陳 娟，蒲恒然

(貴州省畢節(jié)市食品藥品檢驗(yàn)所，畢節(jié) 551700)

小兒酚氨咖敏顆粒常用于兒童傷風(fēng)感冒引起的發(fā)熱、頭疼、關(guān)節(jié)痛等癥狀，為《國家藥品標(biāo)準(zhǔn)化學(xué)藥品地方標(biāo)準(zhǔn)上升國家標(biāo)準(zhǔn)》第十二冊收載品種，標(biāo)準(zhǔn)中對其中主要成分氨基比林、咖啡因和馬來酸氯苯那敏的含量及限度有所規(guī)定，均采用高效液相色譜法進(jìn)行含量測定。而另一主要成分對乙酰氨基酚的含量、限度及其測定方法均未予規(guī)定，筆者認(rèn)為該標(biāo)準(zhǔn)存在一定缺陷。本文以高效液相色譜法同時(shí)測定小兒酚氨咖敏顆粒中對乙酰氨基酚、咖啡因和氨基比林的含量，方法簡便易行，結(jié)果可靠，重現(xiàn)性好，精密度高，提高了制劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，能更好地控制產(chǎn)品質(zhì)量。

1 儀器與試藥

島津LC－10ATvp高效液相色譜儀，SPD－10Avp紫外檢測器(日本島津公司)，威瑪龍色譜工作站(南寧威瑪龍色譜科技有限公司)。Waters1525高效液相色譜儀，Waters 484紫外檢測器，Breeze色譜處理軟件(美國Waters公司)。UV－2100型可見－紫外分光光度儀(日本島津公司)。AG135電子天平(瑞士梅特勒);AY120電子天平(日本島津公司)。對乙酰氨基酚、咖啡因、氨基比林對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號分別為 100018－200107、171215－200406、100503－200301)，小兒酚氨咖敏顆粒為市售品(為不同的三家藥廠生產(chǎn)，批號分別為20110109、20110121、20110201)。甲醇為色譜純;其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 Diamonsil C18柱(200 mm×4.6 mm，5 μm);流動相:1%醋酸溶液(用二乙胺調(diào)節(jié)pH值為3.7)－ 甲醇(60∶40);檢測波長 272 nm;流速 1.0 ml/min;進(jìn)樣量20 μl，按對乙酰氨基酚峰計(jì)理論塔板數(shù)不小于4000。

2.2 溶液制備

2.2.1 對照品溶液的制備 精密稱取對乙酰氨基酚約40 mg(41.61 mg)(括號內(nèi)為實(shí)際稱量，下同)、咖啡因?qū)φ掌芳s10 mg(9.28 mg)，氨基比林對照品約32 mg(35.82 mg)，置同一100 ml量瓶中，加流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對照品儲備液，精密量取上述對照品儲備液5 ml，置50 ml量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液。

2.2.2 供試品溶液的制備 取本品10袋的內(nèi)容物，研細(xì)，精密稱取適量(約相當(dāng)于對乙酰氨基酚10 mg)，置具塞錐形瓶中，精密加入流動相25 ml，充分振搖使溶解，濾過，精密量取續(xù)濾液5 ml，置50 ml量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。

2.2.3 陰性對照溶液的制備 依處方，分別稱取白糖30 g、糊精 18 g、淀粉 0.8 g，研勻，精密稱取 0.8023 g，置具塞錐形瓶中，精密加入流動相25 ml，充分振搖使溶解，濾過，精密量取續(xù)濾液5 ml，置50 ml量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻，作為陰性對照溶液。

2.3 系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn) 取對照品溶液20 μl，重復(fù)進(jìn)樣5次，按峰面積計(jì)算，對乙酰氨基酚、咖啡因和氨基比林的RSD分別為0.26%、0.25%和0.17%。各峰分離度均大于5，理論塔板數(shù)(按對乙酰氨基酚峰計(jì)算)平均為5256，符合《中國藥典》要求［1］。結(jié)果見圖1。更換儀器(Waters1525)同法測定，對乙酰氨基酚、咖啡因和氨基比林的 RSD分別為 0.25%、0.22%和0.19%。各峰分離度均大于5，理論塔板數(shù)(按對乙酰氨基酚)平均為5302。

圖1 對照品(A)供試品(B)陰性對照(C)HPLC色譜圖

另外取陰性對照溶液，按樣品測定方法進(jìn)行測定，結(jié)果表明其他成分不干擾對乙酰氨基酚、咖啡因和氨基比林的測定。

2.4 線性關(guān)系 精密量取上述對照品儲備液6.0、8.0、10.0、12.0 和 14.0 m l，分別置 100 m l量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，得系列對照品溶液。分別吸取20 μl注入高效液相色譜儀，依法測定，記錄色譜圖，以濃度X(μg/ml)為橫坐標(biāo)，峰面積積分值Y為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，得回歸方程為:對乙酰氨基酚Y=27 591.0 X － 0.400 01(r=1.0000);咖啡因 Y=69 638.7 X+0.222 09(r=1.0000)，氨基比林 Y=44 079.6 X+0.081 734(r=1.0000)。結(jié)果表明:對乙酰氨基酚在 20.80 ～ 62.41 μg/m l、咖啡因在 4.64 ～13.92 μg/ml、氨基比林在17.91 ～53.72 μg/ml范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.5 精密度試驗(yàn) 按照樣品測定方法，取同一份供試品溶液(批號20110109)，按照含量測定的方法重復(fù)進(jìn)樣5次。按峰面積計(jì)算，對乙酰氨基酚RSD為0.5%;咖啡因RSD為1.0%，氨基比林RSD為0.8%。

2.6 重復(fù)性試驗(yàn) 取本品(批號為20110109)5份，精密稱定，按照供試品溶液的制備方法制成供試品溶液，照含量測定的方法依法測定，按峰面積分別計(jì)算出每份供試品的含量，根據(jù)含量結(jié)果依法計(jì)算RSD。對乙酰氨基酚RSD為0.6%，咖啡因RSD為1.1%，氨基比林RSD為0.9%(n=5)。結(jié)果表明，含量測定方法重復(fù)性良好。

2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一份供試品溶液(批號為20110109)，在12 h內(nèi)按照含量測定的方法，在不同時(shí)間進(jìn)樣測定，按峰面積計(jì)算，對乙酰氨基酚 RSD為0.6%，咖啡因 RSD為1.0%，氨基比林RSD為0.7%(n=6)。結(jié)果表明，供試品溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.8 回收率試驗(yàn) 分別精密稱取樣品(約相當(dāng)于氨基比林2、4和6 mg)各3份，置具塞錐形瓶中，精密加入對照品儲備液各10 ml、乙醇15 ml，超聲5 min使溶解，濾過，精密量取續(xù)濾液5 ml，置50 m l量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻，按樣品測定方法測定，計(jì)算平均回收率(n=9)，對乙酰氨基酚回收率為99.9%，RSD為0.5%，咖啡因回收率為99.9%，RSD 為1.2%;氨基比林回收率為100.7%，RSD為1.0%。結(jié)果見表1、表2和表3。

表1 對乙酰氨基酚加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果

表2 咖啡因加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果

表3 氨基比林加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果

2.9 樣品測定 精密稱取小兒酚氨咖敏顆粒(約相當(dāng)于氨基比林8 mg)，置具塞錐形瓶中，精密加乙醇25 ml，超聲5 min使溶解，濾過，精密量取續(xù)濾液5 ml，置50 m l量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。分別吸取對照品溶液及供試品溶液20 μl注入高效液相色譜儀，依法測定，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算，并將咖啡因計(jì)算結(jié)果與1.0927相乘，即得。分別對3個(gè)廠家的三批產(chǎn)品進(jìn)行測定，結(jié)果均在標(biāo)示量的95.0% ～105.0%的范圍內(nèi)，批內(nèi) RSD 均小于1.0%。結(jié)果見表4。

表4 小兒酚氨咖敏顆粒含量測定結(jié)果(n=3)

3 討論

3.1 按《國家藥品標(biāo)準(zhǔn)化學(xué)藥品地方標(biāo)準(zhǔn)上升國家標(biāo)準(zhǔn)》第十二冊，標(biāo)準(zhǔn)中對酚氨咖敏顆粒的另一主要成分對乙酰氨基酚含量測定未予規(guī)定，存在一定缺陷。本文采用高效液相色譜法同時(shí)測定小兒酚氨咖敏顆粒中對乙酰氨基酚、咖啡因和氨基比林的含量，方法簡便、快速、準(zhǔn)確，不但完善了現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)，提高了制劑標(biāo)準(zhǔn)的可行性及可靠性，而且可以更好地控制該制劑的質(zhì)量。

3.2 檢測波長的選擇，在200～400 nm波長范圍內(nèi)，分別取對乙酰氨基酚、咖啡因及氨基比林混合對照品溶液及樣品溶液進(jìn)行光譜掃描，根據(jù)掃描結(jié)果，選用272 nm為檢測波長，結(jié)果比較理想。

3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，對乙酰氨基酚在20.80～62.41 μg/ml、咖啡因在 4.64 ～ 13.92 μg/ml、氨基比林在17.91 ～53.72 μg/m l范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，而且精密度、重復(fù)性和回收率等試驗(yàn)結(jié)果均較為理想，樣品含量測定結(jié)果也比較可信。

1 中國藥典［S］.二部.2005:附錄28