■趙天章 李慧英

（烏蘭察布職業(yè)學院，內(nèi)蒙古烏蘭察布012000）

黃芪多糖(Astragalus Polysaccharides，APS)是從天然中草藥黃芪中提取的一種多糖，具有抗菌、抗病毒和抗腫瘤作用，且安全無毒，無耐藥性，在畜產(chǎn)品中無殘留。大量研究表明，APS對動物免疫系統(tǒng)具有多方面的調(diào)節(jié)作用，既可有效提高機體的特異性和非特異性免疫功能，也可促進細胞免疫功能和體液免疫功能(李宏全等，2001；Kong等，2004；Qiu 等，2007)[1-3]。在飼料中添加一定劑量的APS可以提高雛雞新城疫抗體滴度（Li等,2009；王俊麗等，2010）[4-5]，改善體內(nèi)免疫球蛋白水平(王超英，1998；司昌德等，2008)[6-7]，對T淋巴細胞亞群也有一定的調(diào)節(jié)作用(宋淑珍等，2005)[8]。有關(guān)APS對肉雞生長性能影響的報道也較多，有研究認為，APS作為飼料添加劑可提高動物生產(chǎn)性能(王俊麗等，2010；李亞杰等,2007)[5，9]；也有研究認為，APS對肉仔雞的生產(chǎn)性能無顯著影響(司昌德等，2008；魏炳棟等,2011)[7，10]。目前，APS在肉雞生產(chǎn)中的應用較為廣泛，但其對肉雞的飼用效果和添加劑量卻不一。本試驗即在前人研究的基礎(chǔ)上，通過在肉雞飼料中添加不同水平的APS，進一步驗證APS對肉雞生長性能和免疫功能的促進效果，并確定APS在肉雞日糧中的適宜添加量，為開發(fā)綠色、無毒的APS飼料添加劑提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗動物及其分組

本試驗采用單因子完全隨機試驗設(shè)計，根據(jù)前人研究的試驗結(jié)果，將試驗用健康艾維茵肉仔雞（1日齡）隨機分為5個日糧處理組（分別含APS 0、0.1%、0.5%、1%和2%），每個處理6個重復，每個重復10只雞，公、母各半。各組雞初始體重經(jīng)方差檢驗差異不顯著(P＞0.05）。APS購自陜西中鑫生物技術(shù)有限公司,為黃色精細粉末,多糖含量50%。試驗的基礎(chǔ)日糧以玉米和大豆粕為主要原料，按照肉雞生長發(fā)育階段配制，試驗分1～21 d和22～42 d兩階段進行，基礎(chǔ)日糧組成和營養(yǎng)水平見表1。所有試驗日糧均以粉料形式飼喂。

1.2 飼養(yǎng)管理

試驗雞采用單層籠養(yǎng)，為了消除環(huán)境因素的影響，將每個處理的6個重復組分布在雞籠的不同位置。雞籠采用紅外線加熱裝置自動控溫，試驗期內(nèi)保持23 h∕d恒定光照，機械通風，在前1～3 d內(nèi)舍溫保持在33℃，之后每周降低3℃，雞舍溫度達到24℃后保持恒定不變。自由采食，自由飲水，按常規(guī)免疫程序進行免疫，其余同肉雞常規(guī)飼養(yǎng)管理。試驗期42 d。

1.3 樣品采集

于試驗開始后2、4、6周末，對各組雞進行稱重、結(jié)料，用于生長性能指標平均日增重、平均日采食量和料肉比的計算；于試驗第28 d和第42 d早8：00，每重復組中隨機抽取1只雞，每處理組6只，翅靜脈采血10 ml于普通采血管中，在4℃下3 000 r∕min離心10 min制備血清，-20℃冷凍保存，用于免疫指標新城疫抗體滴度、T淋巴細胞亞群含量及免疫球蛋白濃度的計算。

1.4 測定指標及測定方法

1.4.1 生長性能指標

表1 基礎(chǔ)日糧組成及營養(yǎng)水平(風干基礎(chǔ))

平均日增重、平均日采食量和料肉比。

1.4.2 新城疫抗體滴度

血清新城疫抗體滴度采用微量血球血凝抑制(HI)試驗法測定，參照姚火春(2002)[11]的方法進行。

1.4.4 血清免疫球蛋白(IgG、IgM及IgA)濃度

血清IgG、IgM及IgA濃度采用免疫比濁法 (Im?munoturbidimetry，ITM)測定，測定儀器為日立7600全自動生化儀(日本日立公司)。試劑盒由濰坊三維生物工程集團有限公司提供。

1.5 試驗數(shù)據(jù)處理

試驗數(shù)據(jù)利用Excel以及SAS軟件（SAS Insti?tute，1998）的回歸分析程序進行統(tǒng)計，對不同APS的處理效應進行一次線性和二次曲線回歸分析，P＜0.05表示回歸關(guān)系顯著，P＜0.10表示回歸關(guān)系趨于顯著。

2 結(jié)果

2.1 APS對肉仔雞生長性能的影響（見表2～表4）

由表2可以看出，整個試驗期間，各APS添加組肉仔雞的平均日增重均高于對照組，其中以1%APS組最高，但當APS的添加量增加為2%時，肉仔雞的平均日增重呈降低趨勢。線性回歸分析結(jié)果表明，在29～42日齡和1～42日齡時，隨著APS添加劑量的增加，肉仔雞平均日增重呈一定的二次曲線增加趨勢（P=0.100；P=0.102）。

表2 APS對肉仔雞平均日增重的影響(g∕d)

表3 APS對肉仔雞平均日采食量的影響(g∕d)

由表3可以看出，所有APS添加組肉雞平均日采食量相對于對照組均有不同程度的升高趨勢(除1～14 d時2%APS組外)。在29～42 d時，隨日糧APS水平的增加，肉雞平均日采食量呈現(xiàn)的二次曲線增加趨勢，趨于顯著(P=0.115)，其中以添加1%APS日糧組最高。但當APS添加量提高到2%時，各試驗期肉雞平均日采食量呈一定的降低趨勢。

表4結(jié)果表明，與對照組相比，各APS組肉仔雞料肉比均低于對照組（除29～42 d的2%APS組外），其中1%APS組的效果最佳。線性回歸分析結(jié)果表明，1～14 d和15～28 d期間，隨著APS添加劑量的增加，肉仔雞平均料肉比呈一定的一次線性劑量依賴關(guān)系（P=0.092；P=0.106）。但當APS的添加量增加到2%時，肉仔雞的平均料肉比呈升高趨勢。

表4 APS對肉仔雞平均料肉比的影響

2.2 APS對肉仔雞免疫功能的影響（見表5～表7）

由表5可以看出，所有APS添加組肉雞新城疫抗體滴度相對于對照組均有不同程度地升高，隨著日糧APS水平的增加，肉雞新城疫抗體滴度呈現(xiàn)的二次曲線增加趨勢，趨于顯著(P=0.105；P=0.122),其中以添加 0.5%～1%的APS組較高；28 d時以1%APS組最高，42 d時以0.5%APS組最高。但當APS添加量提高到2%時，各試驗期肉雞新城疫抗體滴度呈一定的降低趨勢。

由表6可見，在試驗第42 d，隨APS添加量的增加，外周血中含量呈現(xiàn)顯著的一次線性關(guān)系(P=0.049)或二次曲線(P=0.062)增加趨勢，趨于顯著；含量呈現(xiàn)的一次線性關(guān)系(P=0.108)或二次曲線(P=0.052)增加趨勢，趨于顯著；含量呈現(xiàn)的二次曲線(P=0.056)增加趨勢，也趨于顯著。各APS添加組肉仔雞外周血中T淋巴細胞亞群含量均不同程度高于對照組，其中以1%APS添加組最高。當APS添加量增加到2%時，外周血中及含量均呈下降趨勢。

表5 APS對肉雞血清新城疫抗體滴度的影響(Log2)

表6 APS對外周血中T淋巴細胞亞群及的影響

表6 APS對外周血中T淋巴細胞亞群及的影響

注：SEM表示平均數(shù)的標準誤;P＜0.05表示回歸關(guān)系顯著，P＜0.10表示回歸關(guān)系趨于顯著。

項目CD3+(%)28 d 42 d CD4+(%)28 d 42 d CD8+(%)28 d 42 d CD4+∕CD8+28 d 42 d APS水平0 27.92 26.60 15.56 16.82 16.65 15.45 0.93 1.09 0.1%30.15 27.22 18.65 19.34 17.43 17.67 1.07 1.09 0.5%28.36 32.15 22.37 22.78 20.78 20.18 1.08 1.13 1%31.59 37.23 23.73 24.98 22.71 23.82 1.04 1.05 2%28.70 33.48 21.26 20.14 17.52 16.49 1.21 1.22 SEM P值一次4.255 3.132 3.256 2.011 2.245 2.851 0.156 0.164 0.582 0.049 0.220 0.108 0.543 0.962 0.208 0.324二次0.856 0.062 0.760 0.052 0.282 0.056 0.093 0.127

由表7可知，日糧中添加APS可提高肉雞血清IgG、IgM與IgA濃度，尤其對IgG的促進作用更大，其中以1%的APS日糧組最高。當APS添加量增加到2%時，血清IgG、IgM與IgA含量均呈下降趨勢。從回歸統(tǒng)計結(jié)果看，在試驗第42 d時，肉雞血清IgG含量隨APS添加量的增加呈二次曲線增加趨勢(P=0.087)。APS的添加量與肉雞血清IgM和IgA含量之間沒有顯著的劑量依賴關(guān)系。

3 討論

表7 APS對肉雞血清IgG、IgM、IgA濃度的影響(mg∕100 ml)

3.1 APS對肉雞生產(chǎn)性能的影響

已有研究表明，APS可顯著提高肉雞日增重，降低料肉比，對肉雞生產(chǎn)性能有促進作用（李亞杰等,2007)[9]。呂美（2005）[13]研究認為，肉仔雞日糧中添加0.2%和0.3%的APS可顯著提高日增重，降低料肉比。王俊麗等（2010）[5]試驗結(jié)果也表明，APS對試驗前期肉仔雞生產(chǎn)性能有顯著影響，其中以1 000 mg∕kg和2 000 mg∕kg組效果最好，且高劑量APS對肉雞的生產(chǎn)性能可能會產(chǎn)生負面影響。本試驗結(jié)果表明，在整個試驗期間，各APS添加組肉仔雞的平均日增重、平均日采食量均高于對照組，料肉比均低于對照組，其中以1%APS組效果最佳。但當APS的添加量增加為2%時，促進效果減弱，提示適量的APS對肉雞生長性能有促進效果，而高劑量添加則促進效果呈降低趨勢。也有研究認為，APS對肉仔雞的生產(chǎn)性能無顯著影響（司昌德等，2008；魏炳棟等，2011）[7,10]。產(chǎn)生不同結(jié)果的原因可能是不同的APS分子質(zhì)量、溶解度、黏度、一級結(jié)構(gòu)和高級結(jié)構(gòu)導致不同的生物活性造成的（艾連中等，2008）[14]。

3.2 APS對肉雞免疫功能的影響

3.2.1 APS對肉雞新城疫抗體滴度的影響

新城疫抗體滴度是反映機體特異性體液免疫功能的指標。陳洪亮(2002)[15]研究認為，200 mg∕kg APS使肉仔雞新城疫抗體水平提高。司昌德等（2008）[7]試驗也表明，日糧中添加1%和3%的APS均可顯著提高肉仔雞血清中新城疫抗體效價水平。本試驗研究結(jié)果顯示，所有APS添加組肉雞新城疫抗體滴度相對于對照組均有不同程度的升高，其中以添加0.5%～1%的APS組較高，與前人研究結(jié)果一致。但當APS添加量提高到2%時，各試驗期肉雞新城疫抗體滴度呈一定的降低趨勢，提示APS對肉雞免疫功能的影響有一定的劑量依賴關(guān)系和閾值，適量添加可刺激肉雞的免疫機能，而高劑量添加則對肉雞免疫功能的促進效果呈降低趨勢，具體原因還有待于進一步研究探討。

3.2.2 APS對肉雞外周血中T淋巴細胞亞群的影響

T淋巴細胞亞群的穩(wěn)定是維持機體正常免疫調(diào)節(jié)所必需的，是評估機體細胞免疫功能的重要指標。已有許多研究認為，口服或注射多糖可提高機體的T淋巴細胞亞群含量。邱妍等(2008)[16]試驗表明，APS、板藍根多糖、牛膝多糖和山藥多糖均能顯著提高雛雞新城疫HI抗體效價，促進外周血T淋巴細胞增殖，提高T淋巴細胞含量和值，低劑量的APS和板藍根多糖的效果最好。研究證明，米糠多糖也能提高健康雛雞外周血中T淋巴細胞比率，對T淋巴細胞作用不明顯(李淑芳等，2008)[17]。許愛華等(2008)[18]研究認為，銀杏外種皮多糖可提高模型小鼠外周血T細胞百分率，降低血清可溶性白介素2受體含量，促進脾臟T細胞IL-2活性以及血清IgM、IgG和IgA的生成。宋淑珍等(2005)[8]研究發(fā)現(xiàn)，服用APS后可使淋巴細胞水平降低，比值明顯增高，提示APS通過降低T淋巴細胞抑制亞群及增大比值來增加T細胞的殺傷作用。本試驗研究結(jié)果表明，日糧APS對肉雞外周血T淋巴細胞亞群的增殖有促進效果。隨APS添加量的增加，外周血中含量呈顯著的一次線性增加(P＜0.05)，含量呈現(xiàn)二次曲線增加趨勢(P＜0.10)，其中以1%APS添加組最高；比值呈現(xiàn)的二次曲線增加趨勢，趨于顯著(P＜0.10)，其中以2%APS組比值為最高。這些試驗結(jié)果說明，日糧中添加黃芪多糖對肉雞外周血T淋巴細胞亞群增殖的促進效果呈劑量依賴關(guān)系，可提高T細胞亞群含量，刺激機體的細胞免疫機能，但高劑量添加對T淋巴細胞亞群增殖的促進作用呈減弱趨勢。

3.2.3 APS對肉雞血清免疫球蛋白濃度的影響

免疫球蛋白是機體免疫系統(tǒng)中非常重要的免疫分子，主要參與體液免疫。肖嘯等(2009)[19]試驗表明，對犬肌內(nèi)注射APS注射液，能提高犬的機體免疫球蛋白IgG、IgM和IgA的含量，其中以0.5 ml∕kg組效果最好。司昌德等（2008）[7]研究顯示，飼料中添加APS對肉仔雞血清IgG、IgA含量無顯著影響，但血清IgM水平顯著提高，以0.3%效果較好。本試驗研究表明，日糧中添加APS可提高肉雞血清IgG、IgM與IgA濃度，尤其對IgG的促進作用更大，其中以1%的APS日糧組促進效果最大。當APS添加量增加到 2%時，血清IgG、IgM與IgA含量均呈下降趨勢。從回歸統(tǒng)計結(jié)果看，在試驗第42 d時，肉雞血清IgG含量隨APS添加量的增加呈二次曲線增加趨勢(P＜0.10)，APS的添加量與肉雞血清IgM和IgA含量之間沒有顯著的劑量依賴關(guān)系。這些試驗結(jié)果進一步驗證了APS對體液免疫功能的促進效果，也暗示了APS對肉雞體液免疫功能的促進作用有一閾值，超過這一閾值促進作用呈降低趨勢，引起這個結(jié)果的原因尚不清楚。

4 結(jié)論

①日糧中添加APS可提高肉仔雞平均日增重、平均日采食量，降低料肉比，對肉仔雞的生長性能有促進作用，其中以1%APS組效果最佳。但當APS的添加量增加為2%時，促進效果減弱。

②日糧中添加APS可提高肉仔雞新城疫抗體滴度和血清IgG、IgM與IgA濃度，促進外周血T淋巴細胞亞群的增殖，其中以0.5%～1%組的促進效果較好。當APS添加量增加到2%時，各指標均呈下降趨勢。

③綜合生長和免疫指標，肉雞日糧中APS的最佳添加劑量為1%。