李紅英，龍 瀾，程新華，李亞杰，黃建民，帥超群

(1. 湖北省農(nóng)業(yè)科學(xué)創(chuàng)新中心鄂西綜合試驗站，湖北 恩施 445000； 2.恩施清江生物工程有限公司，湖北 恩施 445000)

白術(shù)藥材中白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ和白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ含量的測定

李紅英1，2，龍 瀾1,2，程新華1，李亞杰1，黃建民1，帥超群2

(1. 湖北省農(nóng)業(yè)科學(xué)創(chuàng)新中心鄂西綜合試驗站，湖北 恩施 445000； 2.恩施清江生物工程有限公司，湖北 恩施 445000)

建立HPLC法同時測定白術(shù)藥材中白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ和白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ的含量.采用依利特 ODS2 C18(200 mm×4.6 mm，5 um)色譜柱，以甲醇∶水=70∶30(V/V)為流動相，檢測波長222 nm，流速：1.0 ml/min，柱溫25℃.結(jié)果得出：白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ的平均回收率為98.98%，RSD=0.64%，白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ的平均回收率為100.18%，RSD=1.41%.該方法簡單、快速、線性關(guān)系良好、精密度高、重復(fù)性好，為白術(shù)藥材品質(zhì)評價、GDP的建立及深加工提供了科學(xué)依據(jù).

白術(shù)藥材;HPLC;白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ;白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ

白術(shù)為菊科植物白術(shù)(AtractylodesmacrocephalaKoidz.)的干燥根莖，主要產(chǎn)于浙江、安徽、湖北、湖南等省.其味甘、苦，性溫，具有健脾益氣、燥濕利水、止汗、安胎的功效[1]，現(xiàn)代藥理研究表明白術(shù)有調(diào)節(jié)胃腸運動、利尿、安胎、降血糖、增強免疫等作用[2]，白術(shù)根莖主要含有蒼術(shù)酮、白術(shù)內(nèi)酯、揮發(fā)油、多糖等成分[3].從白術(shù)中分離得到的內(nèi)酯類白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ和白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ為白術(shù)中的主要有效成分，該類物質(zhì)具有抗炎、抗腫瘤作用[4-6].此外該類成分還具有調(diào)節(jié)胃腸道功能和促進因營養(yǎng)物質(zhì)吸引的功能[7]，尤以白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ作用顯著[8-11]，是白術(shù)質(zhì)量控制的主要指標(biāo)之一.為了提高白術(shù)藥材的質(zhì)量，筆者采用反相高效液相色譜法同時測定白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ和白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ的含量，該方法簡單、方便、快速，可作為白術(shù)藥材的質(zhì)量控制和品質(zhì)評價的科學(xué)依據(jù).還為白術(shù)藥材GDP的建立及深加工提供了有力的依據(jù).

1 試劑、試藥和儀器

1.1 試劑與試藥

甲醇由(天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司，色普純)提供，去離子水，白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ、白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ對照品(上海源葉生物科技有限公司)，

1.2 儀器

美國戴安Ultimate3000高效液相色譜儀(Ultimate3000泵，Ultimate3000紫外檢測器，四元低壓混合系統(tǒng)，Ultimate3000自動進樣器，ChromeLeon工作站，Ultimate3000色譜柱恒溫箱)；KQ-250D型超聲波清洗器；Al204電子天平；溶劑過濾器等常用儀器.

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：依利特ODS2 C18柱 (200 mm×4.6 mm,5 μm)；流動相：甲醇∶水=70∶30(V/V) 檢測波長：222 nm；流速：1.0 mL/min；柱溫：25℃.

2.2 對照品溶液的制備

精確稱取對照品白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ、白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ分別為5.12 mg、7.46 mg置于50 mL容量瓶中，分別加入適量甲醇(色譜純)，超聲溶解，冷卻至室溫，用甲醇稀釋至刻度.振蕩搖勻后，用0.45 μm微孔濾膜過濾，即得對照品溶液.

2.3 供試品的制備

精確稱取白術(shù)藥材(粉碎過4號篩)1 g，置于50 mL容量瓶中，分別精密加入甲醇40 mL、超聲波提取45 min，冷卻至室溫，加甲醇定容至刻度，振蕩搖勻后，用0.45 μm微孔濾膜過濾，作為供試品溶液.

2.4 線性關(guān)系的考察

取對照品溶液,按照2.1的色譜條件,分別進樣2.0、5.0、10.0、20.0、40.0 μL，以峰面積(A)對濃度(C)回歸分析，得白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程：A=15.83x+27.58,相關(guān)系數(shù)r=0.999 93；白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程：A=36.32x+8.97,相關(guān)系數(shù)r=0.999 90；結(jié)果表明,白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ和白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ在此條件下呈良好的線性關(guān)系.

表1 添加回收率實驗

2.5 精密度試驗

按照2.1的色譜條件連續(xù)進同一供試品溶液5次，測定白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ峰面積的RSD為1.69%，白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ峰面積的RSD為1.81%.

2.6 穩(wěn)定性試驗

取同一供試品溶液，按每2 h測定一次，供試品中白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ峰面積的RSD為1.48%(n=7) ，白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ峰面積的RSD為1.20%(n=7)，表明供試品溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定.

2.7重復(fù)性試驗

取白術(shù)藥材5份，按照2.3的方法平行制備5份供試品，依法測定，計算白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ保留時間和峰面積的RSD分別為0.72%，0.94%；白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ保留時間和峰面積的RSD分別為1.23%，1.62%，表明該方法的重復(fù)性較好.

2.8添加回收率試驗

取已知含量的白術(shù)藥材樣品約1.0 g，精密稱取3份，分別加入等量的對照品，按照2.3的方法進行處理，計算回收率，結(jié)果見表1.

2.9樣品的測定

按2.3項下方法操作制得的樣品溶液,進樣20 μL,在222 nm處檢測,白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ、白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ對照品圖1和白術(shù)樣品圖2的HPLC色譜圖.結(jié)果5種不同產(chǎn)地白術(shù)中白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ、白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ的含量如下表2.

圖1 白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ、白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ對照品 圖2 白術(shù)樣品

表2 各地白術(shù)中白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ、白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ的含量Tab.2 Content around in Rhizoma Atractylodis Macrocephalae atractylenolide Ⅲ,atractylenolide Ⅰ

產(chǎn)地白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ/%白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ/%恩施咸豐0．0620．084安徽亳州0．0690．055浙江磐安0．0620．52湖南洪江岔頭鄉(xiāng)0．0630．80四川川北0．0540．21

3 討論

1)在對白術(shù)提取溶劑的考察過程中，比較甲醇、丙酮、乙酸乙酯的提取效果，實驗發(fā)現(xiàn)甲醇的提取效果是最好的；并對超聲波提取時間進行考察，結(jié)果采用超聲提取45 min為最佳方法.

2)通過對白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ、白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ的三維掃描，在222 nm處，白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ、白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ的吸收較高，雜質(zhì)少，分離度良好.

3)本實驗所建立的測定白術(shù)藥材中白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ、白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ含量的方法，準(zhǔn)確度高，操作簡便、準(zhǔn)確、快速、重復(fù)性好、靈敏度高，能準(zhǔn)確檢測白術(shù)藥材中白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ、白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ的含量.

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[2] 梅全喜.現(xiàn)代中藥藥理與臨床應(yīng)用手冊[M].北京：中國中醫(yī)藥出版社，2008:811-812.

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[11] 李偉，文紅梅，張愛華，等.白術(shù)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究I-HPLC法測定2種白術(shù)內(nèi)酯的含量[J].藥物分析雜志，1986,8(5)：124-135.

DeterminationofAtractylenolideⅠandAtractylenolideⅢinAtractylodesMedicinalMaterial

LI Hong-ying1,2,LONG Lan1,2,CHENG Xin-hua1,LI Ya-jie1,HUANG Jian-min1，SHUAI Chao-qun2

(1.West Comprehensive Experiment Station of Hubei Provincial Agriculture s&t Innovation Center Enshi 445000,China; 2.Enshi Qingjiang Bio-engineering co.,Ltd.,Enshi 445000,China)

HPLC method was used for simultaneous determination ofAtractylodesmacrocephalaKoidz medicinal material of AtractylenolideⅠand Atractylenolide Ⅲcontent of sesquiterpene lactones.Using the Hypersil C18: ODS2 (200 mm×4.6 mm,5 um) chromatographic column, Methanol∶water ( V/V=70∶30) as the mobile phase,detection wavelength at 222nm, flow rate: 1.0 ml/min, column temperature was 25 ℃. The results were as follows: For AtractylenolideⅠ,the average recovery was 98.98%,RSD=0.64%,for Atractylenolide Ⅲ,the average recovery was 100.18%,RSD=1.41%.The method is simple and rapid and has good linearity, high precision and good repeatability, which provides a scientific basic for quality evaluation of Atractylodes,establishment of GDP and deep processing.

AtractylodesmacrocephalaKoidz;HPLC;AtractylenolideⅠ; AtractylenolideⅢ

2012-12-05.

湖北省科技計劃研究與開發(fā)項目(2009BHB001).

李紅英(1982- )，女，農(nóng)藝師，主要從事天然產(chǎn)物研究和藥物分析.

R284.2

A

1008-8423(2013)02-0142-03