李冬煥 綜述 蘇放明 審校

（暨南大學(xué)第二臨床醫(yī)學(xué)院深圳市人民醫(yī)院，廣州 深圳 518020）

孕婦外周血檢測微小RNA行產(chǎn)前診斷的研究進(jìn)展

李冬煥 綜述 蘇放明 審校

（暨南大學(xué)第二臨床醫(yī)學(xué)院深圳市人民醫(yī)院，廣州 深圳 518020）

尋找一種準(zhǔn)確、無創(chuàng)的產(chǎn)前診斷方法取代目前的有創(chuàng)性檢查，提高人口出生質(zhì)量，是人們的追求目標(biāo)。而檢測孕婦外周血中胎兒細(xì)胞游離核酸物質(zhì)逐漸發(fā)展成一種無創(chuàng)產(chǎn)前診斷新途徑。本文綜述了孕婦外周血中檢測微小RNA行產(chǎn)前診斷的可行性及預(yù)測妊娠相關(guān)疾病的研究進(jìn)展。

游離微小RNA；孕婦外周血；無創(chuàng)性產(chǎn)前診斷；妊娠相關(guān)性疾病

長期以來，人們一直致力于尋找一種早期、安全、簡便、準(zhǔn)確的產(chǎn)前診斷方法，以排查胎兒染色體異常疾病，降低病殘兒出生率，提高人口質(zhì)量。傳統(tǒng)的產(chǎn)前診斷方法包括中孕期絨毛膜取樣、羊膜腔或臍血穿刺，因其為有創(chuàng)性操作而不被廣大孕婦所接受。孕婦血液中胎兒有核紅細(xì)胞因數(shù)量稀少且分選困難，經(jīng)宮頸取樣收集胎兒滋養(yǎng)層細(xì)胞因收集方法并非完全無創(chuàng)從而限制了它們在臨床中的應(yīng)用。近年來，檢測孕婦外周血中胎兒細(xì)胞游離脫氧核糖核酸（DNA）或核糖核酸（RNA）物質(zhì)逐漸發(fā)展成一種無創(chuàng)產(chǎn)前診斷新途徑。與此同時(shí)，母血中另外一種游離核酸分子即胎兒游離微小RNA作為一個(gè)新興的研究領(lǐng)域、一種非侵入性的早期檢測手段，目前已顯示出了良好的發(fā)展前景和巨大的應(yīng)用潛力。本文就其研究進(jìn)展做一綜述。

1 miRNA的生物學(xué)特性

微小RNA（microRNA，miRNA，miR）于1993年由Lee等人在線蟲中發(fā)現(xiàn)，長度為18～25個(gè)核苷酸，為非編碼小分子RNA，在基因轉(zhuǎn)錄后水平上通過與靶m RNA互補(bǔ)結(jié)合，抑制m RNA的翻譯或降解m RNA，發(fā)揮對約30%人類基因表達(dá)的調(diào)節(jié)作用，參與調(diào)控個(gè)體發(fā)育、細(xì)胞凋亡、細(xì)胞增殖和分化等生命活動［1］。

miRNA分子同已知的循環(huán)核酸（DNA和 RNA）一樣，廣泛存在于正常人和不同種病人的血清和血漿中，并且隨著生理狀況、疾病的類型和病程的不同而表達(dá)異常。miRNA在組織和細(xì)胞中的表達(dá)具有嚴(yán)格的時(shí)空性和組織特異性，在不同病理生理狀況下呈特征性表達(dá)。

外周血miRNA具有穩(wěn)定性，在不同物種的血漿中均可檢測到miRNA，其表達(dá)水平在同一物種不同個(gè)體間是一致的，且能抵抗4℃、－80℃低溫凍融［2，3］。Arroyo等［4］發(fā)現(xiàn)miRNA在血液中的穩(wěn)定性并非由于miRNA能抵抗血漿核糖核酸酶（R Nases），而是因?yàn)榇蠖鄶?shù)miRNA與蛋白復(fù)合體結(jié)合，其中主要是Argonaute2蛋白復(fù)合體，這些蛋白復(fù)合體對miRNA具有保護(hù)作用，從而使miRNA具有穩(wěn)定性。組織細(xì)胞內(nèi)外的miRNA表達(dá)圖譜是不一樣的，miRNA選擇性地從組織細(xì)胞釋放到外周血中。外周血中miRNA的穩(wěn)定性及其選擇性對其成為疾病診斷的潛在性無創(chuàng)生物標(biāo)志物起著重要的作用［5］。

2008年Chim和同事率先開始將miRNAs作為妊娠并發(fā)癥的生物標(biāo)記的研究工作。當(dāng)時(shí)已知的主要在胎盤表達(dá)的miRNAs大約有100種［6］，但是不知道胎盤來源的miRNAs能否在母血循環(huán)中檢測到并用于診斷。在這個(gè)里程碑式的研究中，Chim等［7］設(shè)想血漿中大部分miRNAs來源于造血系統(tǒng)而與妊娠并不相關(guān)，所以他們比較了晚孕期胎盤組織中和對應(yīng)的母血細(xì)胞中的157種miRNAs，證明出現(xiàn)在胎盤中的34種miRNAs濃度高于孕母血細(xì)胞中的10倍。重要的是，研究者驗(yàn)證了胎盤中4種極其豐富的miRNAs（miR-141，miR-149，miR-299-5p，and miR-135b）可以在孕婦血漿中檢測到，但在產(chǎn)后母體血漿中檢測不到，進(jìn)一步證實(shí)他們來源于胎盤。在妊娠婦女血漿中發(fā)現(xiàn)胎兒的循環(huán)miRNA，而且母親血漿中的胎兒miRNA在分娩前具有穩(wěn)定性，故胎兒的循環(huán)miRNA可以作為產(chǎn)前診斷的分子標(biāo)志。

隨后，幾個(gè)研究也證實(shí)胎盤特異miRNAs存在孕母血漿和血清中。Gilad等［8］研究表明孕婦血清中的miR-526a、miR-527、miR-520-5p表達(dá)水平明顯高于非妊娠婦女，這種生理變化可用于判斷女性是否懷孕。胎盤來源的核酸物質(zhì)（DNA和RNA）最初設(shè)想是以凋亡小體的形式釋放到母體循環(huán)中［9］，而Luo等［10］報(bào)道了miRNAs是由人類胎盤合體滋養(yǎng)細(xì)胞通過外質(zhì)體運(yùn)輸?shù)侥秆h(huán)，循環(huán)中的滋養(yǎng)細(xì)胞釋放的miRNAs反映了妊娠的生理狀態(tài)并可用于診斷。因?yàn)樗鼈兊臐舛群芸赡芊从辰M織特異的生理或病理狀態(tài)，就此推斷相關(guān)的miRNAs可能對妊娠并發(fā)癥做出預(yù)測。

2 外周血miRNA檢測技術(shù)

目前已經(jīng)發(fā)展了多種有效的miRNA檢測方法，根據(jù)研究目的和所取樣本不同可以選擇最適合的檢測方法。RNA印跡（northern blot）是驗(yàn)證和確認(rèn)miRNA的經(jīng)典方法，但該方法繁瑣并且靈敏度低，不適于臨床大規(guī)模的篩選實(shí)驗(yàn)［11］。芯片技術(shù)（microarray）可以實(shí)現(xiàn)快速、高通量地檢測，且可用于多個(gè)miRNA的檢測［12］，但結(jié)果是半定量的，靈敏度和重復(fù)性較差，一般多用于初篩，獲得的結(jié)果通常需要N orthern blot和實(shí)時(shí)定量PCR進(jìn)行驗(yàn)證，而芯片制作和檢測所需的儀器設(shè)備也較昂貴。循環(huán)miRNA的定性檢測可采用miRNA芯片技術(shù)。

實(shí)時(shí)PCR（RT-PCR）作為半定量或定量檢測miRNA表達(dá)的常用實(shí)驗(yàn)方法［13］，在研究miRNA表達(dá)的過程中不斷得到改進(jìn)。實(shí)時(shí)熒光定量PCR可以很精確地定量分析miRNA，是循環(huán)miRNA定量檢測最常用而有效的方法。莖環(huán)（stemloop）實(shí)時(shí)定量RT-PCR是一項(xiàng)高特異度、敏感度的檢測miRNA表達(dá)的實(shí)驗(yàn)技術(shù)，包括設(shè)計(jì)具有莖環(huán)結(jié)構(gòu)的反轉(zhuǎn)錄引物和用miRNA熒光標(biāo)記的特異分子探針進(jìn)行實(shí)時(shí)PCR2個(gè)關(guān)鍵步驟［14］。Mitchell等［15］采用莖環(huán)的RT-PCR方法直接以血清為模板也能檢測到miRNA分子，充分證明這種方法特異性和敏感性方面的優(yōu)勢。Gilad等［8］采用poly A加尾，用帶有錨定引物RT-PCR，然后再用探針進(jìn)行檢測，同樣獲得穩(wěn)定的miRNA分子。

3 miRNA在產(chǎn)科領(lǐng)域的應(yīng)用

基于“成人疾病胎兒起源”學(xué)說［16］，成人疾病可能由早期生命過程所決定，而尋找在孕期發(fā)現(xiàn)異常的方法即產(chǎn)前診斷或產(chǎn)前篩查對下一代健康有深遠(yuǎn)意義。孕婦血清中出現(xiàn)的生物標(biāo)記如果相對無創(chuàng)且數(shù)量豐富，是最有價(jià)值的。循環(huán)核酸在母體血漿中的發(fā)現(xiàn)為非侵入性的產(chǎn)前診斷開創(chuàng)了可能。但研究發(fā)現(xiàn)循環(huán)DNA檢測率低，特異性差，存在大量母體DNA的背景干擾；循環(huán)RNA雖易于檢測，但容易降解，作為標(biāo)記物缺乏穩(wěn)定性。而循環(huán)miRNA有著作為臨床標(biāo)記物的足夠的穩(wěn)定性和特異性。最近幾年對一些妊娠相關(guān)疾病的研究表明，作為妊娠相關(guān)疾病的無創(chuàng)生物標(biāo)記，miRNAs是一種極有潛力的候選者。

為證明miRNAs與妊娠相關(guān)并發(fā)癥有關(guān)，研究者曾采用兩種互補(bǔ)的方法。開始第一種方法為患有感興趣疾病孕婦與健康對照組的胎盤中miRNAs的濃度比較。有疾病相關(guān)差異的候選胎盤miRNAs通過miRNA微陣列芯片或第二代基因測序鑒定，然后由定量實(shí)時(shí)PCR確認(rèn)。因?yàn)檠獫{和血清均為無創(chuàng)診斷樣本，研究者隨后檢驗(yàn)它們是否出現(xiàn)在孕母血漿或血清中。第二種方法開始直接檢測孕母血漿或血清，尋找與感興趣妊娠并發(fā)癥相關(guān)的miRN As的基因表達(dá)模式。通過這些方法驗(yàn)證的miRN As并不需要胎盤特異性表達(dá)，只要這些miRNAs的差異表達(dá)能夠反映孕母的妊娠相關(guān)生理或病理狀態(tài)。大量候選miRNAs已經(jīng)被識別，它們中許多有希望成為特殊妊娠疾病的生物標(biāo)記。

目前國內(nèi)外文獻(xiàn)報(bào)道的miRNA用于產(chǎn)前診斷研究，尤其妊娠相關(guān)疾病預(yù)測取得了一定成果。本文便作以介紹。

3.1 檢測胎兒染色體異常 唐氏綜合征（Dow n syndro me，DS）胎兒表達(dá)其特異性的miRNA［17］，而部分DS胎兒特異性miRNA又在胎盤特異性表達(dá)。因此，孕婦血漿中miRNA可作為胎兒D S無創(chuàng)產(chǎn)前診斷的標(biāo)志物。國內(nèi)李艷麗等［18］選擇在DS胎兒腦組織和心臟組織高表達(dá)的miR-125b-2作為研究目標(biāo)，分別檢測正常孕婦和異常孕婦血清中miR-125b-2的水平。研究結(jié)果顯示唐氏篩查高危孕婦血清miR-125b-2水平高于妊娠中期孕婦，最終確診為異常的孕婦血清miR-125b-2水平明顯高于正常孕婦。因此，miR-125b-2可以單獨(dú)或與其他檢測指標(biāo)聯(lián)合使用，用于無創(chuàng)產(chǎn)前診斷。此外，10例異位妊娠孕婦血清miR-125b-2的水平也明顯高于正常孕婦。miR-125b-2有可能成為區(qū)別正常妊娠與異位妊娠的一個(gè)有用分子標(biāo)記物。

3.2 篩查胎兒結(jié)構(gòu)異常 先天性心臟病是一種常見的嬰兒出生缺陷。雖然目前反映胎兒先天性心臟病的篩查指標(biāo)有多種，如頸半透明度（N T）、β-hC G和P APP-A，但這些指標(biāo)有非特異且假陽性率高。而與心臟發(fā)生相關(guān)的特異性miRNA已被發(fā)現(xiàn)，并且這些特異性miRNA與胎盤miRNA的表達(dá)有關(guān)，而且還出現(xiàn)在妊娠婦女的外周血中，這預(yù)示著妊娠婦女的外周血miRNA可作為胎兒先天性心臟病診斷的潛在性生物標(biāo)志物［19］。而中國醫(yī)科大學(xué)一項(xiàng)研究［20］首次將懷有神經(jīng)管缺陷胎兒的孕婦與健康對照孕婦作比較，其血清中6種miRNAs的表達(dá)不同，這些miRNAs可作為產(chǎn)前監(jiān)測胎兒有無神經(jīng)管缺陷的早期無創(chuàng)分子標(biāo)記。

3.3 預(yù)測子癇前期 研究表明，子癇前期（preeclam psia，PE）發(fā)生時(shí)，也會經(jīng)歷如細(xì)胞凋亡等病理生理過程。因此，推測miRNA在PE的病理過程中可能發(fā)揮了至關(guān)重要的作用。2007年，Pineles等［21］運(yùn)用微陣列技術(shù)分析了PE患者與正常妊娠婦女胎盤組織中157種miRNAs的表達(dá)變化情況，發(fā)現(xiàn)miRNA在這兩組人群中存在明顯差異。這一研究結(jié)果首次證實(shí)miRNA與產(chǎn)科疾病密切相關(guān)。Zhu等［22］用芯片技術(shù)和實(shí)時(shí)熒光定量PCR研究發(fā)現(xiàn)在先兆子癇孕婦胎盤中有34種miRNAs表達(dá)異常，并且在先兆子癇孕婦胎盤中miRNA家族在人染色體19q13.42，13q31.3，xq26.2，xq26.3和14q32.31表達(dá)異常，表明先兆子癇和其它病理情況下涉及到的胎盤中miRNA的異常也可以在母體血漿中反映。而Enquobahrie等［23］運(yùn)用基因芯片技術(shù)對20例PE患者及20例正常妊娠婦女胎盤組織的miRNA進(jìn)行檢測發(fā)現(xiàn)，相較于正常妊娠婦女，PE患者胎盤組織中有8種miRNA表達(dá)異常：miRNA-210上調(diào)，miRNA-328、-584、-139-5p、-500、-1247、-34c-5p、-1下調(diào)，此項(xiàng)結(jié)果與以前的研究相一致［21］。同時(shí)Enquobahrie等［23］認(rèn)為，miRN A-210主要參與內(nèi)皮細(xì)胞對低氧狀態(tài)的應(yīng)答、毛細(xì)血管樣結(jié)構(gòu)的形成以及血管內(nèi)皮生長因子（V E G F）趨化的細(xì)胞遷移等過程，其表達(dá)量增高可能主要與胎盤低氧狀態(tài)相關(guān)。而miRNA-1主要通過對鈣調(diào)節(jié)蛋白m RNA、Mef2a以及Gata4的負(fù)相調(diào)控影響鈣信號。這些證據(jù)均提示，miRNA可以作為無創(chuàng)性產(chǎn)前診斷的分子標(biāo)記物，用于PE早期的預(yù)測。

3.4 預(yù)測胎兒生長受限 Mouillet等［24］發(fā)現(xiàn)胎盤滋養(yǎng)層miRNA是通過缺氧進(jìn)行調(diào)節(jié)的，而這些miRNAs與妊娠婦女血清中的胎兒miRNAs密切相關(guān)；他們檢測和比較正常妊娠婦女與胎兒生長受限（fetal growth restriction，F(xiàn)GR）的妊娠婦女血清中的胎兒miRNA，發(fā)現(xiàn)后者的胎兒miRNA水平明顯增高。最近，Maccani等的研究報(bào)道了胎盤miRN A濃度下降與低出生體重直接相關(guān)［25］。107名足月初產(chǎn)婦的胎盤所表達(dá)的6種miRNAs（miR-16、miR-21、miR-93、miR-135b、miR-146a和miR-182），在低出生體重兒的胎盤中miR-16和miR-21的表達(dá)水平明顯降低。此外，logistic回歸分析肯定了miRNAs的表達(dá)與小于胎齡兒（small for gestational age，SGA）之間的關(guān)系，證明胎盤miR-16的低表達(dá)可預(yù)測超過4倍的機(jī)率為SGA。如果胎盤中miR-16和miR-21均為低表達(dá)，則為SGA的機(jī)率更大。進(jìn)一步研究與胎兒生長有密切相關(guān)的miRN As的表達(dá)，將有助于理解其作為FGR標(biāo)記的潛在機(jī)制及其臨床的使用潛力。

3.5 預(yù)測妊娠期糖尿病 妊娠期糖尿病（gestational diabetes mellitus，G D M）與母兒結(jié)局密切相關(guān)，對妊娠期糖尿病做出早期風(fēng)險(xiǎn)評估將有助于改善母兒結(jié)局。Zhao等完成了一個(gè)多級研究［26］，旨在調(diào)查25～28孕周時(shí)診斷G D M之前血清miRNA的預(yù)測能力，在初始階段，他們使用低密度陣列芯片（taq man low density array chips），繼以實(shí)時(shí)PCR來系統(tǒng)篩選16～19孕周之間收集的血清中的miRN As。結(jié)果顯示將要發(fā)展為G D M的孕婦血液中有3種miRNAs（mir-29a、mir-222和miR-132）濃度明顯低于對照組。該研究闡明了miRNAs作為G D M預(yù)后指標(biāo)的潛在能力，但其臨床應(yīng)用仍然需要進(jìn)一步的調(diào)查和優(yōu)化。

3.6 預(yù)測早產(chǎn) 早產(chǎn)（preterm delivery，P T D）定義為滿28孕周而不足37孕周之前的分娩。早產(chǎn)癥狀為非特異性，并難以預(yù)測哪個(gè)孕婦會早產(chǎn)。最近兩項(xiàng)研究證明早產(chǎn)孕婦的miRNAs表達(dá)不同。Montenegro等用miRNA微陣列分析發(fā)現(xiàn)早產(chǎn)組與足月產(chǎn)組39種miRNAs在絨毛膜上的表達(dá)有差異性，實(shí)時(shí)PCR證實(shí)miR-338、miR-449、miR-136，、和miR-199a足月時(shí)是減少的［27］。另一個(gè)研究顯示早產(chǎn)組的胎盤一部分miRNAs（如miR-15b、miR-181a、miR-210、miR-296-3p、miR-483-5p和miR-493）的表達(dá)發(fā)生了變異［28］。在血清中發(fā)現(xiàn)這些miRNAs并用于預(yù)測早產(chǎn)還有待觀察。

3.7 預(yù)測復(fù)發(fā)性流產(chǎn) 復(fù)發(fā)性流產(chǎn)（recurrent pregnancy loss，RPL）發(fā)生在0.4%～1%的妊娠中，定義為在3次或以上臨床可見的妊娠（異位妊娠、宮內(nèi)妊娠，但不包括生化妊娠）20孕周之前發(fā)生的流產(chǎn)。RPL的病因經(jīng)常不清楚，也缺乏診斷證據(jù)及治療方法?；虍惓Ｊ菍?dǎo)致RPL的一個(gè)重要因素，某些單核甘酸多態(tài)性（single-nucleotide polym orphisms，SNPs））也與RPL相關(guān)。兩項(xiàng)最近的研究調(diào)查了miRNA多態(tài)性與RPL的聯(lián)系。一個(gè)研究比較了217個(gè)RPL患者和431個(gè)正常對照中初級miRNA（pri-miR）-125a上的2個(gè)不同的等位基因，miR-125a的產(chǎn)物改變增加了中國漢族中一個(gè)人群發(fā)生RPL的風(fēng)險(xiǎn)［29］。在另一個(gè)病例對照研究中，研究人員發(fā)現(xiàn)4個(gè)miRNA前體多態(tài)性（miR-196a2C C，miR-499 AG＋G G，miR-196a2C C／miR-499 AG＋G G com bination）和韓國婦女RPL的發(fā)生有關(guān)［30］。如果確定在不同種族人群中這些miRN A多態(tài)性和RPL之間存在的相似聯(lián)系將會更有意義。

4 結(jié)語與展望

miRNAs廣泛存在于外周血中，具有穩(wěn)定性和釋放的選擇性，其與某些生理病理現(xiàn)象密切相關(guān)，對疾病的發(fā)生、發(fā)展起著重要作用，而且采集外周血的標(biāo)本相對方便及具有無創(chuàng)性。因此，外周血miRNA可望成為新的疾病早期診斷、鑒別診斷及預(yù)后判斷的無創(chuàng)性生物標(biāo)志物。

miRNAs作為一種新型的無創(chuàng)性產(chǎn)前診斷指標(biāo)，發(fā)展前景良好。但是由于相關(guān)研究只是在小范圍內(nèi)進(jìn)行，因此仍需要進(jìn)行更多大規(guī)模的研究來提供證據(jù)。雖然對血清中含有許多來源于不同組織和器官miRNAs已經(jīng)很明確，但循環(huán)miRNAs應(yīng)用于產(chǎn)前診斷，腫瘤及其他疾病診斷方面還處于初級階段，單個(gè)的miRNA標(biāo)記物在不同的病理?xiàng)l件，即使是相同的疾病，使用一種標(biāo)記物也是不可靠的方法；而且目前實(shí)驗(yàn)樣本量較小，檢測方法繁瑣且價(jià)格昂貴，這些都不利于臨床應(yīng)用。如果建立一套標(biāo)準(zhǔn)miRNA標(biāo)記物表達(dá)譜，隨著技術(shù)的進(jìn)步，在不久的將來，不僅血清或血漿中miRNA，其它體液中的miRNA，如尿液和唾液中的miRNA也可作為標(biāo)記物應(yīng)用于臨床，甚至為臨床多種疾病提供治療靶點(diǎn)。

目前大部分研究只是從外周血miRNA的表達(dá)上調(diào)或下調(diào)來預(yù)測某種或某些疾病，對疾病診斷的特異性研究很少。如果能對其特異性、準(zhǔn)確性和規(guī)范化方法等全面深入研究，外周血miRNA作為新的疾病診斷的無創(chuàng)性標(biāo)志物的預(yù)測就將變?yōu)楝F(xiàn)實(shí)。相信隨著分子生物學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，孕婦血漿及血清中的胎兒游離核苷酸，特別是miRNA必將成為無創(chuàng)傷性產(chǎn)前遺傳病診斷最具臨床應(yīng)用價(jià)值的標(biāo)記物。

［1］Lee R C，F(xiàn)einbau m R L，Am bros V.The C.elegans heterochronic gene lin-4 encodes small RNAs with antisense com plementarity to lin-14［J］.Cell，1993，75（5）：843-854.

［2］Chen X，Ba Y，Ma L，et al.Characterization of microRNAs in seru m：a noveLClass of bio markers for diagnosis of cancer and other diseases［J］.Cell Res，2008，18（10）：997-1006.

［3］Lodes MJ，Caraballo M，Suciu D，et al.Detection of cancer with seru mmiRNAs on an oligonucleotide microarray［J］.PloS One，2009，4（7）：e6229.

［4］Arroyo JD，Chevillet JR，Kroh E M，et al.Argonaute2 complexes carry a population of circulating microRNAs independent of vesicles in hu man plasma［J］.P N AS，2011，108（12）：5003-5008.

［5］Pigati L，Yaddanapudi SC，Iyengar R，et al.Selective release of MicroRNAspecies from normal and malignant ma m mary epitheliaLCells［J］.P LoS O ne，2010，5（10）：e13515.

［6］Liang Y，Ridzon D，W ong L，et al.Characterization of microRNAexpression profiles in normal hu man tissues［J］.B MC Geno mics，2007，8：166.

［7］Chim SSC，Shing T K F，H ung E C W，et al.Detection and characterization of placental microRNAs in maternal plasma［J］.Clin Chem，2008，54（3）：482-490.

［8］Gilad S，Meiri E，Yogev Y，et al.Seru mmicroRNAs are pro mising novel bio markers［J］.PLoSO N E，2008，3：e3148.

［9］Ishihara N，Matsuo H，Murakoshi H，et al.Increased apoptosisin the syncytiotrophoblastin hu man term placentas complicated by either preeclam psia orintrauterine growth retardation［J］.Am J O bstet Gynecol，2002，186（1）：158-166.

［10］Luo SS，Ishibashi O，Ishikawa G，et al.H u man villous trophoblasts express and secrete placenta-specificmicroRNAs into maternaLCirculation via exoso mes［J］.Biol Reprod，2009，81（4）：717-729.

［11］Pall G S，H amilton AJ.Im proved northern blot Method for enhanced detection of small RNA［J］.Nat Protoc，2008，3（6）：1077-1084.

［12］Liu C G，Calin G A，Meloon B，et al.An oligonucleotide microchip for geno me-wide microRNAprofiling in hu man and m ouse tissues［J］.Proc Natl Acad Sci U S A，2004，101（26）：9740-9744.

［13］Resnike K E，Alde H，H agan JP，et al.The detection of differentially expressed microRNAs from the seru m of ovarian cancer patients using a novel real-time PCRPLatform［J］.Gynecologic Oncology，2009，112：55-59.

［14］Zhang H H，W ang XJ，Li G X，et al.Detection of let-7a microRNAby real time PCR in gastric carcino ma［J］.W orld Gastroenterol，2007，13（20）：2883-2888.

［15］Mitchell PS，Parkin R K，Kroh E M，et al.Circulating microRN As as stable blood-based markers for cancer detection［J］.Proc Natl Acad Sci U SA，2008，105（30）：10513-10518.

［16］Morley R.Fetal origins of adult disease［J］.Semin Fetal Neonatal Med，2006，11（2）：73-78.

［17］K uhn D E，N uovo GJ，Martin MM，et al.H u m m chro m oso me 21-derivedmiRNAs are overexpressed in dow n syndro me bnins and hearts［J］.Biochem Biophys Res com m un，2008，370（3）：473-477.

［18］李艷麗，柳芳，梁紅艷，等.母體血清miR-125b-2直接檢測應(yīng)用于無創(chuàng)產(chǎn)前診斷的相關(guān)研究［J／C D］.中華臨床醫(yī)師雜志（電子版），2012，6（15）：4328-4331.

［19］Yu Z，Han S，H u P，et al.Potential role of maternal seru m microRNAs as a bio marker for fetaLCongenital heart defects［J］.Med Hypotheses，2011，76（3）：424-426.

［20］Hui Gu，H ui Li，Li Zhang，et al.Diagnostic role of microRNAexpression profile in the seru m of pregnant wo men with fetuses with neural tube defects［J］.J Neurochem，2012，122：641-649.

［21］Pineles B L，Ro mero R，Montenegro D，et al.Distinct subsets of microRNAs are expressed differentially in the hu man placentas of patients with preecla m psia［J］.Am J O bstet Gynecol，2007，196（3）：261.e1-6.

［22］Zhu X M，H an T，Sarqent IL，et al.Differential expression profile ofmicroRNAs in hu man placentas from preecla m ptic pregnancies vs normal pregnancies［J］.Am J O bstet Gynecol，2009，661：1-7.

［23］Enquobahrie D A，Abetew D F，Sorensen T K，et al.Placental microRNAexpression in pregnancies com plicated by preeclam psia［J］.Am J O bstet Gynecol，2011，204（2）：178.e12-21.

［24］Mouillet JF，Chu T，H ubeLC A，et al.The levels of hypoxiaregulated microRNAsin plasma of pregnant wo men with fetal growth restriction［J］.Placent，2010，31（9）：781-784.

［25］Maccani MA，Padbury JF，Marsit CJ.miR-16 and miR-21 expression in the placenta is associated with fetal growth［J］.P LoS O ne 2011；6（6）：e21210.

［26］Zhao C，Dong J，Jiang T，et al.Early second-trimester seru mmiRNAprofiling predicts gestational diabetesmellitus［J］.P LoS O ne 2011；6（8）：e23925.

［27］Montenegro D，Ro mero R，Kim SS，et al.Expression patterns of microRNAs in the chorioa m niotic mem branes：a role for microRNAs in hu man pregnancy and parturition［J］.J Pathol，2009，217（1）：113-121.

［28］Mayor L K，Toloubeydokhti T，Cruz AC，et al.Expression profile of microRNAs and m RNAs in hu man placentas from pregnancies com plicated by preeclam psia and preterMLabor［J］.Reprod Sci，2010，18（1）：46-56.

［29］HuY，Liu C M，Qi L，et al.T wo com m on SNPs in pri-miR-125a alteRThematuremiRNAexpression and associate with recurrent pregnancy lossin a H an-Chinese population［J］.RNABiol，2011，8（5）：861-872.

［30］Jeon YJ，Choi Y S，Rah H，et al.Association study of microRNApoly m orphismswith riskof idiopathic recurrent spontaneous abortion in K orean wo men［J］.Gene，2012，494（2）：168-173.

編輯：郁君

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10.13470／j.cnki.cjpd.2014.02.007

2014-05-06）