桑珍珍 許云 盛英杰 賈冬 金帥 張鵬思 趙敏

DOI：10.3760/cma.j.issn.1671-0282.2014.12.007

基金項目：國家自然科學(xué)基金（81171793）;國家臨床重點?？平ㄔO(shè)項目資助

作者單位：110004沈陽，中國醫(yī)科大學(xué)附屬盛京醫(yī)院急診科

通信作者： 趙敏，Email：zhaom@sj-hospital.org.

【摘要】目的探討重組人促紅細胞生成素（recombinant human erythropoietin，rHuEPO）對盲腸結(jié)扎穿孔術(shù)（CLP）所致大鼠急性肝損傷的保護作用。方法96只雄性SD大鼠隨機（隨機數(shù)字法）分為：假CLP組（對照組），CLP組（膿毒癥組），rHuEPO組。采用盲腸結(jié)扎穿孔術(shù)復(fù)制急性肝損傷的動物模型，rHuEPO組造模后即刻經(jīng)尾靜脈推注rHuEPO 5000 U/kg。手術(shù)后連續(xù)觀察24 h，選擇術(shù)后2 h、6 h、12 h、24 h為觀察點。分別在各時點隨機處死大鼠，采用酶聯(lián)免疫法（ELISA法）檢測血清TNF-α、iNOS水平變化;同時檢測肝功能（ALT、AST）;采用光鏡和透射電鏡觀察肝組織形態(tài)學(xué)變化。結(jié)果①各時間點大鼠血清中ALT、AST、TNF-α、iNOS水平的變化為膿毒癥組及rHuEPO組上述指標(biāo)明顯高于對照組;rHuEPO組與膿毒癥組相比，上述指標(biāo)明顯降低，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01）。②光鏡及電鏡觀察發(fā)現(xiàn)，膿毒癥時肝臟病理學(xué)改變?yōu)榫衷钚愿渭毎麎乃?，炎性細胞浸潤，小葉間靜脈充血擴張，肝細胞核固縮，線粒體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)明顯減少。rHuEPO組肝臟病理學(xué)改變較CLP組明顯減輕。結(jié)論rHuEPO能夠降低血清中ALT、AST、TNF-α、iNOS水平，發(fā)揮調(diào)節(jié)炎癥反應(yīng)進而改善肝功能的作用，對感染所致急性肝損傷具有一定的保護作用。

【關(guān)鍵詞】重組人促紅細胞生成素;盲腸結(jié)扎穿孔術(shù);膿毒癥;急性肝損傷

Protective effects of recombinant human erythropoietin against acute liver injury induced by sepsis in rats

Sang Zhenzhen， Xu Yun， Sheng Yingjie， Jia Dong， Jin Shuai， Zhang Pengsi， Zhao Min. Department of Emergency Medicine Shengjing Hospital of China Medical University，Shenyang 110004，China

Corresponding author：Zhao Min， zhaom@sj-hospital.org

【Abstract】ObjectiveTo investigate the protective effects of recombinant human erythropoietin （rHuEPO） on caecal ligation and puncture （CLP）-induced acute liver injury. Methods Ninety-six healthy male Sprague-Dawley rats weighing 250-300 g were randomly divided into 3 groups： normal control group （sham group， n=32）， CLP model group （sepsis group， n=32） and rHuEPO treatment group （n=32）. The rat model of sepsis was established by caecal ligation and puncture. In treatment group， rats were treated with rHuEPO 5000 U/kg administered through caudalis vein after CLP procedure. Continuous observation was carried out until 24 h after modeling. Of each group， 8 rats were sacrificed at 2 h， 6 h， 12 h and 24 h， respectively， and then the liver tissue samples and blood samples were collected. Blood samples were assayed for determining the levels of serum cytokines [tumor necrosis factor-alpha （TNF-α）]， and inducible nitric oxide synthase （iNOS） by using the enzyme-linked immunoadsorbentassay （ELISA） method. The levels of serum alanine aminotransferase （ALT） and aspartate aminotransferase （AST） were also detected. Histopathological changes of liver tissues were observed under optical and transmission electron microscopy.Results ①The levels of ALT， AST， TNF-a， iNOS in serum of rats in control group were lower than those in model group and rHuEPO group （P<0.01）. The levels of TNF-α， IL-6 and iNOS in serum of rats in rHuEPO group were decreased significantly compared with model group （P<0.01）. ② The optical microscopy and the transmission electron microscopy showed hepatocyte edema， liver focal necrosis， inflammatory cell infiltration in portal area and severe congestion of interlobular veins， hepatocyte karyopyknosis， mitochondrial and endoplasmic reticulum （ER） obviously decreased in sepsis group at 24 h. Hepatic injury was attenuated after employment of rHuEPO.ConclusionsRecombinant human erythropoietin can inhibit the levels of ALT， AST， TNF-a， iNOS in serum ，thus modifying the inflammatory response and providing protective effects against acute liver injury in the wake of infection.

【Key words】Recombinant human erythropoietin;Caecal ligation and puncture; Sepsis;Acute liver injury

全身炎癥反應(yīng)綜合征（systemic inflammatory response syndrome，SIRS）是因感染或非感染病因作用于機體而引起的機體失控的自我持續(xù)放大和自我破壞的全身性炎癥反應(yīng)。膿毒癥（sepsis） 是由感染引起的全身炎癥反應(yīng)綜合癥（SIRS） ，其本質(zhì)是機體過度釋放炎癥介質(zhì)導(dǎo)致炎癥反應(yīng)失控和免疫功能紊亂，它是多器官功能障礙（multiple organ dysfunction syndrome，MODS） 的前兆，其導(dǎo)致的膿毒性休克是主要的死亡原因^[1]。臨床上胃腸道往往亦是外科打擊的“中心”器官，危重患者一旦出現(xiàn)“肝功能損害—能量代謝障礙—自身抵抗力下降—膿毒癥加重—肝功能障礙進一步加劇”的級聯(lián)反應(yīng)，預(yù)后較差，因此肝功能的保護是能否成功救治危重病患者的關(guān)鍵^[2]。近年研究發(fā)現(xiàn)，臨床上用于改善尿毒癥患者貧血狀態(tài)的重組人促紅細胞生成素（rHuEPO）具有抗氧化、抑制細胞凋亡、抑制炎癥反應(yīng)、誘導(dǎo)缺血耐受及促進腎小管上皮細胞再生等作用，是一種維持機體內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定的多功能細胞因子，對多種器官和組織具有多種保護作用^[3]。本實驗通過盲腸結(jié)扎穿孔術(shù)建立膿毒癥大鼠急性肝損傷模型，觀察rHuEPO對膿毒癥所致急性肝損傷的保護作用及其機制，為臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)。

1材料與方法

1.1實驗動物、分組、模型制備

7周齡Sprague-Dawly（SD）健康雄性大鼠，體質(zhì)量250～300 g（由中國醫(yī)科大學(xué)附屬盛京醫(yī)院動物部提供），清潔級，96只。實驗大鼠隨機（隨機數(shù)字法）分成3組：（1）假CLP組（n=32，對照組）：只翻動盲腸，不結(jié)扎穿孔;（2）CLP組（n=32，膿毒癥組）：行盲腸結(jié)扎穿孔術(shù);（3）rHuEPO組（n=32）：行盲腸結(jié)扎穿孔術(shù)后即刻經(jīng)尾靜脈靜注rHuEPO 5000 IU/kg 。術(shù)后均補充生理鹽水3 mL/100 g抗休克。

CLP模型的標(biāo)準(zhǔn)步驟主要參考Rittirsch等^[4]的報道，實驗前12 h禁食過夜，自由飲水。CLP組和rHuEPO組采用經(jīng)典的盲腸結(jié)扎穿孔法（CLP）復(fù)制膿毒癥急性肝損傷模型，即用10%水合氯醛0.3 mL/100 g腹腔麻醉，無菌條件下沿腹中線切開腹壁，切口長約2 cm，逐層分離、結(jié)扎盲腸，在盲端腸壁用9號針穿刺2次，留置1條長1 cm寬2 ㎜、兩頭貫穿盲腸的橡皮片，擠出少許糞便，將盲腸還納腹腔，逐層縫合腹壁，清醒后轉(zhuǎn)入代謝籠內(nèi)自由進食水。假手術(shù)組大鼠麻醉后，除不進行盲腸結(jié)扎穿刺外，其余操作同CLP手術(shù)組。術(shù)畢補充生理鹽水3 mL/100 g，術(shù)后自由飲食水。

1.2實驗藥品和試劑

重組人促紅細胞生成素（rHuEPO） 購自沈陽三生制藥有限公司。腫瘤壞死因子酶聯(lián)免疫分析（TNF-α ELISA）試劑盒和誘導(dǎo)型一氧化氮合成酶酶聯(lián)免疫分析（iNOS ELISA）試劑盒均購自美國RD公司。10%水合氯醛（東北制藥總廠）;滅菌生理鹽水100 mL（大冢制藥公司）;10%甲醛溶液（東北制藥總廠）。

1.3主要儀器

鼠操作臺、無菌手術(shù)器械、環(huán)氧乙烷滅菌子彈頭、上海80-2離心沉淀器、DS-671電子秤、Saotorius電子天平、4 ℃冰箱、-20 ℃冰箱、-80 ℃冰箱、LS-100型病理石蠟包埋機、切片機、烘箱、ZT-12M生物組織自動脫水機、 ?NIKonEelipseE800顯微鏡、日本日立H-750透射電子顯微鏡、日本SONY數(shù)碼照相機、LDZX-4OBI型立式自動電熱壓力蒸汽滅菌器、美國 VITROS950全自動干生化分析儀。

1.4標(biāo)本留取及處理

1.4.1血標(biāo)本的留取與處理從術(shù)后腹壁縫合結(jié)束開始計時，分別于2 h、6 h、12 h、24 h取材。下腔靜脈抽血5 mL， 離心（3000 r/min）15 min，取上清，無菌條件下裝入無菌EP管后，置-80 ℃低溫冰箱中保存。標(biāo)本收集完整后，采用酶聯(lián)免疫法統(tǒng)一測定細胞因子TNF-α、iNOS。采用生化分析儀測定血清ALT、AST。

1.4.2組織標(biāo)本的留取與處理大鼠放血處死后迅速剪開腹腔，立即從腹腔取出肝臟。取肝組織一塊置于10%甲醛溶液中以備光鏡檢查。取肝組織，將其切成1 mm×1 mm×1 mm大小的組織塊，置于2.5%戊二醛溶液中24～48 h待電鏡檢查。

1.5檢測指標(biāo)及方法

1.5.1肝功能分析采用全自動干生化分析儀測定大鼠血清ALT、AST指標(biāo)。

1.5.2大鼠血清腫瘤壞死因子（TNF-α）、誘導(dǎo)型一氧化氮合成酶（iNOS）均采用ELISA法測定，嚴(yán)格按照試劑盒說明書進行檢測。

1.6統(tǒng)計學(xué)方法

實驗數(shù)據(jù)計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，采用SPSS 17.0版軟件包（SPSS Company，Chicago，Illinois，USA）進行分析，單因素兩組以上的均數(shù)間差異比較用單因素方差分析（One Way ANOVA），以P<0.05為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1一般情況的觀察

膿毒癥時大鼠病態(tài)明顯，蜷縮，活動減少，不飲水，不再合群取暖，豎毛，呼吸急促，分泌物由鼻腔溢出，眼角出現(xiàn)滲出物等。剖腹可見渾濁膿血性滲液、惡臭、腸管水腫、空腸腸管脹氣，腸粘連，并可見散布于盲腸、大網(wǎng)膜、腸系膜等處出血、壞死灶和皂化斑;肝臟大小無明顯改變，顏色呈暗紅色，表面可見散在的點狀瘀血等。對照組大鼠麻醉清醒后活動基本如常。rHuEPO處理后，大鼠上述病態(tài)表現(xiàn)較輕：仍飲水、眼角未出現(xiàn)滲出物、剖腹可見清亮滲液，無腸管脹氣和腸粘連，肝臟色澤稍暗，未見出血點。

2. 2各組大鼠肝功能的變化

從表1-2中可以看到，CLP術(shù)后6 h，大鼠血清中ALT、AST的含量開始升高，24 h達最高，各時間點之間差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。膿毒癥時，大鼠血清中ALT、AST的含量顯著高于同時間點假CLP組，差異有顯著統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01），用rHuEPO治療后，大鼠血清中ALT、AST的含量明顯回降，但是仍然高于正常對照組（P<0.01），差異有顯著統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01）。見表 1-2。

2. 3 各組大鼠血清TNF-α、iNOS含量的變化

表3、表4看出，CLP術(shù)后6 h大鼠血清中TNF-α、iNOS的含量開始升高，24 h達到高峰，各時間點之間差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。膿毒癥時，大鼠血清中上述指標(biāo)的含量顯著高于同時間點假CLP組，差異有顯著統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）;用rHuEPO治療后，大鼠血清中上述指標(biāo)的水平明顯回降，但是仍然高于同時間點假CLP組（P<0.05）。

2.4CLP術(shù)后24 h肝組織形態(tài)學(xué)改變

光鏡：對照組肝細胞形態(tài)正常。膿毒癥時可見局灶性肝細胞壞死。壞死灶中大量中性粒細胞浸潤，壞死灶周圍肝細胞呈水腫樣改變，肝索排列紊亂，門管區(qū)亦可見大量炎癥細胞浸潤，小葉間靜脈充血擴張。rHuEPO處理后，肝細胞壞死面積明顯減少，肝細胞水腫減輕，門管區(qū)炎性細胞浸潤較少，小葉間靜脈充血減輕。見圖1。電鏡：對照組肝細胞核、線粒體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)基本正常。膿毒癥時可見肝細胞核固縮、染色質(zhì)呈塊狀、核膜不清，線粒體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)明顯減少，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴張、脫顆粒。rHuEPO處理后，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和線粒體僅見個別擴張，個別核膜不完整、染色質(zhì)邊集。見圖2。

A：對照組大鼠肝組織肝細胞形態(tài)正常，門管區(qū)無炎癥細胞浸潤，小葉間靜脈無充血;B：膿毒癥組大鼠肝組織局灶性肝細胞水腫壞死，肝索排列紊亂，壞死灶及門管區(qū)大量炎癥細胞浸潤，小葉間靜脈充血擴張;C：rHuEPO組大鼠肝組織肝細胞水腫減輕，點狀壞死區(qū)炎性細胞浸潤減少，小葉間靜脈充血減輕

圖13組大鼠肝組織（HE×200）

Fig1Liver tissue in three group （HE×200）

A：對照組大鼠肝臟細胞器肝細胞核、線粒體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)基本正常;B：膿毒癥組大鼠肝臟細胞器肝細胞核固縮、染色質(zhì)呈塊狀、線粒體明顯腫脹、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)明顯減少;C：rHuEPO組大鼠肝臟細胞器細胞核內(nèi)部分染色質(zhì)邊集、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)未見顯著減少、線粒體腫脹程度較輕

圖23組大鼠肝臟細胞器（Em×12 000）

Fig2Organelles of liver in three groups（Em×12 000）

3討論

盲腸結(jié)扎穿孔（cecal ligation and puncture， CLP）導(dǎo)致的膿毒癥是一個經(jīng)典模型，被廣泛用于模擬臨床膿毒癥。盲腸穿孔導(dǎo)致駐扎在腸道的微生物滲出，造成腹部局部感染、細菌性腹膜炎，隨后引起全身性炎癥反應(yīng)綜合征（systemic inflammatory response syndrome，SIRS），MODS甚至死亡^[5]。膿毒癥時，肝臟損傷發(fā)生較早，最終可發(fā)展為肝衰竭。因此CLP模型是篩選和研究治療或預(yù)防感染致肝損傷藥物的理想模型。

腫瘤壞死因子-a （tumor necrosis factor-α，TNF-α）是細胞因子中最早出現(xiàn)的最主要的一種^[6]，它能啟動后續(xù)的一系列病理生理改變，與炎癥反應(yīng)的程度相關(guān)。誘導(dǎo)型一氧化氮合酶（inducible NO synthase，iNOS） 是核轉(zhuǎn)錄因子（nuclear factor-kappaB，NF-κB）的下游效應(yīng)分子，參與炎癥反應(yīng)^[7]。iNOS被激活時產(chǎn)生的大量NO及其代謝產(chǎn)物超氧亞硝酸鹽具有細胞毒性作用^[8]。NO可通過線粒體途徑參與膿毒性炎癥反應(yīng)所介導(dǎo)的肝臟損傷^[9]。在膿毒癥導(dǎo)致ARDS的研究中發(fā)現(xiàn)，細胞因子TNF-α、IL-1為近端細胞因子，通過刺激肺細胞產(chǎn)生遠端細胞因子，始動細胞因子瀑布。它們相互誘導(dǎo)，主要通過單核細胞和巨噬細胞產(chǎn)生趨化物質(zhì)，使外周血的炎性細胞在肺內(nèi)聚集。遠端細胞因子包括IL-6、IL-8，它們積極參與肺炎癥和修復(fù)^[10]。因而TNF-αa、iNOS都是目前基礎(chǔ)實驗中經(jīng)常選用的評價機體炎癥反應(yīng)程度和治療效果的指標(biāo)。本實驗研究發(fā)現(xiàn)，CLP術(shù)后大鼠的肝臟進行性充血腫大，血清ALT、AST進行性升高以及肝細胞形態(tài)學(xué)進行性惡化提示發(fā)生了肝臟損傷，可確認(rèn)大鼠CLP術(shù)后膿毒癥模型造成了急性肝損傷。膿毒癥時炎癥感染致急性肝損傷的機制可能為：各種損傷通過觸發(fā)宿主體內(nèi)的內(nèi)源性介質(zhì)，在多種炎性細胞的參與下，使細胞因子網(wǎng)絡(luò)各成員間相互的調(diào)控失敗，造成細胞因子間的惡性刺激，激發(fā)體液級聯(lián)反應(yīng)，導(dǎo)致全身的膿毒性反應(yīng)和遠隔器官系統(tǒng)功能的損害——肝損傷。感染時所釋放的毒素（特別是G-菌內(nèi)毒素）以及活化的炎癥細胞釋放的炎癥因子作用于炎癥細胞，激活Toll樣受體4（toll-like receptor 4，TLR4），經(jīng)過一系列級聯(lián)信號傳遞，激活NF-κB細胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，繼而啟動TNF-α、IL-1、IL-6、IL-8等促炎細胞因子和粘附分子等基因的轉(zhuǎn)錄。由炎癥細胞活化而分泌的炎癥介質(zhì)又進一步促進炎癥細胞的激活，二者互為因果，形成炎癥瀑布（inflammatory cascade），引起肝損傷。NF-κB的下游效應(yīng)分子iNOS，在炎癥感染時過度表達，導(dǎo)致NO的過度合成與釋放，NO及其代謝產(chǎn)物超氧亞硝酸鹽介導(dǎo)肝臟損傷。

有研究發(fā)現(xiàn)膿毒癥時釋放的炎癥介質(zhì)阻止促紅細胞生成素（erythropoitin，EPO）生成，在腎內(nèi)IL-6阻止EPO生成，在體外IL-1、TNF-α、TGF-β阻止EPO生成。EPO是一種刺激骨髓造血的糖蛋白類激素，主要由腎臟皮質(zhì)、髓質(zhì)交界處的腎小管旁細胞分泌，相對分子質(zhì)量為30.4×103[11]。重組人紅細胞生成素（recombinant human erythropoietin ，rHuEPO）的基因序列和EPO的基因序列大體相同，只是多增加個糖基。近年來發(fā)現(xiàn)，EPO是一種多功能細胞保護因子，具有抗凋亡、抑制炎性反應(yīng)、抗氧化應(yīng)激等作用^[12]。有研究表明，EPO在炎癥反應(yīng)過程中具有類似類固醇樣的抗炎作用，可抑制炎性細胞的浸潤和前炎性因子的表達^[13]。Hojman等^[14]證明EPO預(yù)處理可明顯抑制心肌缺血-再灌注損傷后的NF-кB的活性，并降低循環(huán)TNF-α和IL-6的水平。Pappo等^[15]研究發(fā)現(xiàn)EPO可以抑制肝臟缺血-再灌注損傷后的NF-кB的表達，進而減輕肝臟損傷。Tsao等^[16]證明EPO可以降低膿毒癥大鼠血清中IL-6的水平和肺組織iNOS的表達。有國內(nèi)外學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)，EPO可以抑制急性腎損傷大鼠腎臟iNOS及NF-кB的表達，調(diào)節(jié)炎癥反應(yīng)，從而減輕大鼠腎臟損傷，發(fā)揮保護腎臟的作用^[17-18]。Moran等^[19]證明EPO可以減輕肝臟的氧化應(yīng)激損傷，通過減少NO的生成及增加還原性谷胱甘肽（GSH）的生成。余堂宏等^[20]研究發(fā)現(xiàn)，EPO能通過抗氧自由基損傷，提高內(nèi)源性抗氧化能力達到對急性腎小管壞死大鼠腎臟起到保護作用。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在CLP致急性肝損傷模型后給予rHuEPO，與膿毒癥時相比，肝臟組織病理學(xué)結(jié)果顯示，光鏡下肝細胞壞死面積明顯減少，肝細胞水腫減輕，門管區(qū)炎性細胞浸潤較少，小葉間靜脈充血減輕;電鏡下內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和線粒體僅見個別擴張，個別核膜不完整、染色質(zhì)邊集，損傷程度較膿毒癥組明顯減輕;各個時間點大鼠血清iNOS、TNF-α、ALT、AST的水平顯著下降。上述指標(biāo)的變化，與國內(nèi)外報道結(jié)果類似，進一步證實rHuEPO對膿毒癥大鼠的肝臟具有保護作用。rHuEPO作為一種多功能細胞因子，減輕CLP所致急性肝損傷的機制可能是通過調(diào)節(jié)NF-κB的表達，抑制 iNOS的過度表達，并降低TNF-α等炎癥因子水平，從而減輕肝臟損傷。rHuEPO對于提高炎癥感染導(dǎo)致急性肝損傷的治療效果具有重要意義，同時將為攻克膿毒癥防治難題開啟新的途徑，為下一步分子機制的研究打下基礎(chǔ)。

參考文獻

[1]梁小仲，姚華國，邵義明，等.姜黃素對膿毒癥大鼠肺組織高遷移率族蛋白B1水平的影響[J]. 中華臨床醫(yī)師雜志， 2011，5（ 3） ：854.

[2]陳德昌，李紅江，喬林，等.大黃對創(chuàng)傷后膿毒癥大鼠肝細胞線粒體功能的影響[J]. 中國中西醫(yī)結(jié)合急救雜志，2002，9（1）：9-11.

[3]Kakavas S，Demestiha T，Vasileiou P，et al. Erythropoetin as a novel agent with pleiotropic effects against acute lung injury[J]. ?Eur J Clin Pharmacol，2011，67（1）：1-9.

[4]Cerda J，Sheinfeld G，Ronco C.Fluid overload in critically ill patients with acute kidney injury[J]. ?Blood Purif，2010，29（4）：331-338.

[5]Yang J，Dai Y， Xia YF，et al . Alpinia katsumadai Hayata prevents mouse sepsis induced by cecal ligation and puncture through promoting bacterial clearance and downregulating systemic inflammation[J]. ?PhytotherRes， 2009，23（2）：267.

[6]Janssen，Van Doom K，Spapen H，et al.Sepsis-related acute kidney injury： A protective effect of drotrecogin alpha（activated）treatment[J]. ?Acta Anaesthesiol Scand，2008，52（9）：1259-1264.

[7]Zhang Q，Piao XL，Piao XS，et al.Preventive effect of Coptis chinensis and berberine on intestinal injury in rats challenged with lipopolysaccharides[J]. ?Food Chem Toxicol，2011 ，49（1）：61-69.

[8]Cauwels A，Brouckaert P.Nitrite regulation of shock[J]. ?Cardiovasc Res，2011，89（3）：553-559.

[9]Tu W，Satoi S，Zhang Z，et al .Hepatocellular dysfunction induced by nitric oxide production in hepatocytes isolated from ratswith sepsis[J]. ?Shock，2003，19（4）：373-377.

[10]朱曉丹，白春學(xué).ALI/ARDS發(fā)病機制及治療研究進展[J]. 中華急診醫(yī)學(xué)雜志，2010，19（10）：1111-1113.

[11] Brines M，Cerami A.Erythropoietin-mediated tissue protection：reducing collateral damage from the primary injury response[J]. ?Int ern Med ，2008，264（5）：415 -432.

[12] Brines M，Patel NS，Villa P，el a1.Nonerythropoietic tissueprotective peptides derived from the tertiary structure of erythr0poietin[J]. ?Proc Natl Acad Sci USA，2008，105（31）：10925- 10930.

[13] Kumral A，Baskin H，Yesilirmak DC，et al.Erythropoietin attenuates lipopolysaeeharide-induced white matter injury in the neonatal rat ?brain[J]. ?Neonatology，2007，92（4）：269-278.

[14] Hojman P，Taudof S，Lundby C， et al.Erythropoietin augments the cytokine response to acute endotoxin-induced inflammation in humans [J]. ?Cytokine，2009，45（3）：154-157.

[15] Pappo O，Ben-Ari Z，Shevtsov E，et al.The role of excessive versus acute administration of erythropoietin in attenuating hepatic ischemia-reperfusion injury[J]. Can J Physiol Pharmacol，2010，88（12）：1130-1137.

[16] Tsao CM， Chen SJ，Shih MC，et al. Effects of terbutaline on circulatory failure and organ dysfunction induced by peritonitis in rats[J]. ?Intensive Care Med，2010 ，36（9）：1571-1578.

[17] Mohamed HE，EI-Swefy SE，Mohamed RH，et al.Effect of erythropoietin therapy on the progression of cisplatin induced renal injury in rats[J]. ?Exp Toxicol Pathol，2013 ，65（1-2）：197-203.

[18] Yang FL，Subeq YM，Chiu YH，et al.Recombinant human erythropoietin reduces rhabdomyolysis-induced acute renal failure in rats[J]. ?Injury，2012，43（3）：367-373.

[19] Moran M，Oruc MT，Ozmen，et al.Effect of erythropoietin on oxidative stress and liver injury in experimental obstructive jaundice[J]. ?Eur Surg Res， 2009，43（2）：228-234.

[20]余堂宏，胡宏，梁偉，等.促紅細胞生成素防治大鼠急性腎小管壞死的實驗研究[J]. 中華急診醫(yī)學(xué)雜志，2010，19（11）：1185-1187.

（收稿日期：2014-06-12）

（本文編輯：何小軍）

p1327-1332