羅斌華，丁潔瓊

(湖北科技學(xué)院藥學(xué)院，湖北咸寧437100)

阿霉素(Adriamycin，ADM)屬于蒽環(huán)類抗腫瘤抗生素，活性較強(qiáng)，對(duì)腫瘤細(xì)胞在各種生長(zhǎng)周期均有殺傷作用;抗腫瘤譜廣，對(duì)肺癌、胃癌、乳腺癌、膀胱癌和肉瘤病等具有較好的療效。聚乳酸(PLA)是一種真正的生物塑料，其無(wú)毒、無(wú)刺激性，具有良好的生物相容性，可生物分解吸收，可用作醫(yī)用手術(shù)縫合線、注射用膠囊、微球及埋植劑等。國(guó)內(nèi)已報(bào)道阿霉素的含量測(cè)定方法有很多種，如熒光分光光度法檢測(cè)大鼠膀胱組織中表阿霉素濃度［1］，阿霉素磁性明膠微球的制備及特性檢測(cè)［2］，本實(shí)驗(yàn)采用溶劑將阿霉素聚乳酸微球溶解后，再用紫外-可見(jiàn)分光光度法測(cè)定阿霉素的含量。

1 儀器與材料

UV-4802雙光束紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)(上海尤尼柯儀器有限責(zé)任公司);HY-2調(diào)速多用震蕩儀(江蘇中大儀器廠);TG328A 電子天平(湘儀電子儀器廠);阿霉素原料藥(浙江海正藥業(yè)有限公司，0405E1);聚乳酸(M=2萬(wàn)，濟(jì)南岱罡生物技術(shù)有限公司);乙腈(國(guó)藥集團(tuán));阿霉素聚乳酸微球(自制)。

2 試驗(yàn)方法與結(jié)果

2.1 儲(chǔ)備液的配制

阿霉素儲(chǔ)備液的制備:精密稱量阿霉素對(duì)照品10 mg，置100 ml 容量瓶中，用10%的水的乙睛稀釋、定容，得0.1 mg·ml－1的阿霉素儲(chǔ)備液。

2.2 檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇

分別取阿霉素儲(chǔ)備溶液和空白微球溶液適量，取濾膜過(guò)濾后續(xù)濾液為測(cè)定液，以稀釋液為參比溶液，選用雙波長(zhǎng)紫外分光光度計(jì)，在200～800nm 波長(zhǎng)范圍內(nèi)，進(jìn)行波長(zhǎng)掃描，結(jié)果發(fā)現(xiàn)在488nm 波長(zhǎng)處，阿霉素儲(chǔ)備液有較大吸收，而空白微球基本無(wú)吸收，說(shuō)明此波長(zhǎng)處無(wú)輔料干擾;而233nm 處有輔料干擾，因此可將488nm 作為阿霉素聚乳酸微球的檢測(cè)波長(zhǎng)。掃描結(jié)果見(jiàn)圖1、圖2。

圖1 阿霉素溶液的光譜圖

圖2 空白微球溶液的光譜圖

2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立

以10%的水的乙腈溶液為稀釋液，將阿霉素標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液稀釋成7.5、9.0、10.5、12.0、13.5、15.0μg·ml－1的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液，以稀釋液為空白溶液，在488 nm 波長(zhǎng)處測(cè)定阿霉素標(biāo)準(zhǔn)品溶液吸光度值，用最小二乘法以濃度C(μg·ml－1)對(duì)吸光度A 進(jìn)行線性回歸，回歸方程為A=0.04007C+0.00867，r=0.9997，線性范圍7.5～15.0μg·ml－1，見(jiàn)表1和圖3。

表1 不同濃度的阿霉素的吸光度值

圖3 阿霉素溶液的標(biāo)準(zhǔn)工作曲線

2.4 精密度試驗(yàn)

取10 ml 容量瓶三支，分別加阿霉素儲(chǔ)備液適量，再用稀釋液稀釋成濃度分別為7.5、10.5、13.5μg·ml－1的溶液。以稀釋液為空白溶液，于488 nm 處測(cè)定吸光度，重復(fù)測(cè)量3次，計(jì)算精密度，結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 精密度試驗(yàn)結(jié)果

結(jié)果顯示，Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ的精密度RSD 分別為0.184%、0.134%、0.103%，符合要求。

2.5 重復(fù)性試驗(yàn)

取6份同一批次的阿霉素聚乳酸微球，按“2.1”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，在488nm 處平行測(cè)定樣品溶液6份，微球的載藥量為5.84%，RSD=1.11%(n=6)，表明該方法重復(fù)性較好。

2.6 回收率試驗(yàn)

精密稱取適量空白微球3份，置于25 ml 容量瓶中，加入相應(yīng)的阿霉素標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，用10%的水的乙腈溶液進(jìn)行溶解稀釋并定容，得到低中高3種不同濃度的阿霉素溶液，在488 nm 波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，將測(cè)得值帶入線性回歸方程，計(jì)算該方法的平均回收率，結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 回收率試驗(yàn)結(jié)果

由上表可以看出，低中高濃度回收率分別為101.02%、100.56%、100.20%，RSD 分別為0.27%、0.09%、0.23%，符合要求。

2.7 微球的載藥量、包封率測(cè)定

取自制阿霉素聚乳酸微球樣品3批，精密稱量，置于容量瓶中，10%的水的乙腈溶液溶解微球、稀釋并定容，以稀釋液為空白溶液，在488 nm波長(zhǎng)處測(cè)定樣品溶液的吸光度，結(jié)果代入回歸方程計(jì)算微球的載藥量、包封率，結(jié)果見(jiàn)表4。

表4 阿霉素微球的含量測(cè)定結(jié)果(n=3)

由上表可以看出，阿霉素聚乳酸微球的平均載藥量為5.93%，包封率為38.3%。

3 討論

一般提取微球中藥物的方法有［3］:①選用一種溶劑，只溶解藥物而不溶解材料，將藥物從微球中萃取出來(lái);②選用一種溶劑，將藥物和載體材料全部溶解，然后選用另一種不溶載體材料的溶劑，將藥物萃取出來(lái);③選用一種溶劑，將藥物和載體

材料溶解，然后選用另外一種溶劑，將載體材料沉淀下來(lái)，過(guò)濾不溶物得濾液測(cè)量;④選用一種溶劑溶解PLA 和藥物，然后選用合適的方法直接測(cè)定。本實(shí)驗(yàn)采用溶劑溶解PLA 和藥物后直接測(cè)定。根據(jù)阿霉素的紫外吸收光譜特征，阿霉素在233nm、254nm 處有較大紫外可見(jiàn)光吸收，PLA 在此波長(zhǎng)處也有吸收，而在488nm 處只有阿霉素有吸收，無(wú)PLA 干擾吸收，故采用紫外分光光度法測(cè)定阿霉素聚乳酸微球含量時(shí)，一般選擇波長(zhǎng)為PLA 無(wú)干擾吸收的488nm，可以提高該方法的準(zhǔn)確度。

［1］鄭元財(cái)，余志賢，謝輝，等.熒光分光光度法檢測(cè)大鼠膀胱組織中表阿霉素濃度［J］.海峽藥學(xué)，2012，24(10):37

［2］王勇，孫永海，張宏，等.阿霉素磁性明膠微球的制備及特性檢測(cè)［J］.解放軍藥學(xué)學(xué)報(bào)，2007，23(4):272

［3］靳浩.注射用阿霉素微球的研究［D］.中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院，2006:29