摘 要:大菱鲆病毒性紅體病的頻繁暴發(fā)給我國大菱鲆養(yǎng)殖業(yè)造成了嚴(yán)重的危害,本文將綜述我國大菱鲆病毒性紅體病及其病原虹彩病毒的研究進(jìn)展,旨在為病毒性紅體病的防治提供一定的理論基礎(chǔ)。
關(guān)鍵詞:大菱鲆 紅體病 虹彩病毒
中圖分類號:S941 文獻(xiàn)標(biāo)識碼:A 文章編號:1672-3791(2013)04(c)-0230-01
1 大菱鲆病毒性紅體病
因肉質(zhì)美味而被大眾熟知的大菱鲆(Sophthalmus maximus)是我國東部沿海地區(qū)的一種重要的海水養(yǎng)殖經(jīng)濟魚類,隸屬于硬骨魚類、鰈形目,雙眼位于身體的一側(cè),俗稱比目魚和多寶魚[1]。大菱鲆養(yǎng)殖規(guī)模擴大的同時病害也隨之增多,尤其是近年來大菱鲆紅體病的頻繁暴發(fā),已嚴(yán)重影響了我國大菱鲆的健康養(yǎng)殖。通常把大菱鲆鰭基部和腹面脊椎骨沿線充血發(fā)紅的病癥稱為大菱鲆紅體病,根據(jù)已有報道大菱鲆紅體病的病原是多樣性的,病毒、細(xì)菌和寄生蟲都會使大菱鲆出現(xiàn)相似的紅體病癥,但其中以病毒性病原導(dǎo)致的損失尤為明顯。
病魚在感染初期死亡較少,但出現(xiàn)明顯癥狀后很快死亡,屬亞急性死亡?;疾『痛顾赖拇罅怫抑饕牟“Y是體表無明顯損傷,但是在魚體腹面無眼側(cè)沿脊椎骨附近皮下及各鰭部淤血、發(fā)紅;嚴(yán)重時整個魚體腹面呈粉紅色,同時鰓絲呈暗灰色。解剖后可見病魚腫大的腎臟呈灰白色,血液稀薄、凝固性很差[2]。
2 大菱鲆病毒性紅體病的流行概況
大菱鲆病毒性紅體病從2001年開始導(dǎo)致大菱鲆魚苗和養(yǎng)成魚大量死亡,并且在我國多個大菱鲆養(yǎng)殖場流行。特別是在2003年,山東省煙臺蓬萊的一家大菱鲆養(yǎng)殖場,養(yǎng)成期的大菱鲆在發(fā)病后1個月內(nèi)的累積死亡率高達(dá)20%以上,造成了嚴(yán)重的經(jīng)濟損失。秋、冬季節(jié)(8~12月份)為該病毒侵染的高發(fā)季節(jié),在大菱鲆養(yǎng)殖的各個時期都有感染,包括苗期、養(yǎng)成期和親魚培育期,感染力較強[2]。
3 大菱鲆病毒性紅體病病原研究
2004年史成銀等首次報道了我國養(yǎng)殖大菱鲆紅體病虹彩病毒,經(jīng)電鏡觀察,在紅體病魚的鰓、腎臟、脾臟和腸等多個組織內(nèi)發(fā)現(xiàn)了近球形的病毒,二十面體對稱,呈現(xiàn)典型的內(nèi)酯膜樣結(jié)構(gòu)[3]。
3.1 分子水平研究
史成銀等從紅體大菱鲆中分離得到大菱鲆紅體病虹彩病毒(Turbot reddish body iridovirus,TRBIV),測定了其全基因組序列,克隆了ATPase和MCP等基因,并對獲取的全序列進(jìn)行了基因組分析,從分子水平上進(jìn)一步驗證了大菱鲆紅體病病原為虹彩病毒,同時也為虹彩病毒的分子研究奠定了基礎(chǔ)。在分子檢測領(lǐng)域陸續(xù)報道了根據(jù)該病毒的保守基因而建立的多種分子生物學(xué)檢測技術(shù),包括常規(guī)PCR檢測技術(shù)、Real time PCR技術(shù)、套式PCR以及核酸探針技術(shù)等[4~8],為大菱鲆紅體病的及時診斷提供了多種快速高效的檢測技術(shù),以對癥下藥。
李向勇等對病毒粒子的蛋白組進(jìn)行了初步的研究,采用蔗糖密度梯度離心的方法,從患病大菱鲆不同組織中提純到了病毒粒子,對提純的病毒粒子進(jìn)行SDS-PAGE分析,并分離出了50.9 KDa的蛋白帶[9]。王亞楠等使主要衣殼蛋白MCP基因在畢赤酵母中重組分泌表達(dá),運用酵母雙雜交系統(tǒng),以MCP構(gòu)建誘餌蛋白,篩選與TRBIV MCP相互作用的大菱鲆脾細(xì)胞蛋白,從而揭示虹彩病毒感染宿主細(xì)胞的分子機制[10]。
3.2 細(xì)胞培養(yǎng)水平研究
病毒的分離和培養(yǎng)常用方法是敏感細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)。史成銀等利用牙鲆胚胎細(xì)胞(flounder embryonic cell line,F(xiàn)EC)接種TRBIV,實驗結(jié)果表明,過濾除菌的含大量病毒的病魚脾組織勻漿液可以使FEC單層培養(yǎng)細(xì)胞產(chǎn)生明顯的細(xì)胞病變(cytopathic effect,CPE),而且在病變細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)中可觀察到大量的病毒粒子。樊廷俊等使用牙鲆鰓細(xì)胞系(FG)細(xì)胞接種TRBIV,細(xì)胞出現(xiàn)了典型的細(xì)胞病變,同時還優(yōu)化了病毒的培養(yǎng)條件[2,8,11]。
3.3 疫苗水平研究
在病毒疫苗研究方面,樊廷俊等利用甲醛滅活法制備了TRBIV滅活疫苗,并用病毒感染實驗證明了TRBIV疫苗對健康大菱鲆具有安全性和極高的免疫保護(hù)率,可用于大菱鲆的預(yù)防免疫[12]。
4 前景展望
近年來,對大菱鲆紅體病虹彩病毒的研究從診斷檢測、疫苗研制、病毒培養(yǎng)等方面都取得了一定的進(jìn)展,但還有很多方面值得深入研究。比如揭示該病毒具體的感染機制和免疫逃逸機制,研究病毒和宿主細(xì)胞的相互作用以及調(diào)控方式,找出宿主抗病毒基因等,以便開發(fā)出有效可靠的特效疫苗,對大菱鲆紅體病的防治均具有重要的意義。
參考文獻(xiàn)
[1]雷霽霖.海水養(yǎng)殖新品種介紹—— 大菱鲆[J].中國水產(chǎn),2000,293(4):38-39.
[2]史成銀.我國養(yǎng)殖大菱鲆病毒性紅體病的研究[D].青島:中國海洋大學(xué),2004.
[3]Shi C Y,Wang Y G,et al.The first report of an iridovirus-like agent infection in farmed turbot,Scophthalmus maximus,in China[J].Aquaculture, 2004,236:11-28.
[4]史成銀,王印庚,王青印,等.中國大菱鲆虹彩病毒主要衣殼蛋白基因的PCR擴增及序列分析[J].中國水產(chǎn)科學(xué),2005,12(5):588-593.
[5]史成銀,王印庚,等.大菱鲆紅體病虹彩病毒ATPase基因的克隆與序列分析[J]. 高技術(shù)通訊,2004,15(5):91-95.
[6]吳成龍,史成銀,黃健,等.Real-time PCR技術(shù)用于大菱鲆紅體病虹彩病毒的組織敏感性檢測及病毒流行情況調(diào)查[J].農(nóng)業(yè)生物技術(shù)學(xué)報,2008,16(5):752-758.
[7]賈坤同,梁玉波,史成銀,等.海水養(yǎng)殖魚類中虹彩病毒無癥狀感染的套PCR分析[J].中國水產(chǎn)科學(xué),2009,16(5): 758-764.
[8]林曉婷.大菱鲆紅體病虹彩病毒的核酸探針檢測及病毒感染牙鲆鰓細(xì)胞系的研究[D].青島:中國海洋大學(xué),2006.
[9]李向勇,李娟,黃健.大菱鲆紅體病毒的提純和初步SDS-PAGE分析[J].齊魯漁業(yè),2008,25(5):39-40.
[10]王亞楠.大菱鲆紅體病虹彩病毒主要衣殼蛋白與宿主蛋白的相互作用研究[D]. 青島:中國海洋大學(xué),2008.
[11]樊廷俊,王麗燕.大菱鲆紅體病虹彩病毒體外增殖條件的研究[J].中國海洋大學(xué)學(xué)報:自然科學(xué)版,2006,36(5):767-774.
[12]任秉新.大菱鲆(Scophthalmus maximus)肝細(xì)胞體外培養(yǎng)、紅體病虹彩病毒體外繁殖條件及病毒疫苗研制的研究[D].青島:中國海洋大學(xué),2009.