任曉楠，周曉輝

(上海市公共衛(wèi)生臨床中心，上海 201508)

肝臟疾病是威脅人類(lèi)健康最嚴(yán)重的疾病之一，其中又以病毒性肝炎最為廣泛[1]。據(jù)世界衛(wèi)生組織和國(guó)家衛(wèi)生計(jì)生委報(bào)道，全球目前約有3.5億人屬于乙型肝炎病毒攜帶者，其中中國(guó)約有1.2億人[2]。此外，肝纖維化、肝硬化和肝癌等病種的危害也相當(dāng)嚴(yán)重。由于人類(lèi)肝臟疾病的復(fù)雜性，往往需要借助外界動(dòng)物模型進(jìn)行研究，合適的小動(dòng)物模型的缺乏，在很大程度上限制了人類(lèi)肝臟重大疾病的轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)研究[3-5]。

近年來(lái)人源化小鼠及人肝嵌合體小鼠模型的建立為人類(lèi)肝臟疾病的研究提供了新的方向。人源化小鼠模型是指帶有功能性的人類(lèi)基因、細(xì)胞或組織的小鼠模型，作為人類(lèi)疾病體內(nèi)(invivo)研究的活體替代模型，其在人類(lèi)各類(lèi)疾病的研究中發(fā)揮著非常重要的作用[6]。人肝嵌合體小鼠模型則是在免疫缺陷小鼠的基礎(chǔ)上建立的帶有人類(lèi)肝細(xì)胞的感染模型，該模型利用轉(zhuǎn)基因或基因敲除技術(shù)使內(nèi)源性肝細(xì)胞損傷死亡，創(chuàng)造移植外源人肝的條件而形成嵌合體小鼠。由于嵌入了人肝細(xì)胞，人肝嵌合體小鼠模型可以模擬人類(lèi)自然感染肝炎病毒的過(guò)程，在動(dòng)物水平模擬人肝細(xì)胞反應(yīng)，從而使肝臟疾病研究更加深入?，F(xiàn)將有關(guān)肝臟疾病的人源化小鼠模型研究進(jìn)行綜述。

1 Alb-uPA小鼠模型

1.1 模型簡(jiǎn)介

1990年，Dr Brinster’s團(tuán)隊(duì)研究出了一種轉(zhuǎn)基因小鼠，這種轉(zhuǎn)基因小鼠攜帶了小鼠的尿激酶纖維蛋白溶酶原活化子(urokinase plasminogen activator，uPA)[7]，該基因受到小鼠的肝白蛋白(albumins，Alb)增強(qiáng)子/啟動(dòng)子的控制。uPA基因在肝臟中的過(guò)度表達(dá)導(dǎo)致血清中uPA含量非常高，同時(shí)導(dǎo)致低纖維蛋白原血癥。造成子代在產(chǎn)后就會(huì)因腹腔和內(nèi)臟出血而死去，廣泛的肝臟毒性還會(huì)導(dǎo)致慢性的肝臟發(fā)育不全[8]。1995年，Rhim在Swiss athymic (nu/nu) Alb-uPA小鼠身上成功地植入了大鼠肝臟細(xì)胞[9]。與此同時(shí)，Petersen在uPA-RAG2-/-小鼠模型上也成功植入了土撥鼠的肝臟細(xì)胞，重建率高達(dá)90%[10]。之后Dandri首次報(bào)道了將人肝細(xì)胞移植到uPA-RAG2-/-小鼠上，但是移植效率僅為15%[11]，遠(yuǎn)不及大鼠和土撥鼠的肝臟移植效率。隨后，uPA-SCID(severe combined immun deficiency)小鼠模型被建立，由于uPA-SCID雜交小鼠自身的肝細(xì)胞具有代謝缺陷，且免疫系統(tǒng)也存在缺陷，移植的人源肝細(xì)胞比小鼠自身的肝細(xì)胞更容易存活。Meuleman等[12]在uPA-SCID雜交小鼠中，培養(yǎng)的人肝細(xì)胞重建效率可達(dá)到50%～70%，相關(guān)研究也表明HBV[13-14]和HCV[15]病毒均可以成功地感染uPA-SCID小鼠。uPA轉(zhuǎn)基因小鼠與具有免疫缺陷背景(RAG2或SCID)的小鼠雜交結(jié)合后，可作為人肝細(xì)胞移植的模型，但手術(shù)窗口期非常短，要在小鼠出生后2周內(nèi)就盡快完成移植手術(shù)。

1.2 優(yōu)缺點(diǎn)

作為最早的人肝嵌合小鼠模型，Alb-uPA小鼠為早期的肝臟疾病研究提供了幫助，該模型具有以下特點(diǎn)：(1)小鼠原有病變肝臟組織周?chē)浦驳娜烁渭?xì)胞增殖活躍；(2)人膽管系統(tǒng)與小鼠膽管系統(tǒng)發(fā)生了功能性連接；(3)人肝細(xì)胞重建效率高達(dá)99%[16]；(4)移植的人肝細(xì)胞保留了許多重要的藥物代謝酶活性；(5)人肝細(xì)胞在小鼠體內(nèi)可分泌多種人源性蛋白，可模擬人肝細(xì)胞。

由于SCID小鼠存在免疫缺陷，使得該小鼠模型在實(shí)際應(yīng)用中出現(xiàn)了如下問(wèn)題：(1)新生子代小鼠病死率高，多數(shù)會(huì)于產(chǎn)后4天死于腹腔或內(nèi)臟出血，手術(shù)窗口期短，需在出生后2周內(nèi)完成移植，手術(shù)難度大；(2)Alb-uPA小鼠的某些肝細(xì)胞可能通過(guò)重組機(jī)制清除uPA轉(zhuǎn)基因[17]，并快速增殖，8～12周即恢復(fù)整個(gè)肝臟，影響移植肝細(xì)胞的增殖能力；(3)Alb-uPA小鼠移植人肝細(xì)胞后容易產(chǎn)生補(bǔ)體反應(yīng)，導(dǎo)致小鼠腎臟功能損傷，病死率較高；(4)Alb-uPA小鼠模型需移植的細(xì)胞數(shù)量較大，而培養(yǎng)的肝細(xì)胞由于安全性和差異性等問(wèn)題，不適于人源化肝臟的研究，因而在目前原代人肝細(xì)胞來(lái)源緊張的情況下，這也是限制其實(shí)用性的重要因素之一。以上4點(diǎn)缺陷限制了穩(wěn)定可靠的人鼠嵌合肝模型的建立和應(yīng)用。

2 Tet-uPA小鼠模型

2.1 模型簡(jiǎn)介

在理論上，實(shí)現(xiàn)uPA可調(diào)控表達(dá)從而人為控制uPA表達(dá)強(qiáng)度和時(shí)機(jī)，就可以選擇有利的手術(shù)時(shí)機(jī)，提高人肝嵌合成功率和小鼠生存率。所以在Alb-uPA小鼠的基礎(chǔ)上，北京大學(xué)鄧宏魁研究組于2009年在Am J Pathol報(bào)道了利用四環(huán)素誘導(dǎo)調(diào)控系統(tǒng)(Tet-on)以及腺病毒感染轉(zhuǎn)入uPA基因的方法來(lái)實(shí)現(xiàn)了對(duì)于uPA基因的可調(diào)控表達(dá)和定時(shí)肝損的發(fā)生[18]。該模型的原理是當(dāng)有四環(huán)素的衍生物強(qiáng)力霉素(Doxycycline)存在時(shí)，四環(huán)素的反式激活因子rtTA和TRE(tetracycline response element)就會(huì)結(jié)合而促使下游基因開(kāi)放轉(zhuǎn)錄，而不給予強(qiáng)力霉素時(shí)基因一般不被轉(zhuǎn)錄，這樣就實(shí)現(xiàn)了對(duì)uPA基因的可調(diào)控表達(dá)。實(shí)驗(yàn)表明人肝細(xì)胞重建效率隨著注射腺病毒的次數(shù)增多而會(huì)逐漸升高。

2.2 優(yōu)缺點(diǎn)

Tet-uPA小鼠模型克服了世界上已有uPA小鼠的不足，具有以下顯著優(yōu)點(diǎn)：(1)Tet-uPA小鼠可正常生長(zhǎng)，正常繁殖，克服了uPA死亡率高的缺點(diǎn)；(2)強(qiáng)力霉素誘導(dǎo)肝損傷，誘導(dǎo)和肝細(xì)胞移植手術(shù)的窗口期可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要來(lái)選定，需要進(jìn)行肝細(xì)胞移植時(shí)給予強(qiáng)力霉素就可以誘導(dǎo)肝損；(3)人源化肝臟小鼠重建的時(shí)間段廣，人肝細(xì)胞嵌合程度高。

然而，由于維持uPA表達(dá)需反復(fù)進(jìn)行腺病毒感染，宿主小鼠可產(chǎn)生針對(duì)腺病毒的抗體，因而影響后面腺病毒的感染率，從而降低uPA表達(dá)；而且該模型只適合肝移植和再生的研究，并不適合用于肝炎病毒的感染研究，因?yàn)橄俨《靖腥颈旧砜杉せ钐烊幻庖邚亩绊懙胶罄m(xù)對(duì)于肝炎病毒激發(fā)免疫反應(yīng)的觀察。

3 FAH小鼠模型

3.1 模型簡(jiǎn)介

Fah-/-小鼠由Groump等[19]于1993年建立，該小鼠模型敲除了延胡索酰乙酰乙酸水解酶(fumarylacetoacetate hydrolase，F(xiàn)AH)。這個(gè)酶的缺失會(huì)導(dǎo)致酪氨酸代謝障礙，使得延胡索酰乙酰乙酸會(huì)大量累積[20]，從而導(dǎo)致肝臟受損。Lagasse等[21]報(bào)道，僅50個(gè)純化的骨髓造血干細(xì)胞移植就能在Fah-/-小鼠肝臟內(nèi)不斷增殖，且有超過(guò)30%的小鼠肝細(xì)胞會(huì)被供體細(xì)胞所取代。隨后Hisaya Azuma等[22]在Fah-/-小鼠的基礎(chǔ)上，構(gòu)建了FAH-RAG2-IL 2 (interleukin)-GammaC (FRG)三基因缺失的免疫缺陷小鼠模型。FRG小鼠存在廣泛而持續(xù)的肝損傷，所以其肝臟微環(huán)境非常適合移植細(xì)胞的增殖，將正常的人肝細(xì)胞移植入小鼠體內(nèi)，再殖效率高達(dá)90%，且移植的人肝細(xì)胞能參與小鼠肝板的形成，同時(shí)發(fā)揮正常的肝細(xì)胞功能。Bissig等[23]報(bào)道，在構(gòu)建的Fah-/-/Rag2-/-/gc-/-(FRG)小鼠模型上，移植的人肝細(xì)胞重建效率可以達(dá)到30%～90%。人肝細(xì)胞移植入Fah-/-/Rag2-/-/IL2rg-/-三基因缺失小鼠中，得到了90%的再殖效率，同時(shí)移植細(xì)胞表現(xiàn)正常肝細(xì)胞代謝功能。Bissig又進(jìn)一步研究了FRG小鼠的人源化肝臟的功能，原代肝細(xì)胞移植后至第10周，47只嵌合體小鼠中，有13只小鼠的血清中能夠檢測(cè)到人白蛋白(hAlb)，且hAlb的水平隨著移植時(shí)間延長(zhǎng)而增加，其中7只高增殖率(30%～90%)的小鼠體內(nèi)，hAlb的水平大于1 mg/mL，表明增殖的人肝細(xì)胞已經(jīng)具備了相應(yīng)的功能。近年來(lái)的研究也顯示HBV和HCV病毒均可以成功地感染FAH小鼠[24]。

3.2 優(yōu)缺點(diǎn)

Fah-/-小鼠構(gòu)建的人源化肝臟動(dòng)物模型具有以下優(yōu)點(diǎn)：(1)該小鼠自體肝細(xì)胞發(fā)生進(jìn)行性、不可逆轉(zhuǎn)的損傷，不存在基因功能失活的問(wèn)題，而且小鼠體內(nèi)會(huì)相應(yīng)產(chǎn)生促進(jìn)肝細(xì)胞增殖的微環(huán)境，體內(nèi)肝再生的需求并不能促進(jìn)其自體肝細(xì)胞的再生需求，故移植的外源細(xì)胞比小鼠自身的肝細(xì)胞更具有在小鼠肝臟中存活的選擇優(yōu)勢(shì)；(2)其肝臟損傷的時(shí)間和程度可以通過(guò)一個(gè)藥物選擇系統(tǒng)進(jìn)行控制，在食物中添加2-(2-硝基-4-三氟苯甲酰)-1，3環(huán)己二酮(NTBC)，可抑制4-對(duì)羥苯丙酮酸二氧合酶的活性，上調(diào)Fah的表達(dá)。經(jīng)NTBC的處理后，F(xiàn)ah-/-小鼠很容易生長(zhǎng)發(fā)育為成年小鼠[25-26]。因此，該小鼠不存在實(shí)驗(yàn)窗口期短的問(wèn)題，且小鼠病死率低，存活時(shí)間長(zhǎng)；(3)Fah酶可以作為評(píng)價(jià)細(xì)胞移植效率的手段之一，操作方便，簡(jiǎn)化了對(duì)外源細(xì)胞再植效率的評(píng)估措施；(4)該模型排除了細(xì)胞增殖是與宿主細(xì)胞融合的結(jié)果，同時(shí)，移植細(xì)胞后不會(huì)產(chǎn)生補(bǔ)體反應(yīng)，因而沒(méi)有腎臟損傷的問(wèn)題；(5)該模型具有序列移植的特點(diǎn)，移植的人肝細(xì)胞增殖后可再移植到下一個(gè)受體，通過(guò)序列移植可擴(kuò)增人肝細(xì)胞的數(shù)量，從而有效地解決了肝細(xì)胞來(lái)源不足的問(wèn)題。

但是FAH小鼠也需要uPA基因的表達(dá)，所以與uPA小鼠一樣具有同樣的限制，也有可能會(huì)引發(fā)肝臟腫瘤的發(fā)生。同時(shí)，雖然可以通過(guò)使用NTBC來(lái)控制肝臟損傷的時(shí)間和程度，但是這也影響了該模型在藥物代謝研究方面的應(yīng)用[27-28]。

4 TK-NOG小鼠模型

4.1 模型簡(jiǎn)介

2011年，日本的研究者構(gòu)建了一種新型的人肝嵌合小鼠模型，利用自殺基因系統(tǒng)I型單純皰疹病毒(herpes simplex virus-type I，HSV-I)的胸腺嘧啶激酶(thymidine kinase，TK)。該胸腺嘧啶激酶被肝臟特異性的Alb啟動(dòng)子控制[29]，與無(wú)毒的環(huán)氧鳥(niǎo)苷(Gancyclovir，GCV)這種物質(zhì)一起構(gòu)成(HSV-tk/GCV)表達(dá)系統(tǒng)。通過(guò)胸苷激酶的表達(dá)，將無(wú)毒的藥物前體磷酸化為強(qiáng)毒性代謝物三磷酸丙氧鳥(niǎo)苷，其作為DNA和RNA 鏈的終止劑將小鼠自身的肝臟細(xì)胞殺死，而不需要注射外用藥物去實(shí)現(xiàn)。與(NOD)-SCID基因缺陷小鼠[30]雜交成為T(mén)K-NOG小鼠，移植到該小鼠體內(nèi)的人肝細(xì)胞可以正常地發(fā)揮功能達(dá)8個(gè)月之久。該模型也成功地被用于藥物代謝的遺傳多樣性研究上[31]。

4.2 優(yōu)缺點(diǎn)

TK-NOG小鼠一個(gè)獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)是移植后的人源化肝臟組織及其功能可以長(zhǎng)期保持穩(wěn)定而不需使用外源性藥物。這種能夠長(zhǎng)期生存和穩(wěn)定的人源化模式提供了一個(gè)更加廣泛的時(shí)間窗口，為藥物代謝和毒理學(xué)這種長(zhǎng)期的研究提供了可能。同時(shí)TK-NOG小鼠也沒(méi)有出現(xiàn)系統(tǒng)性的疾病(肝臟疾病、腎臟疾病、出血素質(zhì))和肝臟腫瘤的形成。

TK-NOG模型還有另一個(gè)優(yōu)勢(shì)，就是可以使人肝細(xì)胞在小鼠肝臟中重建后再繼續(xù)增加GCV的用量，這樣就可以保證達(dá)到一個(gè)較高的移植效率。

5 AFC8小鼠模型

5.1 模型簡(jiǎn)介

以上這些人肝嵌合小鼠模型都缺少人類(lèi)免疫系統(tǒng)功能，不能用于研究肝炎病毒感染相關(guān)的免疫反應(yīng)，也不能應(yīng)用于疫苗的篩選評(píng)價(jià)，這在某種程度上阻礙了肝病相關(guān)的免疫發(fā)病機(jī)理的研究，而同時(shí)具有人類(lèi)肝臟系統(tǒng)功能的免疫活性人源化小鼠可以克服這一困難。

最近，來(lái)自北卡羅萊納大學(xué)的蘇立山教授就成功構(gòu)建了同時(shí)具有人免疫系統(tǒng)和人肝臟細(xì)胞的AFC8小鼠模型[32]。該模型是在具有RG小鼠背景的AFC8轉(zhuǎn)基因小鼠上構(gòu)建的，AFC8小鼠表達(dá)細(xì)胞凋亡蛋白酶-8(caspase-8)，同時(shí)具有FK506結(jié)合蛋白(FK506 binding protein，F(xiàn)KBP)活性。研究人員從人類(lèi)胎肝組織中分離出了肝祖細(xì)胞和造血干細(xì)胞[33]，然后將分離出的人類(lèi)祖/干細(xì)胞聯(lián)合植入AFC8轉(zhuǎn)基因小鼠肝臟中，再用二聚化因子AP20187誘導(dǎo)小鼠肝細(xì)胞凋亡，從而選擇性地使人類(lèi)肝細(xì)胞生長(zhǎng)，人類(lèi)造血干細(xì)胞定植可使人類(lèi)免疫細(xì)胞群發(fā)育，形成AFC8-hu HSC/Hep小鼠(簡(jiǎn)稱(chēng)Hu-Liver-HSC小鼠)。

研究人員將臨床分離的HCV病毒株接種到該小鼠模型體內(nèi)，發(fā)現(xiàn)HCV感染導(dǎo)致了小鼠肝臟內(nèi)人類(lèi)白細(xì)胞、漿細(xì)胞樣樹(shù)突狀細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和調(diào)節(jié)T細(xì)胞增多，引起了針對(duì)HCV的特異性細(xì)胞免疫反應(yīng)。這些結(jié)果表明不同于正常小鼠，新構(gòu)建的人源化小鼠可以被HCV感染，并重現(xiàn)了人類(lèi)細(xì)胞針對(duì)于HCV的特異性T細(xì)胞反應(yīng)。

5.2 優(yōu)缺點(diǎn)

這一小鼠模型不僅適合于研究HCV感染和肝臟免疫病理機(jī)制，還有可能適用于研究其他嗜肝病毒包括HBV、HDV等誘導(dǎo)的肝臟免疫發(fā)病機(jī)制，并且是用于評(píng)估抗病毒藥物以及疫苗和中和抗體研制的理想工具。新型的小鼠模型使得研究人員朝著開(kāi)發(fā)出更高效的治療策略這一目標(biāo)邁出了重要的一步。

然而數(shù)據(jù)顯示，該模型的外源人肝細(xì)胞在小鼠肝臟的重建率僅為30%左右，仍遠(yuǎn)不及uPA-SCID小鼠模型的重建率。而且，在uPA和Fah小鼠模型(支持>50%肝細(xì)胞移植)中可以觀察到HCV血癥，而在AFC8-hu HSC/Hep小鼠模型中卻沒(méi)有發(fā)現(xiàn)，這可能是因?yàn)槠涓渭?xì)胞定植水平較低所造成的，因此該模型仍須改進(jìn)。盡管如此，這仍是HCV研究中動(dòng)物模型領(lǐng)域取得的重大突破。

6 展望

人源化肝臟嵌合體小鼠的構(gòu)建，使人肝細(xì)胞能在小鼠體內(nèi)達(dá)到穩(wěn)定，高度再殖，甚至擁有人肝臟的正常功能和形態(tài)學(xué)，在此基礎(chǔ)上進(jìn)行的研究在某種程度上反映了真實(shí)的人體，使研究更深入真實(shí)，成為臨床前研究由鼠到人之間的重要橋梁。目前還沒(méi)有相關(guān)的研究對(duì)以上幾種模型進(jìn)行過(guò)直接的比較，但是每個(gè)模型都存在著各自的優(yōu)缺點(diǎn)，還需要進(jìn)行不斷地完善和改進(jìn)。本文介紹了以上幾種常用的肝臟人源化小鼠模型，為相關(guān)研究工作者提供了科研思路和借鑒價(jià)值，并對(duì)每個(gè)模型的優(yōu)缺點(diǎn)有了相應(yīng)的了解，可以根據(jù)實(shí)驗(yàn)的需要來(lái)選擇不同的模型小鼠，使模型更好地為實(shí)驗(yàn)服務(wù)，使實(shí)驗(yàn)結(jié)果更為準(zhǔn)確?，F(xiàn)在的人鼠嵌合肝已經(jīng)成為體內(nèi)環(huán)境下研究肝臟移植、人肝細(xì)胞功能、嗜肝性病毒等的重要工具，未來(lái)同時(shí)構(gòu)建人源化肝臟和免疫系統(tǒng)雙嵌合體小鼠可以使研究更加深入，既可以反映人類(lèi)肝臟的情況，又可以觀察人體免疫系統(tǒng)的真實(shí)狀態(tài)，這對(duì)于人類(lèi)肝臟疾病的研究具有十分重要的意義。

[1] 丁善龍, 王杰, 魯鳳民.乙型肝炎研究及我國(guó)防治現(xiàn)狀 [J].傳染病信息, 2013, 26(6): 369-372.

[2] 孫梅，檀末平.重癥肝炎的護(hù)理體會(huì) [J].中國(guó)醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2008, 5(10): 116.

[3] Gilgenkrantz H.Humanized mice for the study of hepatitis C [J].Med Sci (Paris).2011, 27(6-7):587-589.

[4] de Jong YP, Rice CM, Ploss A.New horizons for studying human hepatotropic infections [J].J Clin Invest.2010,120(3): 650-653.

[5] Brezillon N, Brunelle MN,Massinet H,et al.Antiviral activity of bay 41-4109 on hepatitis B virus in humanized Alb-uPA/SCID mice [J].PLoS ONE.2011,6(12): e25096.

[6] Shultz LD, Ishikawa F, Greiner DL.Humanized mice in translational biomedical research [J].Nat Rev Immunol.2007,7(2):118-130.

[7] Heckel JL, Sandgren EP,Degen JL, et al.Neonatal bleeding in transgenic mice expressing urokinase-type plasminogen activator [J].Cell.1990,62 (3):447-456．

[8] Sandgren EP, Palmiter RD, Heckel JL, et al.Complete hepatic regeneration after somatic deletion of an albumin-plasminogen activator transgene [J].Cell, 1991, 66(2): 245-256.

[9] Rhim JA, Sandgren EP, Palmiter RD, et al.Complete reconstitution of mouse liver with xenogeneic hepatocytes [J].Proc Natl Acad Sci U S A.1995, 92 (11): 4942-4946.

[10] Petersen J, Dandri M, Gupta S, et al.Liver repopulation with xenogenic hepatocytes in B and T cell-deficient mice leads to chronic hepadnavirus infection and clonal growth of hepatocellular carcinoma [J].Proc Natl Acad Sci U S A.1998, 95(1): 310-315.

[11] Dandri M, Burda MR, Gocht A, et al.Woodchuck hepatocytes remain permissive for hepadnavirus infection and mouse liver repopulation after cryopreservation [J].Hepatology, 2001, 34(4 Pt 1): 824-833.

[12] Meuleman P, Libbrecht L, De Vos R, et al.Morphological and biochemical characterization of a human liver in a uPA-SCID mouse chimera [J].Hepatology.2005, 41(4): 847-856．

[13] Dandri M, Burda MR, Torok E, et al.Repopulation of mouse liver with human hepatocytes and in vivo infection with hepatitis B virus [J].Hepatology.2001, 33(4): 981-988.

[14] Tsuge M, Hiraga N, Takaishi H, et al.Infection of human hepatocyte chimeric mouse with genetically engineered hepatitis B virus [J].Hepatology.2005, 42(5): 1046-1054.

[15] Mercer DF, Schiller DE, Elliott JF, et al.Hepatitis C virus replication in mice with chimeric human livers [J].Nat Med.2001, 7: 927-933.

[16] Heckel JL, Sandgren EP, Degen JL, et al.Neonatal bleeding in transgenic mice expressing urokinase-type plasminogen activator [J].Cell.1990, 62 (3): 447-456.

[17] Sandgren EP, Palmiter RD, Heckel JL, et al.Complete hepatic regeneration after somatic deletion of an albumin-plasminogen activator transgene [J].Cell.1991, 66(2):245-256.

[18] Song X, Guo Y, Duo S, et al.A mouse model of inducible liver injury caused by tet-on regulated urokinase for studies of hepatocyte transplantation [J].Am J Pathol.2009, 175(5): 1975-1983.

[19] Grompe M, al-Dhalimy M, Finegold M, et a1.Loss of fumarylacetoacetate hydrolase is responsible for the neonatal hepatic dysfunction phenotype of lethal albino mice [J].Genes Dev, 1993, 7(12A):2298-2307.

[20] Knox WE, Edwards SW.Enzymes involved in conversion of tyrosine to acetoacetate [J].Methods Enzymol.1955, 2: 287-300.

[21] Lagasse E, Connors H, AI-Dhalimy M, el al.Purified hematopoietic stem cells call differentiate into hepatocytes in vivo [J].Nat Med, 2000, 6: 1229-1234．

[22] Azuma H, Paulk N, Ranade A, et al.Robust expansion of human hepatocytes in Fah-/-/Rag2-/-/IL2rg-/-mice [J].Nat Biotechnol.2007, 25(8): 903-910.

[23] Bissig KD, Le TT, Woods NB, et al.Repopulation of adult and neonatal mice with human hepatocytes: a chimeric animal model [J].Proc Natl Acad Sci U S A.2007, 104(51): 20507-20511．

[24] Bissig KD, Wieland SF, Tran P, et al.Human liver chimeric mice provide a model for hepatitis B and C virus infection and treatment [J].J Clin Invest.2010, 120(3): 924-930.

[25] Lindstedt S, Holme E, Lock EA, et al.Treatment of hereditary tyrosinaemia type I by inhibition of 4-hydroxyphenylpyruvate dioxygenase [J].Lancet, 1992, 340(8823): 813-817.

[26] Grompe M, Lindstedt S, Al-Dhalimy M, et al.Pharmacological correction of neonatal lethal hepatic dysfunction in a murine model of hereditary tyrosinaemia type I [J].Nat Genet, 1995, 10(4): 453-460.

[27] Al-Dhalimy M, Overturf K, Finegold M, et al.Long-term therapy with NTBC and tyrosine-restricted diet in a murine model of hereditary tyrosinemia type I [J].Mol Genet Metab.2002, 75(1): 38-45.

[28] Bissig KD, Grompe M.Response to “can ‘humanized’ mice improve drug development in the 21st century?” [J].Trends Pharmacol Sci, 2013, 34(8): 425.

[29] Hasegawa M, Kawai K, Mitsui T, et al.The reconstituted ‘humanized liver’ in TK-NOG mice is mature and functional [J].Biochem Biophys Res Commun.2011, 405(3): 405-410.

[30] Ito M, HiramatsuH, Kobayashi K, et al.NOD/SCID/gamma(c)(null) mouse: an excellent recipient mouse model for engraftment of human cells [J].Blood.2002, 100(9): 3175-3182.

[31] Hu Y, Wu M, Nishimura T, et al.Human pharmacogenetic analysis in chimeric mice with ‘humanized livers’[J].Pharmacogenet Genomics.2013, 23(2): 78-83.

[32] Washburn ML, Bility MT, Zhang L, et al.A humanized mouse model to study hepatitis C virus infection, immune response, and liver disease [J].Gastroenterology, 2011, 140(4): 1334-1344.

[33] Bility MT, Zhang L, Washburn ML, et al.Generation of a humanized mouse model with both human immune system and liver cells to model hepatitis C virus infection and liver immunopathogenesis [J].Nat Protoc, 2012, 7(9): 1608-1617.