趙東海 李夢璐 袁 臻 羅維蕓 顧麗霞

(吉林醫(yī)藥學院病理學教研室，吉林 吉林 132013)

銅藻是我國淺海植被的珍貴物種，主要分布于遼寧、浙江、福建、廣東等地，是藻膠工業(yè)的優(yōu)質餌料，因富含有益的生物要素而被廣泛應用到醫(yī)藥、食品、飼料和有機肥料中〔1〕。褐藻中含有大量的萜類化合物，主要有倍半萜和二萜類化合物〔2～4〕。有研究報道，從銀杏中分得的萜類化合物能夠顯著增加大鼠紋狀體和邊緣系統(tǒng)多巴胺的含量，對多巴胺(DA)代謝有一定的抑制作用，表明萜類化合物具有抗抑郁活性〔5，6〕。銅藻屬于褐藻類，具有豐富的資源優(yōu)勢，但目前有關銅藻總萜提取物的抗抑郁作用研究尚未見報道。本文對總萜提取物抗抑郁活性進行研究，為銅藻抗抑郁中藥研究提供實驗基礎和理論依據(jù)。

1 資料與方法

1.1材料 雄性Balb/c小鼠(18～22 g)，購自浙江省實驗動物中心。自然晝夜光照，自由飲水、攝食，適應性喂養(yǎng)5 d后進行實驗。 銅藻：采集于舟山市海域。鹽酸氟西汀(美國Lilly公司)用前用2%羧甲基纖維素鈉水溶液配制成1 g/L，備用；乙醇、羧甲基纖維素鈉等為分析純。

1.2檢測指標及方法

1.2.1銅藻總萜提取物的制備 銅藻總萜提取物由浙江海洋學院食品與藥學學院提供，制備工藝參照文獻〔7～11〕。將干燥的銅藻粉碎過80目篩，8倍量90%乙醇浸泡2 h后，超聲波輔助萃取30 min，80℃水浴提取2 h，連續(xù)提取3次，合并提取液，回收溶劑至浸膏，過濾，收集濾液。連續(xù)提取3次，合并濾液，蒸發(fā)至浸膏狀?？傒铺崛∥锝酄钗镔|用2%羧甲基纖維素鈉溶液分別配制一定的濃度，備用。

1.2.2實驗動物分組及藥品處理 取雄性小鼠100只，實驗室適應性飼養(yǎng)3 d，隨機抽取50只分別納入空白組、鹽酸氟西汀、銅藻總萜提取物低、中、高劑量組(每組10只)。鹽酸氟西汀劑量為30 mg/kg；銅藻總萜提取物低、中、高劑量分別為100、200、400 mg/kg；空白組灌服同體積的2%羧甲基纖維素鈉水溶液，連續(xù)灌胃7 d，1次/d。于末次給藥后1 h進行小鼠強迫游泳、懸尾實驗。實驗結束后處死小鼠，分離小鼠下丘腦利用高效液相-電化學法(HPLC-ECD)檢測下丘腦5-羥色胺(HT)水平。

1.2.3小鼠強迫游泳實驗 將小鼠放入XSC-小鼠恒溫游泳儀內(水深10 cm、直徑34 cm的桶內，水溫25℃±2℃)，觀察6 min內小鼠游泳情況，統(tǒng)計小鼠后4 min內游泳累積不動時間(即小鼠停止掙扎或小鼠呈漂浮狀態(tài)、四肢有輕微動作以保持頭部在水面)〔12〕。

1.2.4小鼠懸尾實驗 距小鼠尾尖部約1 cm處用膠布貼于懸尾箱(30 cm×30 cm×25 cm)支架上，使小鼠呈倒掛狀態(tài)，其頭部離箱底約5 cm，1次懸掛2只小鼠，中間用隔板隔開。懸掛時間為6 min，統(tǒng)計小鼠后4 min內懸尾累積不動時間(即小鼠停止掙扎不動或無任何活動)〔13〕。

1.2.5小鼠自主活動實驗 于給藥前和末次給藥后1 h檢測。采用XZC-4小鼠自主活動測定儀，將小鼠放入測定儀適應5 min后開始測定，以10 min 內給藥前后的活動次數(shù)之差為指標，比較各組小鼠自主活動強度。

1.2.6HPLC-ECD測定小鼠小腦(5-HT)水平 每100 mg 腦組織中加入200 μl 冰冷HClO4(0.4 mol/L)，冰浴超聲勻漿，避光4℃靜置60 min，離心20 min(4℃，4 500 r/min)，取上清，加入上清半量體積的混合液(檸檬酸鉀0.2 mol/L，K2HPO40.3 mol/L和 EDTA 0.2 mol/L)，震蕩混勻10 min，避光4℃靜置60 min，再次離心20 min(4℃，4 500 r/min)，取上清，HPLC-ECD測定5-HT水平。

2 結 果

2.1銅藻總萜提取物對小鼠強迫游泳不動時間的影響 與空白組〔(147.6±14.8)s〕相對比，銅藻總萜類提取物中、高劑量(400 mg/kg)能降低小鼠強迫游泳的不動時間〔(118.3±10.7)、(109.4±9.9)s〕(P<0.05)。低劑量組〔(135.7±13.4)s〕未顯示降低；鹽酸氟西汀組小鼠不動時間〔(78.5±4.9)s〕明顯縮短(P<0.001)。

2.2銅藻總萜提取物對小鼠懸尾不動時間的影響 與空白組〔(135.7±15.2)s〕比較，銅藻總萜提取物高、中、低劑量均能夠降低小鼠懸尾的不動時間〔(98.7±8.6)、(107.8±9.4)、(109.4±10.4)s〕，并且隨著劑量增大，不動時間減少越明顯，其中高劑量組，小鼠懸尾不動時間減少最明顯。而對照藥鹽酸氟西汀組小鼠不動時間〔(65.2±5.6)s〕明顯縮短(P<0.001)。

2.3銅藻總萜提取物對小鼠自主活動的影響 與空白組〔(28±64)次〕比較，鹽酸氟西汀組小鼠自主活動次數(shù)〔(123±59)次〕顯著減少(P<0.001)，銅藻總萜提取物高劑量組小鼠自主活動次數(shù)〔(114±86)次〕明顯減少(P<0.01)，低中劑量組〔(46±74)、(88±39)次〕略減少(P<0.05)。

2.4銅藻總萜提取物對小鼠小腦5-HT含量的影響 與空白組〔(84±11.28)ng/g〕相比，銅藻總萜提取物高、中、低劑量組均能提高小鼠小腦5-HT水平〔(127±4.23)、(112±6.34)、(96±78.52)ng/g〕，并呈劑量依賴關系，其中銅藻總萜提取物中、高劑量組作用更顯著(P<0.01)，鹽酸氟西汀組也能明顯提高5-HT水平〔(158±9.65)ng/g〕(P<0.001)。

3 討 論

小鼠強迫游泳實驗和懸尾實驗〔12～14〕模型提供了一個無法回避的壓迫環(huán)境，實驗中小鼠表現(xiàn)出來的不動狀態(tài)，反映了一種被稱之為“行為絕望和扭曲”或“對強壓環(huán)境適應的失敗”狀態(tài)〔15〕。這兩種行為絕望模型對絕大多數(shù)抗抑郁藥敏感，被廣泛用于篩選和觀察抗抑郁藥物的。動物在強迫這一應激條件下，掙扎后出現(xiàn)絕望表現(xiàn)即不動狀態(tài)，而抗抑郁劑可以減少動物的不動時間，提高對應激的耐受性。隨著競爭的加劇，抑郁癥發(fā)生與患病頻率已經(jīng)變得越來越高。而抑郁癥的病理生理機制迄今不明確，病理改變涉及神經(jīng)、內分泌、免疫等多個系統(tǒng)，是遺傳因素和環(huán)境因素相互作用的結果。因此，從天然植物藥中尋找與研制具有良好抗抑郁作用的藥物已越來越受到學術界的關注。

本實驗結果說明銅藻中總二萜能夠增強實驗動物的應激耐受性，減少絕望動物的不動時間，具有明顯的抗小鼠實驗性抑郁作用。5-HT是腦內重要的神經(jīng)遞質，參與情感、睡眠、記憶及食欲等代謝活動的調節(jié)〔16〕。本實驗結果發(fā)現(xiàn)銅藻總萜提取物各劑量組均能提高小鼠小腦5-HT水平，并呈劑量依賴關系。初步證實銅藻總萜提取物可能通過提高腦內5-HT水平而發(fā)揮抗抑郁作用。

4 參考文獻

1孫建璋，莊定根，王鐵干,等.南麂列島銅藻的研究〔J〕.現(xiàn)代漁業(yè)信息，2009;24(5)：19-21.

2田由蕓，袁 璟.褐藻的藥用食用研究進展〔J〕.海洋通報，1996;15(3)：81-6.

3吳毓林，何子樂.天然產(chǎn)物全合成薈萃-萜類〔M〕.北京：科學出版社，2010：31-2.

4陳雪梅，田德美，李海兵.具有殺菌活性的新型二萜化合物合成〔J〕.有機化學，2010;30(3)：461-4.

5韓迎辰.抑郁癥及抗抑郁天然藥物研究進展〔J〕.藥學實踐雜志，2005;23(1)：3-5.

6張林娜，陳振強.銀杏葉片治療老年抑郁癥的療效觀察〔J〕.遼寧中醫(yī)雜志，1999;26(12)：560.

7段志芳，陳慶華.超聲波法提取溪黃草中總二萜的最佳工藝研究〔J〕.時珍國醫(yī)國藥，2006;17(12)：2436-8.

8成 英，何興金.續(xù)隨子種子中兩種大環(huán)二萜類物質的提取工藝〔J〕.時珍國醫(yī)國藥，2011；22(5)：1267-9.

9胡曉雪，盧 平，陳洪燕.雷公藤根醋酸乙酯提取物總二萜含量測定〔J〕.時珍國醫(yī)國藥，1999;10(3)：177.

10韋 瑋，金日顯，陳燕軍.二萜類化合物的提取與純化工藝研究進展〔J〕.中國實驗方劑學雜志，2007;13(12)：66-70.

11簡 麗，賈慧凱，龐麗紋,等.超聲波輔助提取狼毒大戟中二萜類物質〔J〕.精細化工，2007;24(10)：972-4.

12Porsolt RD，Bertin A，Jalfre M.Behavioural despair in mice：a primary screening test for antidepressants〔J〕.Arch Int Pharmacodyn Ther，1977;229(2)：327-36.

13Steru L，Chermat R，Thierry B，etal.The tail suspension test：a new method for screening antidepressants in mice〔J〕.Psychopharmacology，1985；85(3)：367-70.

14李 驥，石 鑫，高彥宇,等.烏腺金絲桃抗抑郁作用的藥理研究〔J〕.中醫(yī)藥信息，2012;29(2)：16-7.

15Wiillner P.Animal models as simulations of depression〔J〕.Trends Pharmacol Sci，1991;12(4)：131-6.

16高 雋，朱國慶.5-羥色胺與睡眠和抑郁癥的關系 〔J〕.國外醫(yī)學·精神病學分冊，2000;27(3)：148-52.