王爾棟，陳韻竹，陳國(guó)華，蔡 楓，李洪武*

（1.海南大學(xué) 海洋學(xué)院，海南 ?？?570228；2.?？跒懓钌锛夹g(shù)有限公司，海南 ?？?570203）

由于自然環(huán)境的變化和人為破壞，世界上大部分的珊瑚正在以驚人的速度退化消失[1].擁有珊瑚礁30%的東南亞地區(qū)，已有60%的遭到破壞，其中菲律賓為70%，印度尼西亞則高達(dá)80%，以此速度，40年內(nèi)整個(gè)東南亞的珊瑚礁生態(tài)系統(tǒng)將完全消失[2-4].另外據(jù)澳大利亞的全球珊瑚礁生態(tài)系統(tǒng)監(jiān)測(cè)網(wǎng)估計(jì)，近年來(lái)，珊瑚捕捉和采集技術(shù)的提高以及珊瑚人工養(yǎng)殖研究者之間的交流都有效地促進(jìn)了珊瑚人工養(yǎng)殖的發(fā)展[5].相關(guān)的問(wèn)題也相繼的出現(xiàn)在養(yǎng)殖過(guò)程中[6]，如病原體的發(fā)生、傳播與擴(kuò)散，寄生蟲(chóng)以及捕食者的危害.其中珊瑚養(yǎng)殖中出現(xiàn)的寄生蟲(chóng)問(wèn)題，國(guó)內(nèi)外都報(bào)道極少[7].尤其對(duì)珊瑚寄生蟲(chóng)的報(bào)道極少；而國(guó)內(nèi)的珊瑚人工養(yǎng)殖更是還在起步階段，沒(méi)有對(duì)珊瑚寄生蟲(chóng)的任何描述.國(guó)外文獻(xiàn)中較為常見(jiàn)的珊瑚寄生蟲(chóng)是紅蟲(chóng)[8-10]，一般治理的方法是用治療大型狗類犬心蟲(chóng)的菌素氧化物（每1436 L水中有23mg菌素氧化物含量為0.016mg·L-1），將其加入水缸中放置5～7h.但是關(guān)于鹿角珊瑚寄生蟲(chóng)櫛水虱的報(bào)道幾乎沒(méi)有，所以很有必要對(duì)實(shí)驗(yàn)室出現(xiàn)的櫛水虱進(jìn)行詳細(xì)的研究[11-13].本研究探索人工養(yǎng)殖下鹿角珊瑚出現(xiàn)寄生蟲(chóng)櫛水虱的防治方法，為未來(lái)珊瑚礁的保護(hù)提供數(shù)據(jù)和資料.

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)生物

供試珊瑚為松枝鹿角珊瑚（Acropora brueggemanni）和寄生蟲(chóng)櫛水虱 Asellus aquaticuse，分離自被寄生蟲(chóng)感染的珊瑚體，由海口瀾邦生物科技有限公司提供.

1.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑

供試試劑見(jiàn)表1.

1.1.3 供試所需設(shè)備和器材

供試所需設(shè)備和器材見(jiàn)表2.

1.2 研究方法

1.2.1 實(shí)驗(yàn)藥品的配制

量取O,O-二甲基-（2,2,2-三氯-1-羥基乙基）膦酸酯（敵百蟲(chóng)）晶體藥品20 mg，加入200 mL蒸餾水，混勻，得到濃度為100 mg·L-1的敵百蟲(chóng)藥品母液.置于室溫保存.

表1 供試試劑Tab.1 The experimental reagents

表2 供試所需設(shè)備和器材Tab.2 The instruments and experimental methods

1.2.2 供試生物采集

取中出現(xiàn)被寄生蟲(chóng)感染并白化鹿角珊瑚，在解剖鏡下對(duì)珊瑚白化部分進(jìn)行觀察，發(fā)現(xiàn)其白化和未白化交界區(qū)域有寄生蟲(chóng)（A.aquaticuse）.其體長(zhǎng)為2～3 mm.使用解剖將櫛水虱從珊瑚上分離（見(jiàn)圖1）.截取3 cm左右的健康鹿角珊瑚斷肢，固定在塑料板上[14].

1.2.3 供試所需養(yǎng)殖環(huán)境建立

供試所需培養(yǎng)方法為室內(nèi)循環(huán)水珊瑚人工養(yǎng)殖，該方法主要依靠柏林系統(tǒng)珊瑚養(yǎng)殖方法[9-10].應(yīng)用ELH JCR鹵素?zé)艉蚑5HO燈管作為光源，以蛋白質(zhì)分離器、鈣反應(yīng)器和沸石桶反應(yīng)器等控制水體環(huán)境（恒溫26℃）.

1.2.4 供試所需帶藥養(yǎng)殖環(huán)境制作

圖1 櫛水虱的變化Fig.1 The change of Asellus aquaticuse

據(jù)Mitch Carl等櫛水虱在敵百蟲(chóng)濃度為3 mg·L-1的海水中，48 h內(nèi)必定會(huì)死亡，所以3 mg·L-1為最高濃度.在超凈臺(tái)上，按所需的質(zhì)量稱取供試試劑O,O-二甲基-（2,2,2-三氯-1-羥基乙基）膦酸酯（敵百蟲(chóng)）后，將溶入到養(yǎng)殖環(huán)境中（恒溫26℃）混合均勻后，迅速蓋好，達(dá)到實(shí)驗(yàn)所需藥品濃度.按照各濃度梯度配置，依次設(shè)置3.0、2.8、2.5、2.0、1.8、1.5、1.0、0.8、0.5 mg·L-19個(gè)濃度梯度.用等體積蒸餾水為對(duì)照組.

1.2.5 供試養(yǎng)殖環(huán)境水質(zhì)測(cè)定

采用《GB17378.4-2007海洋檢測(cè)規(guī)范：第四部分海水分析》的方法對(duì)有寄生蟲(chóng)的珊瑚養(yǎng)殖缸中水質(zhì)進(jìn)行測(cè)定.

1.2.6 敵百蟲(chóng)對(duì)寄生蟲(chóng)櫛水虱的毒性研究

每個(gè)濃度下的實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組各放將10只櫛水虱.分別放入氧氣泵，將通氣量調(diào)整到合適的大小進(jìn)行充氧并造流.從放置寄生蟲(chóng)時(shí)間開(kāi)始計(jì)時(shí)，在12、24、48h后和觀察櫛水虱對(duì)敵百蟲(chóng)的毒性反應(yīng).為保證實(shí)驗(yàn)質(zhì)量，每個(gè)濃度下進(jìn)行3次重復(fù)實(shí)驗(yàn)，分別命名為A組，B組和C組.

1.2.7 敵百蟲(chóng)對(duì)鹿角珊瑚毒性研究

為保證藥品敵百蟲(chóng)不會(huì)在殺滅櫛水虱時(shí)對(duì)珊瑚本體造成影響.根據(jù)敵百蟲(chóng)對(duì)櫛水虱的毒性研究的結(jié)果，由于3.0、2.8 mg·L-1的含量會(huì)對(duì)珊瑚形成明顯刺激，分泌腔液并迅速白化，所以確定使用2.5、2.0、1.8、1.5、1.0 mg·L-14個(gè)敵百蟲(chóng)濃度梯度對(duì)鹿角珊瑚進(jìn)行實(shí)驗(yàn).每2個(gè)一組分別放入實(shí)驗(yàn)缸和對(duì)照缸.向?qū)嶒?yàn)組中加入所需敵百蟲(chóng)母液，將實(shí)驗(yàn)組的濃度調(diào)整到所需濃度.記錄珊瑚狀態(tài)，根據(jù)敵百蟲(chóng)對(duì)櫛水虱的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，決定對(duì)珊瑚先進(jìn)行24h觀察，記錄下珊瑚情況并拍照.后將實(shí)驗(yàn)鹿角珊瑚清潔后放回原養(yǎng)殖缸中，觀察其生存狀態(tài).

1.2.8 供試試劑殺蟲(chóng)效果測(cè)定

分別記錄A組，B組和C組各6、12、24、48h后寄生蟲(chóng)的死亡個(gè)數(shù)，取3次平均值，計(jì)算公式為：平均死亡率=（3組供試寄生蟲(chóng)總數(shù)—3組剩余寄生蟲(chóng)數(shù)）/（3組供試寄生蟲(chóng)總數(shù)）×100%.

2 結(jié)果與分析

2.1 供試養(yǎng)殖環(huán)境水質(zhì)測(cè)定結(jié)果

測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表3.

表3 供試養(yǎng)殖環(huán)境水質(zhì)測(cè)定結(jié)果Tab.3 The results of water quality of the coral husbandry exhibit

2.2 敵百蟲(chóng)對(duì)櫛水虱毒性研究結(jié)果（見(jiàn)表4）

將A組、B組和C組求平均值后，將死亡個(gè)數(shù)同濃度梯度建立線性關(guān)系（見(jiàn)圖2）.

2.3 試驗(yàn)時(shí)間內(nèi)櫛水虱死亡和存活狀態(tài)

通過(guò)分析和觀察分別放置在實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組的10只櫛水虱試驗(yàn)時(shí)間內(nèi)死亡和存活情況，選取有明顯分辨的組別進(jìn)行整理和分析，判斷在某一濃度下敵百蟲(chóng)溶液能否有效地殺死寄生蟲(chóng)（見(jiàn)表5）.

2.4 敵百蟲(chóng)對(duì)鹿角珊瑚毒性研究結(jié)果

敵百蟲(chóng)對(duì)鹿角珊瑚毒性研究結(jié)果見(jiàn)表6.

表4 三組敵百蟲(chóng)對(duì)櫛水虱毒性刺激結(jié)果Tab.4 The results of three groups toxicity experiment

圖2 敵百蟲(chóng)對(duì)櫛水虱的試驗(yàn)結(jié)果Fig.2 The results of toxicity experiment

2.5 分析與討論

據(jù)表3，珊瑚所需海水水質(zhì)環(huán)境是符合自然界珊瑚生存所適范圍，所以水體環(huán)境是試受珊瑚所適宜的.如圖3所示，在櫛水虱出現(xiàn)前后珊瑚的變化.當(dāng)相同的水環(huán)境下（如表3所示）在櫛水虱出現(xiàn)之前珊瑚狀態(tài)可見(jiàn)觸手完全伸展，色彩明艷，可鑒定為健康珊瑚.在櫛水虱出現(xiàn)之后珊瑚狀態(tài)可見(jiàn)觸手萎縮或珊瑚分泌腔液，表面有明顯的白化，1～2 d珊瑚即可見(jiàn)嚴(yán)重蛻皮，完全裸露白色骨骼，可鑒定珊瑚瀕臨死亡.

據(jù)表4，確定24 h內(nèi)，3.0、2.8、2.5、2.0、1.5 mg·L-1質(zhì)量濃度中的櫛水虱都基本死亡：完全麻痹，身體翻轉(zhuǎn)，步足無(wú)法爬行和附著，只有尾部抽動(dòng)，最終從被感染珊瑚體上脫落.如圖1所示，櫛水虱受藥前后對(duì)比.

如圖2所示，36h內(nèi)絕大多數(shù)櫛水虱已經(jīng)死亡或已經(jīng)腐化消失，而含量為1.0 mg·L-1時(shí)，敵百蟲(chóng)溶液對(duì)櫛水虱48 h內(nèi)基本沒(méi)有影響.從實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以看出，在含量為1.5～3.0 mg·L-1的敵百蟲(chóng)溶液中，櫛水虱會(huì)在24 h內(nèi)基本死亡，從珊瑚上脫落.36 h內(nèi)，所有櫛水虱會(huì)腐化，完全死亡.說(shuō)明在此濃度間，敵百蟲(chóng)溶液能有效地殺死寄生蟲(chóng)櫛水虱.

據(jù)表5，當(dāng)敵百蟲(chóng)含量為1.5 mg·L-1到2.0 mg·L-1之間時(shí)，對(duì)珊瑚無(wú)影響.36 h內(nèi)（放回原缸中），當(dāng)含量為2.0 mg·L-1時(shí)，珊瑚在原缸中白化死亡.分析可能其受到了敵百蟲(chóng)的影響，不能適應(yīng)原缸中的生存條件.而含量為2.5 mg·L-1時(shí)，珊瑚會(huì)在24 h內(nèi)死亡.從實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以看出，在含量為1.5 mg·L-1和1.8 mg·L-1的敵百蟲(chóng)溶液中，鹿角珊瑚24h內(nèi)不會(huì)受到影響，并且在被放回原缸后的24 h后，也不會(huì)有白化現(xiàn)象.

由表6，根據(jù)本次對(duì)寄生蟲(chóng)櫛水虱和珊瑚的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，可以得出結(jié)論：當(dāng)敵百蟲(chóng)溶液質(zhì)量濃度為1.5 mg·L-1和1.8 mg·L-1時(shí)，36h內(nèi)可有效使鹿角珊瑚附著的寄生蟲(chóng)櫛水虱脫落，且對(duì)鹿角珊瑚的生長(zhǎng)不造成任何影響.后將鹿角珊瑚移出放回原缸，24 h內(nèi)櫛水虱會(huì)腐化，而鹿角珊瑚則能繼續(xù)生存.

危害生物櫛水虱屬于甲殼綱（Crustacea)，等足目（Isopoda)，櫛水虱亞目身體細(xì)長(zhǎng)，2 mm-11 mm.有的種類具眼.其生存于海底表面或底內(nèi)[15-16].因?yàn)樽匀唤缟汉靼谆劳龅闹饕蚴侨驓夂蜃兓腿藶槠茐模赡芗纳x(chóng)這方面沒(méi)有引起足夠的重視，鮮見(jiàn)報(bào)道.由于在室內(nèi)循環(huán)水養(yǎng)殖環(huán)境下，沒(méi)有自然環(huán)境的影響，寄生蟲(chóng)的危害就被凸顯出來(lái).雖然國(guó)外珊瑚礁人工養(yǎng)殖資料已經(jīng)比較豐富[12]，但是對(duì)珊瑚寄生蟲(chóng)的報(bào)道極少；而國(guó)內(nèi)的珊瑚人工養(yǎng)殖更是還在起步階段，沒(méi)有對(duì)珊瑚寄生蟲(chóng)的任何描述.本次實(shí)驗(yàn)希望能為以后的研究提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù).

表5 試驗(yàn)時(shí)間內(nèi)死亡和存活情況Tab.5 The death and the servive during the experiment

表6 敵百蟲(chóng)對(duì)鹿角珊瑚毒性研究Tab.6 The results of toxicity experiment

圖3 珊瑚狀態(tài)的變化Fig.3 The change of coral state

[1]王麗榮,趙煥亭.珊瑚礁生態(tài)保護(hù)與管理研究[J].生態(tài)學(xué)雜志,2004,23(4)：103-108.

[2]鄒仁林.中國(guó)珊瑚礁的現(xiàn)狀與保護(hù)對(duì)策[M].北京：中國(guó)科學(xué)技術(shù)出版社,1979：281-291.

[3]羅夏.珊瑚前途堪憂[N].科學(xué)時(shí)報(bào),2003-09-17(3).

[4]Holdgate M W.熱帶海岸帶資源的可持續(xù)利用—一個(gè)重大的保護(hù)問(wèn)題[J].AMBIO,1993,22(7)：481-482.

[5]鮑鷹,周學(xué)家,黃美霞,等.鹿角珊瑚人工養(yǎng)殖的初步研究[J].海洋科學(xué),2012,36(1)：69-72.

[6]Henrik Franklin,Christopher A.Muhando,et al.坦桑尼亞桑給巴爾地區(qū)珊瑚養(yǎng)殖及其在時(shí)間上的補(bǔ)生模式[J].Ambio,1998,27(8)：649-653.

[7]Eric Borneman.Introduction to the husbandry of corals in aquariums：A review[J].Advances in Coral Husbandry in Public Aquariums.Public Aquarium Husbandry Series,2008,2：3-14.

[8]Adey W H.The microcosm：A new tool for reef research[J].Coral Reefs,1983,1：193-201.

[9]Anthony K R N.Coral suspension feeding on fine particulate matter[J].Exp Mar Biol Ecol,1999,232：85-106.

[10]Borneman E H.Sea Salts,Part One：A review and a new study to determine their effects on reef aquarium inhabitants[J].Reef Hobbyist Online,2006,2(3).542-551.

[11]Mitch Carl.Predators and pests of captive corals[J].Advances in Coral Husbandry in Public Aquariums.Public Aquarium Husbandry Series,2008,2：31-36.

[12]鄒仁林.中國(guó)動(dòng)物志,腔腸動(dòng)物門(mén),珊瑚蟲(chóng)綱,石珊瑚目,造礁石珊瑚（第1版）[M].北京：科學(xué)出版社,2001：1-221.

[13]鄒仁林.西沙群島珊瑚類研究，Ⅴ.深水的鹿角珊瑚及其一新種[J].熱帶海洋,1984,3(2)：52-58.

[14]鄒仁林.造礁石珊瑚[J].生物學(xué)通報(bào),1998,33(6)：8-11.

[15]劉凌云,鄭光美.普通動(dòng)物學(xué)（第3版）[M].北京：高等教育出版社,1978：1-248.

[16]中國(guó)大百科全書(shū)總編輯委員會(huì).中國(guó)大百科全書(shū),生物卷[M].北京：中國(guó)大百科全書(shū)出版社,1991：1-460.