袁愛萍 張 萍

（上海市松江區(qū)婦幼保健院宮頸科，上海 201600）

某地區(qū)人乳頭瘤病毒的基因型分布

袁愛萍 張 萍

（上海市松江區(qū)婦幼保健院宮頸科，上海 201600）

目的了解上海市松江地區(qū)人乳頭瘤病毒（HPV）基因型在宮頸疾病的感染狀況及其各亞型的分布。方法運(yùn)用凱普導(dǎo)流雜交HPV DNA檢測(cè)法對(duì)上海松江地區(qū)2012年1042例宮頸門診就診患者進(jìn)行21種HPV基因型的分型檢測(cè)，分析常見感染亞型和分布特點(diǎn)。結(jié)果研究人群HPV總陽性率51.06%，常見的10種高危型HPV16、58、52、33、53、CP8304、31、66、18、39。常見的2種低危型為6、11。多重感染的比例為33.95%，其中以二重感染最多見。結(jié)論該地區(qū)HPV感染率和多重感染率均較高，常見感染亞型總體符合亞洲人群的分布規(guī)律，又有獨(dú)特的區(qū)域分布特點(diǎn)，值得重視。

乳頭狀瘤病毒；導(dǎo)流雜交；基因型；宮頸腫瘤

宮頸癌是最常見的女性生殖道腫瘤，在全球婦女癌癥病死率中僅次于乳腺癌，中國病例占世界1/3，目前依然嚴(yán)重威脅著中國婦女的健康，近年來我國宮頸癌發(fā)病呈年輕化趨勢(shì)，宮頸癌早期患者比例明顯增多。HPV是宮頸癌及宮頸癌前病變的主要病因，已列為許多國家宮頸癌及癌前病變常規(guī)篩查指標(biāo)，其分型檢測(cè)對(duì)宮頸癌的篩查及治療意義深遠(yuǎn)。2012年美國宮頸癌篩查新指南提出：30歲以上婦女HPV聯(lián)合細(xì)胞學(xué)篩查為首選[1]。使用高危型HPV DNA初篩檢測(cè)可檢出90%以上CIN2/3或癌癥，當(dāng)細(xì)胞學(xué)以交界性或更嚴(yán)重改變?yōu)榻財(cái)帱c(diǎn)時(shí)，高危型HPV檢測(cè)的敏感度比細(xì)胞學(xué)高25%左右。這對(duì)宮頸疾病的初篩、ASCUS分流及治療追蹤都具有重要意義[2]。更說明HPV篩查宮頸癌的意義越來越重大。而且HPV DNA檢測(cè)通常具有97%～100%的陰性預(yù)測(cè)值。較高的陰性預(yù)測(cè)值意味著，如果HPV DNA為陰性，幾乎沒有患病的可能。HPV感染在有性生活史的女性中具有普遍性，但持續(xù)的HPV感染與宮頸病變及宮頸癌發(fā)生相關(guān)。HPV是一種小環(huán)狀雙鏈DNA病毒，目前世界上已發(fā)現(xiàn)110多型。荷蘭的隨機(jī)對(duì)照研究發(fā)現(xiàn)：不同型別HPV有不同的清除率，顯示高危HPV分型是有價(jià)值的。高危型HPV與宮頸癌及癌前病變的發(fā)生相關(guān)[3]。從感染HPV到發(fā)展成宮頸癌需要9～25年時(shí)間，對(duì)HPV分型檢測(cè)能有效篩查出高危人群并予以隨訪和干預(yù)，防止宮頸癌的發(fā)生。故我們運(yùn)用凱普醫(yī)用核酸分子快速雜交系統(tǒng)對(duì)1042例上海松江婦保醫(yī)院宮頸門診患者（包括健康體檢人群）進(jìn)行HPV感染的分型檢測(cè)，以了解上海松江地區(qū)HPV感染的基因型分布，報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

2012年1月至12月松江婦幼保健醫(yī)院宮頸門診就診患者接受HPV基因型分型檢測(cè)1042例，年齡21～68歲，平均年齡（37.8±2.5）歲，來自上海松江地區(qū)或常住該地區(qū)婦女。

1.2 方法HPV DNA基因分型決策

由廣東凱普生物有限公司運(yùn)用膜芯片導(dǎo)流雜交基因分型技術(shù)，進(jìn)行21種HPV分型檢測(cè)（6、42、43、44、16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68、CP8304）HPV分型檢測(cè)采用專用的HPV采樣刷，置于宮頸口逆時(shí)針方向旋轉(zhuǎn)3～5圈，并停留10秒以上，立即浸入專用的標(biāo)本儲(chǔ)存管，及時(shí)送檢。檢出16中高危亞型（HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68及CP8304），另有HPV6、11、42、43和44等5中低危亞型。有2型或2型以上者為多重感染。實(shí)驗(yàn)步驟如下：①樣本DNA提取。采用凱普生物化學(xué)科技公司的基因組抽屜試劑盒。②PCR擴(kuò)增。

每一批同時(shí)擴(kuò)增HPV18型陽性對(duì)照和陰性對(duì)照各1份。反應(yīng)條件為95 ℃，9 min，95 ℃， 20 s，55 ℃，30 s，72 ℃，30 s擴(kuò)增40個(gè)循環(huán)，72 ℃延伸5 min。③導(dǎo)流雜交（采用醫(yī)用核酸分子快速雜交儀及配套試劑盒，具體步驟參見雜交試劑盒說明書。④結(jié)果判斷（根據(jù)芯片上HPV基因型分布的相應(yīng)位點(diǎn)判斷為何種基因型）

2 結(jié) 果

2.1 HPV DNA基因型檢測(cè)

共檢測(cè)到20種基因型，未發(fā)現(xiàn)低危型亞種43型。

2.2 HPV DNA基因型分布

各亞型感染率分布從高到低依次為16型170例、58型110例、52型111例、33型58例、53型51例、31型49例、CP8304型47例、68型42例、66型34例、18型32例、6型23例、56型17例、39型17例、45型16例、11型16例、51型11例、35型10例、42型7例、59型5例、44型4例。

2.3 HPV的單一和多重感染

單一感染370例、二重感染133例、三重感染39例、四重感染15例、五重感染3例。

3 討 論

宮頸癌是較常見的婦科惡性腫瘤之一，據(jù)統(tǒng)計(jì)全球每年的宮頸癌新發(fā)病例約46萬，每年宮頸癌的死亡病例約25萬。在我國，每年宮頸癌的新發(fā)病例數(shù)超過13萬，約占全球的1/4～1/3，發(fā)病率僅次于乳腺癌而位居第二，并呈年輕化及上升趨勢(shì)。高危型別HPV感染的婦女中有相當(dāng)一部分可發(fā)展成子宮頸癌前病變，因此定期檢查高危型HPV感染能有效地判斷子宮頸癌的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)。

我們采用的凱普核酸分子快速雜交基因分型技術(shù)，既能確定感染的HPV亞型，又能判斷多重感染，可以對(duì)CIN治療后進(jìn)行預(yù)后判斷和治療監(jiān)測(cè)。該技術(shù)建立在基因芯片和導(dǎo)流雜交技術(shù)基礎(chǔ)之上，其特點(diǎn)就是靈敏、特異、簡便快速等[4，5]。我們對(duì)1042例標(biāo)本的HPV分型檢測(cè)，有如下發(fā)現(xiàn)：

3.1 常見的HPV基因型存在地理差異

高危型HPV持續(xù)感染是宮頸癌及癌前病變發(fā)生發(fā)展的必要條件，HPV基因型分布有地區(qū)差異，與宮頸癌相關(guān)的型別也不盡相同。除16型居首位以外，其余型別不同的地區(qū)略有差異[6]。在全球范圍內(nèi)，前10位分別是HPV16、18、58、52、51、31、56、33、45、53。廖京平[7]對(duì)北京大學(xué)第一醫(yī)院報(bào)道門診人群中HPV16、58和52是這一人群中最常見的HPV型別，本組調(diào)查與其相一致。畢蕙等[8]對(duì)CIN患者HPV亞型檢測(cè)居前5位的依次為16、58、52、33和31。彭永排等[9]對(duì)廣州市1285例志愿者宮頸人乳頭瘤病毒感染調(diào)查顯示前5位的HPV亞型是52、31、16、58和53型。蔣衛(wèi)平等[10]對(duì)浙江麗水地區(qū)288例HPV感染檢出居前5位的依次是16、58、52、33、53，其余的感染率均低于10%。周楊楊[11]對(duì)江蘇淮安門診患者HPV感染調(diào)查為：HPV感染總陽性率55.6%，亞型高低依次為16、58、52、53、33。我們的研究中，病例均來源于上海松江地區(qū)，檢出率居前5位的依次是16、58、52、33、53，其余的亞型感染率均低于10%。16型感染率最高，沒有明顯的地區(qū)差異，而其他型別的感染率存在較大的地理差異，尤其是18和45型，在國內(nèi)的報(bào)道中感染率均不是很高，HPV18在歐美比較常見，而HPV45在非洲常見，除16型外我們得出58、52、33和53的感染率較高，與畢蕙等[8]報(bào)道的基本一致，尤其與蔣衛(wèi)平等[10]報(bào)道的數(shù)據(jù)非常接近，而其他研究者的結(jié)果相差較大，可能與接診患者不同有關(guān)。而上海松江地區(qū)與浙江地區(qū)較為臨近，從而進(jìn)一步表明常見的HPV感染的基因型存在明顯的人群和地域特點(diǎn)。

3.2 HPV多重感染

本研究HPV多重感染的比例為33.93%。根據(jù)美國已經(jīng)公布的數(shù)據(jù)，這些女性中約有1%將患有CIN2、3。多重HPV感染以HPV16/18亞型為主。不同地區(qū)的差異：亞洲國家HPV多重感染組合中16，52，58是最常見的亞型中以HPV16、45、58、18、31、33和52為主[12]。

3.3 我們未檢測(cè)到低危型43型，可能與這一地區(qū)人群本身未感染這一型別HPV，也有可能樣本量不夠，這一型別感染數(shù)極低有關(guān)，需進(jìn)一步研究。明確一個(gè)地區(qū) HPV流行的主要型別，對(duì)評(píng)估患者預(yù)后，指導(dǎo)臨床制定合理的治療方案有重要意義；與此同時(shí)，還可為科研人員研制有針對(duì)性的基因疫苗提供可靠依據(jù)，為臨床治療作出有益參考。

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[9] 彭永排,林仲秋.廣州市1285例志愿者宮頸人乳頭瘤病毒感染調(diào)查[J].國際醫(yī)藥衛(wèi)生導(dǎo)報(bào),2010,16(1):101.

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[12] 第一屆中國凱普HPV學(xué)術(shù)研討.HPV多重感染與宮頸病變關(guān)系探討[C].2012.

R737.33

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1671-8194（2014）27-0185-02