黃 山 黃 帆 遇呈祥 晏錚劍 鄧忠良 (重慶醫(yī)科大學第二附屬醫(yī)院骨科，重慶 400010)

骨肉瘤在老年人病變中的特點與青少年不同，可能與老年人伴有退行性改變及骨質疏松有關，因此骨肉瘤病變進展時體內的蛋白表達亦可能有差別。骨肉瘤病變進展時體內多種蛋白異常表達，尤其與原癌基因的激活和抑癌基因的失活有關。WTX基因是一種抑癌基因，由于X染色體定位的特殊性，因此抑癌的特異性強〔1〕。PTEN是抑癌基因，可以明顯抑制腫瘤增殖及浸潤。血管內皮生長因子(VEGF)是血管內皮細胞生成的促進因子，可以介導腫瘤血管新生，并對腫瘤進展有重要促進作用。近來也有研究顯示VEGF是一種重要的癌基因〔2〕。本文關注VEGF、WTX和PTEN在老年骨肉瘤患者組織中的表達，關注其相關性及在不同臨床特征中的表達差別。

1 材料與方法

1.1 臨床資料 2011年1月至2011年12月我院確診為骨肉瘤的老年患者作為觀察組，共62例，男32例，女30例，年齡60～78(平均67.6)歲。均經病理學主治醫(yī)師確診，并按WHO中關于骨腫瘤的標準進行分類。選擇同期在我院行骨樣骨瘤切除的老年人術后組織40例作為對照組，男20例，女20例，年齡60～77(平均67.9)歲。兩組在一般臨床特征的比較中，差別無統計學意義。

1.2 VEGF、WTX和PTEN蛋白檢測 VEGF、WTX和PTEN蛋白均購自武漢博士德生物技術公司，三種蛋白的檢測應用免疫組化SP法，常規(guī)組織取材并經脫鈣后進行檢測，應用DAB進行顯色，均由同一病理技師操作，減少人為誤差，嚴格質量控制。

1.3 結果判定標準 VEGF、WTX和PTEN蛋白均以細胞質中出現棕黃色顆粒為陽性，隨機選擇10個高倍視野，計數陽性細胞的百分率，以陽性細胞的百分率≥25%為陽性，以陽性細胞的百分率＜25%為陰性。

1.4 統計學方法 應用SAS6.12軟件進行χ2檢驗及相關分析。

2 結果

2.1 VEGF、WTX和PTEN在觀察組與對照組中表達的比較VEGF在觀察組中表達的陽性率明顯高于對照組，WTX和PTEN在觀察組中表達的陽性率明顯低于對照組(P＜0.000 1)。見表1。

2.2 觀察組中VEGF、WTX和PTEN的表達在不同臨床病理特征中的關系 觀察組中VEGF、WTX和PTEN蛋白表達的陽性率與腫瘤的轉移、最大直徑、脈管浸潤、臨床分期及Ki67的表達密切相關。見表2。

2.3 觀察組中VEGF、WTX和PTEN表達的相關性分析 觀察組中VEGF和WTX(r=-0.43，P=0.011 3)、VEGF和PTEN(r=-0.48，P=0.028 7)的表達具有負相關性，而 WTX和PTEN(r=0.40，P=0.034 1)的表達具有正相關性。

表1 VEGF、WTX和PTEN在觀察組與對照組中陽性表達的比較［n(%)］

表2 觀察組中VEGF、WTX和PTEN的陽性表達在不同臨床病理特征中的關系〔n(%)〕

3 討論

骨肉瘤在病變進展中出現蛋白表達的失常，尤其是癌基因和抑癌基因的失調有重要意義。VEGF是血管內皮細胞生成的促進因子，高表達于多種惡性腫瘤，且腫瘤惡性程度越高，其表達越高，因此其起作用的方式與癌基因相似。VEGF對血管生成的促進作用表現為多種方面，主要是對基質中CD34、CD31、CD105陽性的血管〔3〕，腫瘤間質血管生成多，使腫瘤的營養(yǎng)豐富，氧供豐富，腫瘤生成和代謝快，侵襲能力增加，轉移潛能增強〔4〕。PTEN是由多功能磷酸酶編碼的腫瘤抑制基因，不僅具有磷酸酯酶的活性，還具有多種腫瘤生物學的作用特征。PTEN的C端尾部含有富含絲/蘇氨酸殘基的PEST序列和一個PDZ結合區(qū)域，如果這個區(qū)域出現明顯的突變則可以逆轉抑癌基因的特點，進而影響突變體的穩(wěn)定性和磷酸酯酶的活性，分子結構也將發(fā)生明顯的變化〔5〕。但是PTEN也與其他的磷酸酯酶不完全相同，主要是PTEN沒有調節(jié)的亞基，因此其表達及協同性具有特異性，PTEN也因此種結構的特點倍受學者的廣泛關注〔6〕。研究顯示WTX蛋白能夠與APC、AXIN1和Keap1等形成復合物，并且能與細胞質中的β-catenin結合而使其降解，進而抑制信號轉導〔7，8〕。WTX可以通過與WT1結合來促進WT1介導的內源性靶基因雙調蛋白的轉錄，進而在細胞分化的核轉錄調控通路中發(fā)揮作用〔9〕。

本實驗提示VEGF高表達、WTX和PTEN低表達促進腫瘤的發(fā)生，此機制與VEGF作為癌基因的作用相同，與WTX和PTEN作為抑癌基因的作用相同。WTX基因在腎母細胞瘤中異常表達率明顯增高，而在白血病、肝細胞癌、胃癌、結直腸癌等腫瘤中異常表達率明顯降低〔1〕，骨肉瘤是WTX表達異常的重要腫瘤之一，其低表達時對骨肉瘤發(fā)生具有獨特的生物學作用。本實驗提示VEGF、WTX和PTEN參與了腫瘤的進展，主要是當VEGF、WTX和PTEN異常表達時促進腫瘤的生長、增殖和脈管浸潤;也提示聯合檢測VEGF、WTX和PTEN的表達可能與預后有一定關系。三種蛋白可能具有通路作用，由于PTEN和WTX高表達時均可以抑制腫瘤的血管生成，因此WTX和PTEN的協同作用可能與VEGF密切相關，即VEGF、WTX和PTEN的協同作用是通過血管的生成聯系在一起的。WTX和PTEN具有抑制血管新生的作用，可以通過降低內皮細胞的遷移能力、增加血管內皮生長的抑制因子作用(如血小板反應蛋白)進而減少腫瘤的血管新生〔10〕。

1 李思齊，張 毅，梁道明，等.抑癌基因WTX在結腸癌中的表達及其意義〔J〕.中國普通外科雜志，2012;21(10):1217-21.

2 賀榮芳，胡忠良，沈 明，等.胃癌組織中PTEN、VEGF、MMP-9的表達及相關性研究〔J〕.中國普通外科雜志，2005;14(3):173-7.

3 劉愛東，龐久玲，劉士生.胃癌中基質金屬蛋白酶-9和CD105表達關系的研究〔J〕.中國老年學雜志，2009;29(4):886-7.

4 陳述偉，楊述華，張勁松，等.PTEN、MMP-7、VEGF在骨巨細胞瘤中的表達〔J〕.腫瘤防治研究，2007;34(4):290-2.

5 魏法才，陳 啟，楊道貴，等.胃癌組織中PTEN和VEGF的表達及其相關性〔J〕.中華腫瘤防治雜志，2007;14(8):601-3.

6 包健榮，姚衛(wèi)康.PTEN、VEGF、BCL-2在大腸癌中的表達及相關性研究〔J〕.中國現代醫(yī)藥雜志，2012;14(5):34-5.

7 張慶玲，于莉娜，丁彥青.新抑癌基因WTX在腎腫瘤中的表達及意義〔J〕.廣東醫(yī)學，2011;32(10):1253-5.

8 朱水山，龔 輝，郭宏興，等.WTX基因:第一個位于X染色體上的腎母細胞瘤抑癌基因〔J〕.中國病理生理雜志，2009;25(1):194-6.

9 覃 創(chuàng)，陳嘉勇，梁道明.WTX基因在腫瘤中的研究進展〔J〕.重慶醫(yī)學，2012;41(5):502-3.

10 葉曉鋒，高 平，韓恩善，等.MMP-2、VEGF和PTEN的表達與食管鱗癌浸潤轉移的關系〔J〕.寧夏醫(yī)科大學學報，2012;34(4):326-8.