孫 艷 安永潼 尹蓓珮 沈龍海

(上海醫(yī)藥工業(yè)研究院創(chuàng)新藥物與制藥工藝國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，上海 200437)

類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎是一種自身免疫性疾病，它的發(fā)病機(jī)制還未完全了解。其病理特點(diǎn)是:滑膜增生、血管新生以及血管翳形成?；ぴ錾鷮?dǎo)致低氧，刺激血管新生，血管新生介導(dǎo)淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞等向滑膜遷移形成血管翳，血管翳阻斷骨通過(guò)滑膜獲取營(yíng)養(yǎng)，激活破骨細(xì)胞分化，導(dǎo)致骨和軟骨的侵蝕，關(guān)節(jié)破壞。血管生長(zhǎng)是炎性關(guān)節(jié)炎早期極其重要的階段。治療類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的藥物從以前的非特異性抗炎藥轉(zhuǎn)向特異性抗炎藥(如TNF-α阻斷劑)，現(xiàn)在，又開(kāi)始研發(fā)作用于炎癥信號(hào)通路的小分子藥物(如Janus激酶抑制劑)。但是存在嚴(yán)重副反應(yīng)以及某些個(gè)體并不反應(yīng)的缺陷。所以，了解血管新生在類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎中的機(jī)制以及研發(fā)以此為靶點(diǎn)的藥物，引領(lǐng)類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎治療的發(fā)展是非常必要的。

1 血管新生在類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎中的作用

血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子不僅是胚胎生長(zhǎng)、骨骼生長(zhǎng)、生殖功能等生理血管生長(zhǎng)的關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子，也涉及腫瘤、類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎和其他的疾病［1］。

近來(lái)發(fā)現(xiàn)，類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者中滑液和血清中的VEGF顯著增加，而且VEGF含量與疾病的嚴(yán)重程度相關(guān)，可以說(shuō)明血管新生在類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的發(fā)展中有著重要的作用。血管新生促進(jìn)了血管翳的產(chǎn)生和促進(jìn)炎癥細(xì)胞向滑膜的遷移加重炎癥。RA患者中血管新生的最顯著的作用是增加向滑膜增生和血管翳提供營(yíng)養(yǎng)和氧氣。滑膜增生導(dǎo)致滑膜內(nèi)出現(xiàn)低氧的內(nèi)環(huán)境，低氧誘導(dǎo)因子(HIF)誘導(dǎo)血管生長(zhǎng)因子的表達(dá)，促進(jìn)血管新生。但是由于新生血管的間葉細(xì)胞的缺乏導(dǎo)致不正常的形態(tài)，并沒(méi)有完全緩解滑膜的低氧狀態(tài)，導(dǎo)致慢性炎癥。

其次，新生的血管可以向滑膜炎癥部位輸送炎癥細(xì)胞來(lái)維持炎癥。VEGF165激活內(nèi)皮細(xì)胞產(chǎn)生趨化因子(如 MCP-1/IL-8)［2］，可以招募單核細(xì)胞，然后VEGF165的刺激下或與活化的內(nèi)皮細(xì)胞直接接觸產(chǎn)生TNF-α和IL-6，然后TNF-α和IL-6作用于單核細(xì)胞分泌VEGF165，形成正反饋。血管新生時(shí)細(xì)胞因子之間的相互作用使得血管的通透性增加及內(nèi)皮細(xì)胞表面黏附因子的表達(dá)，使得炎癥細(xì)胞轉(zhuǎn)移并透過(guò)血管壁進(jìn)入滑膜炎癥部位，使炎癥持續(xù)［3］。

2 血管新生的分子調(diào)控網(wǎng)絡(luò)

血管生長(zhǎng)和成熟是由一系列的配體有序的激活各種受體的過(guò)程，受各種信號(hào)的調(diào)節(jié)，其中有參與生長(zhǎng)和延伸的，還有調(diào)節(jié)血管成熟和形態(tài)的。有促進(jìn)信號(hào)，同樣有抑制信號(hào)，兩種信號(hào)的平衡調(diào)節(jié)了血管生長(zhǎng)。

2.1 血管新生過(guò)程 當(dāng)內(nèi)皮細(xì)胞接受到血管生長(zhǎng)因子(如VEGF)刺激時(shí)，基底膜外的周皮細(xì)胞首先與血管壁分離(在Ang2的刺激下)，然后內(nèi)皮細(xì)胞分泌的金屬蛋白酶(MMP)將基底膜分解，導(dǎo)致周皮細(xì)胞徹底遠(yuǎn)離血管壁，內(nèi)皮細(xì)胞之間連接變得松散，內(nèi)皮細(xì)胞屏障的通透性增加［4］，血漿中的蛋白進(jìn)入并沉積在細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)，為血管生成中多種細(xì)胞遷移提供纖維支架。新生血管的前端稱(chēng)為T(mén)ip細(xì)胞，其后的內(nèi)皮細(xì)胞稱(chēng)為Stalk細(xì)胞，兩者之間的正常比例維持血管正常的形態(tài)。參與內(nèi)皮細(xì)胞遷移的因子有VEGF、趨化因子、細(xì)胞外基質(zhì)成分、整合素等。在此過(guò)程中還涉及DLL4-Notch信號(hào)通路，此信號(hào)通路調(diào)節(jié)Tip細(xì)胞和Stalk細(xì)胞之間的比例，保證血管形態(tài)的正常［5］，對(duì)防止內(nèi)皮細(xì)胞的無(wú)序增殖和排列有著重要的作用。

延伸血管的穩(wěn)定性需要周皮細(xì)胞和血管平滑肌細(xì)胞的支持，招募因子主要是內(nèi)皮細(xì)胞產(chǎn)生的PDGF(血小板來(lái)源的生長(zhǎng)因子)-BB，PDGF-BB通過(guò)碳末端保留模體與ECM中的硫酸乙酰肝素蛋白聚糖結(jié)合與內(nèi)皮細(xì)胞靠近，招募周皮細(xì)胞。周皮細(xì)胞和血管平滑肌細(xì)胞表面表達(dá)Ang1與表達(dá)于內(nèi)皮細(xì)胞表面的Tie-2受體作用，介導(dǎo)血管的穩(wěn)定，但是可以被Ang2拮抗，增加BM降解和內(nèi)皮細(xì)胞遷移［6］。

綜上所述，參與血管生成的細(xì)胞因子包括血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)、趨化因子、細(xì)胞外基質(zhì)成分及整合素等，而 Ang1和 PDGF-BB參與血管的穩(wěn)定性。

2.2 血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子

2.2.1 分類(lèi)及其配體 VEGF家族有 VEGFA、VEGFB、VEGFC、VEGFD 及 placenta growth factors(PGF)，其受體有Flt-1(VEGFR1)、KDR(VEGFR2)、Flt-4(VEGFR3)、NRP-1。VEGFC 和VEGFD主要與VEGFR3結(jié)合，刺激淋巴管生成。與血管新生無(wú)關(guān)。VEGFA可以結(jié)合兩種酪氨酸激酶受體-VEGFR1和VEGFR2，VEGFA通過(guò)不同的剪切形成多個(gè)異構(gòu)體，其中肝素結(jié)合的VEGFA(堿性)異構(gòu)體可以和 NRP-1結(jié)合，加強(qiáng) VEGFR2信號(hào)［1］，而VEGFR1的作用復(fù)雜，可以和不同配體結(jié)合，產(chǎn)生不同的信號(hào)反應(yīng)，其中研究認(rèn)為VEGFR1是個(gè)“誘騙”受體，可以和 VEGFA結(jié)合，抑制 VEGFR2的信號(hào)［7］，所以認(rèn)為VEGFR1是個(gè)負(fù)調(diào)節(jié)信號(hào)，至少在早期階段。此外，還可以促進(jìn)單核細(xì)胞遷移，刺激內(nèi)皮細(xì)胞分泌蛋白酶和生長(zhǎng)因子［6］。

2.2.2 產(chǎn)生

2.2.2.1 低氧 低氧是血管新生和炎癥的關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子，是因?yàn)樗{(diào)控很多基因的表達(dá)，包括血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子VEGF。

滑膜增生導(dǎo)致滑膜處氧的消耗大于氧的供給，滑膜處呈現(xiàn)低氧的內(nèi)環(huán)境。低氧誘導(dǎo)HIF的產(chǎn)生。HIF是異源二聚體，由HIFα和HIFβ組成，經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)，HIF-1由氧調(diào)節(jié)的HIF-1α和組成性表達(dá)的HIF-1β亞基組成。在常氧的情況下，PHD羥化脯氨酸殘基，為von Hippel-Lindau蛋白提供結(jié)合位點(diǎn)，招募E3泛素蛋白連接酶，導(dǎo)致HIF-1α泛素化，被蛋白酶降解。FIH-1(Factor inhibiting HIF-1)將HIF-1α天冬氨酸殘基羥基化，阻止其與轉(zhuǎn)錄輔助激活劑CSP和p300的結(jié)合。低氧時(shí)PHD和FIH-1失去活性，HIF-1α含量迅速增加，與 HIF-1β結(jié)合形成HIF，與助激活劑結(jié)合，進(jìn)入細(xì)胞核內(nèi)，結(jié)合低氧反應(yīng)元件(HRE)，啟動(dòng)基因的表達(dá)［8］。

2.2.2.2 生長(zhǎng)因子和炎癥細(xì)胞因子 實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)的滑膜細(xì)胞能夠在 IL-1、IL-6、IL-17、IL-18、前列腺素、TGF-β刺激下分泌VEGF，TNF-α和IL-6刺激單核細(xì)胞分泌VEGF165［3］。這些細(xì)胞因子通過(guò)炎癥信號(hào)通路或其他信號(hào)通路刺激 VEGF的產(chǎn)生。

2.2.2.3 低氧信號(hào)和炎癥信號(hào)相互作用 研究發(fā)現(xiàn)低氧信號(hào)通路與炎癥信號(hào)通路存在結(jié)合點(diǎn)。有些細(xì)胞因子(如 IL-1β和 TNF-α)可以通過(guò) PI3K和MARK兩個(gè)主要的信號(hào)通路影響 HIF的含量［9］，TLR7-TLR8或TLR4的特異性配體會(huì)通過(guò)NFkB信號(hào)通路激活HIF信號(hào)通路［10］，所以炎癥因子會(huì)通過(guò)炎癥信號(hào)調(diào)節(jié)HIF，從而在常氧的環(huán)境中同樣刺激VEGF的表達(dá)。同樣，低氧條件可以直接調(diào)控NFkB信號(hào)通路，刺激炎癥因子的產(chǎn)生，研究認(rèn)為PHD可以以非羥基化的形式阻斷IKK和Hsp90的相互作用，抑制了 IKKβ的磷酸化，從而降解 IkBα，抑制NFkB信號(hào)通路。而低氧時(shí)，PHD的活性抑制，脫掉對(duì)IKK的抑制，激活NFkB信號(hào)［11］。

總之，影響VEGF產(chǎn)生的信號(hào)可以單獨(dú)起作用，也可以相互作用，從而形成強(qiáng)大的正反饋，刺激VEGF的產(chǎn)生，促進(jìn)血管新生和炎癥。

2.2.3 信號(hào)通路 VEGF-VEGFR信號(hào)通路介導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞的增殖、遷移、抗凋亡、提高血管通透性，也和DLL4-Notch1信號(hào)相互作用，共同促進(jìn)血管正常形態(tài)的形成。VEGFR1經(jīng)歷弱的配體依賴(lài)的酪氨酸磷酸化，而VEGFR2有著強(qiáng)烈的反應(yīng)，這些信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)性質(zhì)的差異導(dǎo)致VEGF的不同功能，VEGFR1介導(dǎo)細(xì)胞遷移和分化，VEGFR2介導(dǎo)細(xì)胞增殖和生存。VEGF和其受體結(jié)合后，可引起受體胞內(nèi)激酶區(qū)特定酪氨酸殘基的磷酸化，進(jìn)而被含有SH2結(jié)構(gòu)域的adaptor蛋白結(jié)合，通過(guò)蛋白磷脂酶C(PLC)-蛋白激酶 C(PKC)-Raf-MEK-MAPK旁路，活化 MAPK，MAPK作為轉(zhuǎn)錄因子可轉(zhuǎn)運(yùn)至細(xì)胞核內(nèi)，啟動(dòng)特定基因的表達(dá)，完成VEGF相應(yīng)的促增殖作用。配體-受體結(jié)合也可以通過(guò)PACK1激活PI3-K，進(jìn)而作用于Akt，從而介導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞的抗凋亡，VEGF也誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞中抗凋亡蛋白Bcl-2和A1的表達(dá)［12］。研究發(fā)現(xiàn)，STAT3也會(huì)介導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞的遷移以及管腔形成［13］。

VEGFA激活的信號(hào)誘導(dǎo)新生血管上DLL4的表達(dá)，尤其是出芽尖端的內(nèi)皮細(xì)胞(Tip細(xì)胞)，DLL4激活鄰近細(xì)胞表面的Notch信號(hào)，從而抑制VEGFR的表達(dá)，抑制內(nèi)皮出芽和增殖［14］。在腫瘤治療的研究中發(fā)現(xiàn)，抑制DLL信號(hào)，會(huì)產(chǎn)生很多的出芽，但是血管不正常，腫瘤的血液灌流不會(huì)增加，腫瘤減小，這為出現(xiàn)VEGF耐受的腫瘤患者提供了新的治療方法［15］，所以DLL信號(hào)在控制血管出芽，保證血管正常形態(tài)的過(guò)程中起著重要作用。最近結(jié)果表明，并不只是VEGFR2調(diào)節(jié)DLL4，還存在其他調(diào)節(jié)者(如細(xì)胞基質(zhì)信號(hào))，而且 DLL4信號(hào)下調(diào) VEGFR3，對(duì)VEGFR2的表達(dá)毫無(wú)影響，結(jié)果顯示 VEGFR2和VEGFR3通過(guò)Notch信號(hào)調(diào)節(jié)的方式不相同。Notch信號(hào)弱時(shí)，VEGFR3上調(diào)解除對(duì)血管新生的抑制，血管Notch或者VEGFR3激活的狀態(tài)可能會(huì)與患者對(duì)anti-VEGF治療沒(méi)有反應(yīng)相關(guān)，這為我們選擇合適的治療方案來(lái)減少耐受產(chǎn)生有價(jià)值的信息［16］。但是對(duì)于類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎中血管新生只會(huì)使低氧的狀態(tài)持續(xù)，從而產(chǎn)生慢性炎癥，所以我們應(yīng)該了解新生血管不正常形態(tài)的原因，從而根據(jù)此原因調(diào)節(jié)通路，使生成的血管可以輸送營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，改變低氧的狀態(tài)，從而可能減輕炎癥。

2.3 其他主要細(xì)胞因子和蛋白介紹

2.3.1 血管生長(zhǎng)素(Ang) Ang1和Tie2(內(nèi)皮酪氨酸激酶受體)相互作用，促進(jìn)受體的自身磷酸化(活化)，表達(dá)活化Tie2的內(nèi)皮細(xì)胞吸引血管平滑肌細(xì)胞、周皮細(xì)胞等血管周?chē)?xì)胞包圍、支持內(nèi)皮細(xì)胞形成完整的血管壁，促進(jìn)血管重塑、成熟，維持血管的完整性和調(diào)節(jié)血管功能。而Ang2對(duì)血管生成的影響和局部的微環(huán)境有關(guān)，當(dāng)VEGF等促血管生長(zhǎng)因子存在時(shí)，Ang2競(jìng)爭(zhēng)性抑制Ang1，促進(jìn)新血管形成和血管重建，形成新的毛細(xì)血管。當(dāng)局部缺乏這些因子時(shí)，Ang2則通過(guò)抑制Ang1而有助于血管的消退［17］。

2.3.2 趨化因子 VEGF可以作用于內(nèi)皮細(xì)胞產(chǎn)生趨化因子，VEGF/VPF可以通過(guò)激活NF-kB信號(hào)通路(通過(guò)鈣離子和PI3K)誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞產(chǎn)生IL-8［18］。趨化因子根據(jù)半胱氨酸殘基在結(jié)構(gòu)中的位置分為三類(lèi)，分別是CXC、CC、CX3C。趨化因子一方面可以趨化細(xì)胞遷移、增加黏附因子的表達(dá)，促進(jìn)炎癥細(xì)胞聚集，產(chǎn)生炎癥。另一方面，可以作用于內(nèi)皮細(xì)胞，產(chǎn)生一系列的信號(hào)，促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞的分裂、遷移及抗凋亡。研究發(fā)現(xiàn)，一般情況下，刺激血管新生的趨化因子包含ELR(glutamy-leucyl-arginyl)氨基酸模體，相反，不含ELR氨基酸模體的趨化因子抑制血管新生。當(dāng)然也有特例，如 stromal cell-derived factor-1SDF-1/CXCL12缺乏ELR模體，卻刺激血管新生［19］。CXCR2是內(nèi)皮細(xì)胞上促進(jìn)血管生長(zhǎng)的CXC因子的最重要的受體，研究發(fā)現(xiàn)血管內(nèi)皮細(xì)胞可表達(dá)CXC受體mRNA和蛋白，將內(nèi)皮細(xì)胞和IL-8共同孵育可促進(jìn)凋亡抑制基因的表達(dá)，抑制內(nèi)皮細(xì)胞凋亡，還可以加強(qiáng)基質(zhì)金屬蛋白酶 MMP2及MMP9 mRNA的表達(dá)，以利于內(nèi)皮細(xì)胞遷移，從而調(diào)節(jié)血管形成。

2.3.3 整合素 整合素(也稱(chēng)整聯(lián)蛋白)是一種細(xì)胞外基質(zhì)受體蛋白，細(xì)胞外部分與基質(zhì)蛋白結(jié)合，內(nèi)部通過(guò)踝蛋白與黏著斑蛋白同肌動(dòng)蛋白相連，此過(guò)程會(huì)激活黏著斑蛋白激酶(FAK)。鑒于FA介導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞對(duì)于細(xì)胞外的刺激的重要性及FAK在這個(gè)過(guò)程的重要性，對(duì)于治療含有血管生成過(guò)程的疾病，靶向FAK是有治療前景的［20］。

3 藥物研發(fā)方向分析

根據(jù)以上結(jié)果，我們看到血管新生在類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎中的重要作用，鑒于現(xiàn)在類(lèi)風(fēng)濕藥物主要集中于抗炎藥物，會(huì)出現(xiàn)耐受及嚴(yán)重的副反應(yīng)，我們需要研發(fā)其他靶點(diǎn)的藥物，開(kāi)發(fā)安全有效的產(chǎn)品，所以靶向血管生長(zhǎng)或許是一個(gè)很好的方向，至少血管生長(zhǎng)抑制劑在腫瘤治療中呈現(xiàn)了很好的效果。

根據(jù)調(diào)控血管生長(zhǎng)的復(fù)雜的調(diào)控網(wǎng)絡(luò)，我們可以采取多種干擾策略中斷血管生長(zhǎng)，抑制血管新生可能會(huì)阻斷炎癥細(xì)胞的遷移，減少滑膜處血管翳的形成及炎癥的持續(xù)。抑制血管新生有以下策略:①抑制血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)的產(chǎn)生，可以通過(guò)靶向HIF因子，阻斷其信號(hào)通路，抑制VEGF的產(chǎn)生。我們研究的方向一方面主要集中在調(diào)節(jié)PHDs和FIHI的活性，使其在低氧的時(shí)候也能破壞HIF-α的穩(wěn)定性或阻斷與助激活劑的結(jié)合，從而抑制HIF的存在，中斷信號(hào)通路。另一方面設(shè)計(jì)siRNA和DNA轉(zhuǎn)錄酶的調(diào)節(jié)直接靶向HIF的產(chǎn)生［21］。②阻斷VEGF-VEGFR信號(hào)通路。采用抗VEGF抗體或抗VEGFR抗體阻斷VEGF和VEGFR的結(jié)合，還可以設(shè)計(jì)小分子藥物靶向受體酪氨酸激酶抑制劑阻斷信號(hào)通路，抑制內(nèi)皮細(xì)胞的增殖、遷移等。研究發(fā)現(xiàn)，通過(guò)篩選合成的肽數(shù)據(jù)庫(kù)，發(fā)現(xiàn)一個(gè)可溶性的富含Arg的六肽-RRKRRR(R代表精氨酸，K代表賴(lài)氨酸)，它可以和 VEGF結(jié)合，抑制其與受體結(jié)合［22］，另外還發(fā)現(xiàn)抗 Flt-1 的六肽，GNQWFI(Gly-Asn-Gln-Trp-Phe-Ile)，選擇性地阻斷Flt-1可能會(huì)阻斷VEGF誘導(dǎo)的炎癥和血管新生，并且毒性會(huì)很小［23］。此外，研究發(fā)現(xiàn)，金屬蛋白酶的組織抑制劑(TIMPs)最初作為金屬蛋白酶的抑制劑，最近發(fā)現(xiàn)它可以阻斷VEGF和VEGFR2的結(jié)合，但對(duì)VEGFR1無(wú)影響［24］。最奇特的是，可以修飾編碼受體酪氨酸激酶超家族的基因，產(chǎn)生理想的剪切變異體，阻斷配體與受體的結(jié)合。③抑制參與內(nèi)皮細(xì)胞遷移相關(guān)的蛋白(如金屬蛋白酶抑制劑、αvβ3整合素)等也是一種治療方案。

由于VEGF-VEGFR信號(hào)與其他信號(hào)有著緊密的相互作用，在不同階段，VEGF所承擔(dān)的作用是不同的，如果只是單一的阻斷VEGF，處于特定階段的患者可能并不會(huì)產(chǎn)生效果。對(duì)于這個(gè)問(wèn)題，我們應(yīng)該更加努力地研究類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎中血管新生的復(fù)雜調(diào)控機(jī)制，從而詳細(xì)了解VEGF的多重作用，研發(fā)安全有效的藥物，避免藥物的盲目性。

此外，我們現(xiàn)在主要研究的是血管生長(zhǎng)抑制劑類(lèi)藥物，我們可能忽略了血管不正常的形態(tài)在疾病發(fā)展中的作用，我們知道低氧刺激血管新生是為了提供更多的血液灌流，保證氧的供給，但實(shí)際結(jié)果卻是導(dǎo)致炎癥的維持，這是因?yàn)椴徽５难苁チ怂墓δ?。我們也可以研究造成這種血管不正常的原因，從而采取措施糾正，觀察正常的血管新生對(duì)于疾病的減輕有無(wú)療效，從而可能開(kāi)發(fā)新的研究思路。其中我們可以從類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎中DLL-Notch信號(hào)、Ang-Tie信號(hào)的變化入手進(jìn)行我們的研究，因?yàn)樗鼈冎饕淖饔镁褪钦{(diào)控血管出芽、維持血管完整、促進(jìn)血管重塑和成熟。

［1］Ferrara N，Gerber HP，LeCouter J，et al.The biology of VEGF and its receptors［J］.Nat Med，2003，9(6):669-676.

［2］Lee TH，Avraham H，Avraham S，et al.Vascular endothelial growth factor modulates neutrophil transendothelial migration via up-regulation of interleukin-8 in human brainmicrovascular endothelial cells［J］.J Biol Chem，2002，277(12):10445-51.

［3］Yoo SA，Kwok SK，Kim WU，et al.Proinflammatory role of vascular endothelial growth factor in the pathogenesis of rheumatoid arthritis:prospects for therapeutic intervention ［J］.Mediators Inflamm，2008.

［4］Carmeliet P，Jain RK.Molecular mechanisms and clinical applications of angioge-nesis［J］.Nat Rev，2011，473(7347):298-307.

［5］Hellstrom M，Phng L K，Hofmann JJ，et al.Dll4 signalling through Notch1 regulates formation of tip cells during angiogenesis［J］.Nat，2007，445:776-780.

［6］Chung A，Lee J，F(xiàn)errara N，et al.Targeting the tumor vasculature:insights from physiological angiogenesis［J］.Nat Rev Cancer，2012，10:505-514.

［7］Rey SL，Semenza G.Hypoxia-inducible factor 1 dependent mechanisms of vascularization and vascular remodeling［J］.Cardiovasc Res，2010，86(2):236-242.

［8］Ema M，Hirota K，Mimura J，et al.Molecular mechanisms of transcription activation by HLF and HIF1α in response to hypoxia:their stabilization and redox signal-induced interaction with CBP/p300 ［J］.EMBO J，1999，18(7):1905-1914.

［9］Westra J，Brouwer E，Bos R，et al.Regulation of cytokine-induced HIF 1α expression in rheumatoid synovial fibroblasts［J］.Ann NY Acad Sci，2007，1108:340-348.

［10］Oda S，Oda T，Nishi K，et al.Macrophage migration inhibitory factor activates hypoxia-inducible factor in a p53-dependent manner［J］.PLoS ONE，2008，3:e2215.

［11］Xue J，Li XB，Wei Y，et al.Prolyl hydroxylase 3 is down-regulated in colorectal cancer cells and inhibits IKKβ independent of hydroxylase activity［J］.Gastroenterology，2010，138(2):606-615.

［12］Shibuya M.Vascular endothelial growth factor(VEGF)and its receptor(VEGFR)signaling in angiogenesis:a crucial target for anti-and pro-angiogenic therapies［J］.Genes Cancer，2011，2(12):1097-1105.

［13］Yahata Y，Shirakata Y，Tokumaru S，et al.Nuclear translocation of phosphory-lated STAT3 is essential for vascular endothelial growth factor-induced human dermal microvascular endothelial cell migration and tube formation［J］.J Biol Chem，2003，278:40026-40031.

［14］Suchting S，F(xiàn)reitas C，Noble F，et al.The Notch ligand Delta-like 4 negatively regulates endothelial tip cell formation and vessel branching［J］.Proc Natl Acad Sci USA，2007，104(9):3225-3230.

［15］Thurston G，Noguera-Troise I，Yancopoulos GD，et al.The Delta paradox:DLL4 blockade leads to more tumour vessels but less tumour growth［J］.Nat Rev Cancer，2007，7:327-331.

［16］Benedito RF，Rocha S，Woeste M，et al.Notch-dependent VEGFR3 upregulation allows angiogenesis without VEGF-VEGFR2 signalling［J］.Nat Lett，2012，484(7392):110-116.

［17］陳立波.血管生成素/Tie2信息通路在血管形成中的調(diào)節(jié)作用［J］.國(guó)外醫(yī)學(xué)·外科學(xué)分冊(cè)，2001，28(1):20-22.

［18］Szekanecz，Zoltan MD，Koch，et al.Chemokines and angiogenesis［J］.Curr Opin Rheumatol，2001，13(3):202-208.

［19］Infusino GA，Jacobson JR.Endothelial FAK as a Therapeutic Target in Disease［J］.Microvasc Res，2012，83(1):89-96.

［20］Konisti S，Kiriakidis SM，Paleology E.Hypoxia-a key regulator of angiogenes-is and inflammation in rheumatoid arthritis［J］.Nat Rev Rheumatol，2012，8:153-161.

［21］Yoo SA，Bae DG，Ryoo JW，et al.Arginine-rich antivascular endothelial growth factor(anti-VEGF)hexapeptide inhibits collageninduced arthritis and VEGF-stimulated productions of TNF-α and IL-6 by human monocytes ［J］.J Immunol，2005，174(9):5846-5855.

［22］Bae DG，Kim TD，Li G，et al.Anti-Flt1 peptide，a vascular endothelial growth factor receptor 1-specific hexapeptide，inhibits tumor growth and metastasis［J］.Clin Cancer Res，2005，11(7):2651-2661.

［23］Qi JH，Ebrahem Q，Ali M，et al，Tissue inhibitor of metalloproteinases-3 peptides inhibit angiogenesis and choroidal neovascularization in mice［J］.PLoS ONE，2013，8(3):e55667.

［24］Jin P，Zhang J，Sumariwalla PF，et al ，Novel splice variants derived from the receptor tyrosine kinase superfamily are potential therapeutics for rheumatoid arthritis［J］.Arthritis Res Ther，2008，10(4):73-89.