(guó)家自然科學(xué)基金（編號(hào)：81370856）；教育部博士點(diǎn)基金（編號(hào)：20113420110003）；安徽省自然科學(xué)基金（編號(hào)：1208085MH138）

安徽醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院泌尿外科，合肥 230022

陳先國(guó)，男，博士，主治醫(yī)師；梁朝朝，男，教授，主任醫(yī)師，博士生導(dǎo)師，責(zé)任作者，E-mail：liang_chaozhao＠163.com