孫文閃，田富饒，楊 委，葉旭炎

(義烏出入境檢驗(yàn)檢疫局 綜合技術(shù)服務(wù)中心，浙江 義烏 322000)

鄰苯二甲酸酯(PAEs)是國際上重點(diǎn)監(jiān)控的內(nèi)分泌干擾激素. 這類物質(zhì)損害人類的生殖系統(tǒng)，影響生物體內(nèi)激素的正常分泌，導(dǎo)致細(xì)胞突變，致畸和致癌[1-2]. 歐盟、美國等已將PAEs列為優(yōu)先控制的污染物，并不斷增加監(jiān)控種類[3]. 我國也將一些鄰苯二甲酸酯列入“中國環(huán)境優(yōu)先污染物黑名單”[4]. 鄰苯二甲酸酯在指甲油、頭發(fā)噴霧劑、香波、洗滌用品、香水等化妝品中廣泛使用，而人類與化妝品接觸的親密程度僅次于食品，過多使用含有鄰苯二甲酸酯的化妝品，會增加女性患乳腺癌的概率，而且容易引起孕婦流產(chǎn)及胎兒畸形. 因此，化妝品中鄰苯二甲酸酯含量的測定對于保護(hù)人體健康具有重要作用. 目前，鄰苯二甲酸酯的檢測方法有氣相色譜法[5]、液相色譜法[6]、氣質(zhì)聯(lián)用法[7]、液質(zhì)聯(lián)用法[8]. 作者通過梯度洗脫將6種鄰苯二甲酸酯有效的分離，結(jié)合DAD光譜進(jìn)行定性分析，提高了定性分析的準(zhǔn)確性，建立了一種快速、靈敏度高、成本較低、準(zhǔn)確可靠的檢測方法.

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器與試劑

高效液相色譜儀：Agilent1200型，附帶二極管陣列檢測器(美國安捷倫公司)；氣相色譜-質(zhì)譜儀：Agilent 6890N-5973GC/MSD(美國安捷倫公司)；超聲波清洗器：D-78224型(德國Elma公司)；高速離心機(jī)：3-30K型(德國Sigma公司)；分析天平：AL204型，(梅特勒-托利多儀器上海有限公司)；超純水儀：Milli-Q型(美國密理博公司)；樣品濾膜：0.45 μm；甲醇：色譜純；乙腈：色譜純；鄰苯二甲酸二甲酯(DMP),鄰苯二甲酸二乙酯(DEP),鄰苯二甲酸丁基芐基酯(BBP),鄰苯二甲酸二丁酯(DBP) ,鄰苯二甲酸二(2-乙基己基)酯(DEHP) ,鄰苯二甲酸二辛酯(DOP)標(biāo)準(zhǔn)品：純度為99.8%(上海安普公司)；實(shí)驗(yàn)用水為超純水.

1.2 標(biāo)準(zhǔn)儲備液的配制

準(zhǔn)確稱取鄰苯二甲酸二甲酯(DMP),鄰苯二甲酸二乙酯(DEP),鄰苯二甲酸二丁酯(DBP)，鄰苯二甲酸丁基芐基酯(BBP)，鄰苯二甲酸二(2-乙基己基)酯(DEHP) ,鄰苯二甲酸二辛酯(DOP)各100 mg用甲醇溶解后定容至100 mL棕色容量瓶中，配成標(biāo)準(zhǔn)儲備液，濃度為1.0 g/L，在4 ℃保存，臨用時(shí)將標(biāo)準(zhǔn)儲備液用甲醇稀釋成所需濃度的混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液.

1.3 樣品處理

由于鄰苯二甲酸類物質(zhì)無處不在，在實(shí)驗(yàn)過程中盡量避免使用塑料材料制成的器皿，所有的玻璃器皿經(jīng)丙酮清洗后再用色譜甲醇潤洗自然風(fēng)干后使用. 稱取化妝品0.500 g，精確到1 mg，用甲醇定容至25 mL，用旋渦振蕩器振蕩混勻，于超聲波清洗儀中超聲20 min，對于固體、半固體、黏稠樣品，先以10 000 r/min高速離心15 min，上清液經(jīng)注射器過濾(0.45 μm有機(jī)型濾膜)，上機(jī)測定，水狀的樣品直接過濾，然后上機(jī)測定.

1.4 色譜條件

液相色譜條件：色譜柱為Agilent Eclipse XDB-C18柱(150 mm×4.6 mm，5 μm)；進(jìn)樣量20 μL，柱溫40 ℃；流動相為乙腈-水混合液，流速1.000 mL/min,梯度洗脫程序見表1，后運(yùn)行時(shí)間5 min；檢測波長為224 nm. 光譜存儲范圍190～400 nm.

表1 梯度洗脫程序 Table 1 The process of gradient elution

氣相色譜-質(zhì)譜條件：色譜柱為HP-5MS柱[30 m(長度)×0.25 mm(內(nèi)徑)，0.25 μm(填料顆粒的尺寸)，5% phenyl methyl-siloxane] ；柱溫程序：初始溫度為50 ℃,保持2 min后以40 ℃/min的速率升至210 ℃，然后以30 ℃/min的速率升至280 ℃，保持10 min；進(jìn)樣口溫度280 ℃；色譜-質(zhì)譜接口溫度280 ℃；載氣：氦氣1 mL/min;電離方式：EI，70 eV;掃描方式：全掃描；進(jìn)樣方式：分流，分流比5∶1,溶劑延遲4.5 min；進(jìn)樣量1 μL.

2 結(jié)果與討論

2.1 流動相的選擇

本實(shí)驗(yàn)采用甲醇-水和乙腈-水進(jìn)行等度洗脫、梯度洗脫對6種鄰苯二甲酸酯進(jìn)行分離研究，結(jié)果表明：等度洗脫條件下，6種鄰苯二甲酸酯不能達(dá)到基線分離，梯度洗脫條件下，甲醇-水，乙腈-水都可以將它們進(jìn)行基線分離，但是與乙腈-水相比，甲醇-水的分離效果較差，并且分離時(shí)間長，因此選擇乙腈-水作為本實(shí)驗(yàn)的流動相進(jìn)行梯度洗脫.

2.2 檢測器的選擇

化妝品的成分比較復(fù)雜，很多雜質(zhì)在紫外區(qū)都有吸收，會產(chǎn)生很多干擾的色譜峰，如果只從色譜峰的保留時(shí)間來定性，可能產(chǎn)生錯(cuò)誤的判斷，而鄰苯二甲酸酯類物質(zhì)的紫外吸收光譜的特征比較明顯，選擇二極管陣列檢測器，結(jié)合保留時(shí)間和光譜來進(jìn)行定性判斷，可提高定性分析的準(zhǔn)確度. 為了進(jìn)一步確認(rèn)光譜定性的可靠性，用GC-MS進(jìn)行確認(rèn). 結(jié)果表明，當(dāng)樣品在190～400 nm范圍內(nèi)的光譜與標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)吻合時(shí)，樣品的特征離子及其豐度比與標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)是符合的；相反，當(dāng)樣品的光譜與標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的光譜不匹配時(shí)，在GC-MS上相應(yīng)的保留時(shí)間沒有該物質(zhì)的色譜峰，或者與標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的特征離子不符合. 因此本實(shí)驗(yàn)選擇二極管陣列檢測器進(jìn)行測定.

2.3 檢測波長的選擇

6種鄰苯二甲酸酯在224 nm和280 nm處都有紫外吸收的峰值，但224 nm條件下的檢出限要明顯低于280 nm檢出限，因此本實(shí)驗(yàn)選擇224 nm作為檢測波長.

2.4 色譜柱的選擇

色譜柱是液相色譜進(jìn)行分離的關(guān)鍵部分，它直接關(guān)系到樣品分離效果和測定結(jié)果的準(zhǔn)確性. 為了使6種鄰苯二甲酸酯得到很好的分離，本實(shí)驗(yàn)用Agilent的Eclipse XDB-C18，Eclipse XDB-C8，300SB-C18，ZORBAX-C8等色譜柱進(jìn)行試驗(yàn)，結(jié)果只有Eclipse XDB-C18在乙腈-水梯度洗脫下，可以將6種目標(biāo)物質(zhì)完全分離，并且能夠得到較好的色譜峰，在1.4的洗脫條件下，6種目標(biāo)物與其他的干擾物質(zhì)也得到了有效的分離，圖1、圖2、圖3分別為標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)、樣品和樣品加標(biāo)的色譜圖.

圖1 DMP,DEP,BBP,DBP,DEHP和DOP標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的色譜圖Fig.1 The chromatograms of DMP, DEP, BBP, DBP, DEHP and DOP

圖2 樣品的色譜圖Fig.2 The chromatograms of a sample

圖3 加入DMP,DEP,BBP,DBP,DEHP 和 DOP標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的色譜圖Fig.3 The chromatograms of a sample with addition of DMP, DEP, BBP, DBP,DEHP and DOP

2.5 線性方程和精密度

利用DMP, DEP, BBP, DBP, DEHP, DOP的標(biāo)準(zhǔn)儲備液配制成的混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，濃度依次為20,10，5，2，1 mg/L，按照1.4的洗脫條件進(jìn)行測定，分別以DMP, DEP, BBP, DBP, DEHP, DOP的濃度(x)對相應(yīng)的峰面積(y)進(jìn)行線性回歸，線性方程依次為：y=45.8x+0.489,y=40.6x+0.758,y=34.7x+0.182,y=34.1x+6.70，y=24.8x+2.72,y=24.3x+0.305. 相關(guān)系數(shù)依次為1.000 0，1.000 0，0.999 99，0.999 88，0.999 96，0.999 91. 對DMP, DEP, BBP, DBP, DEHP, DOP濃度為5 mg/L的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液連續(xù)進(jìn)樣6次，測定結(jié)果見表2.

經(jīng)計(jì)算DMP, DEP, BBP, DBP, DEHP, DOP的RSD分別為0.97%，0.64%, 0.11%,0.82%, 1.13%, 0.81%.

表2精密度試驗(yàn)結(jié)果

Table 2 Precision experimen mg/L

2.6 回收率和檢出限

對6個(gè)化妝品樣品在2.0 mg/L，5.0 mg/L水平進(jìn)行加標(biāo)回收試驗(yàn)，按1.3的洗脫方法進(jìn)行樣品處理，在1.4的洗脫條件下測定，經(jīng)計(jì)算DMP, DEP, BBP, DBP, DEHP, DOP的回收率在90%～98%. 在1.3,1.4的洗脫條件下，以3倍信噪比計(jì)算DMP, DEP, BBP, DBP, DEHP, DOP的檢出限分別為10.0,4.0,10.0,10.0, 5.0,7.5 mg/kg.

2.7 實(shí)際樣品測定

在市場隨機(jī)購買洗手液、身體香露、香水、甲油、指甲油、護(hù)發(fā)素、洗發(fā)水、潤膚乳、發(fā)用香水等化妝品，用該方法進(jìn)行測定，結(jié)果見表3.

表3化妝品中6種鄰苯二甲酸酯測定結(jié)果

Table 3 The analytical result of six phthalates in cosmetics μg/g

3 結(jié)論

鄰苯二甲酸酯作為一類內(nèi)分泌干擾物，由于其較高的毒性，致畸和致癌作用，在國際上引起了廣泛的關(guān)注，而化妝品與人類的接觸非常密切，建立一種高效、快速、準(zhǔn)確、廉價(jià)的測定方法對保護(hù)消費(fèi)者免受鄰苯二甲酸酯的毒害有重要的作用，本文的研究為化妝品中鄰苯二甲酸酯的測定提供了重要的參考依據(jù).

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