孟繁娟 劉賢英 祁盛昆(長春市人民醫(yī)院，吉林 長春 3005)

卵巢癌在女性生殖器惡性腫瘤中占第3位，死亡率第1位，其中約70%的患者發(fā)現(xiàn)時已是中、晚期，并且Ⅰ、Ⅱ期卵巢癌5年生存率為80% ～90%，Ⅲ、Ⅳ期僅為20% ～30%。因此，尋求卵巢癌浸潤、轉(zhuǎn)移的診斷指標(biāo)，做到早期發(fā)現(xiàn)、早期診斷并有效治療對卵巢癌預(yù)后非常重要。本研究分析不同時期卵巢癌患者血清中基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP)-2、MMP-9含量變化，旨在為卵巢癌侵襲、轉(zhuǎn)移及預(yù)后判斷提供客觀指標(biāo)。

1 材料與方法

1.1 材料 72例卵巢癌患者血清均由我院住院病人提供，所有病人均有病理診斷:轉(zhuǎn)移癌44例，非轉(zhuǎn)移癌28例。病理分級:Ⅰ級17例，Ⅱ級26例，Ⅲ級29例。根據(jù)TNM分期，T115例，T225例，T318例，T414例。40例健康人血清來源于血站獻血員，MMP-2、MMP-9試劑盒購于北京中山生物試劑有限公司。

1.2 方法 取-70℃冰箱內(nèi)凍存的人卵巢癌血清1∶100倍稀釋，嚴格按著使用說明書進行操作，分別加入含有 MMP-2、MMP-9抗體的酶標(biāo)板內(nèi)，每孔100 μl，4復(fù)孔，置37℃ CO2培養(yǎng)箱內(nèi)反應(yīng)60 min，取出后磷酸鹽緩沖液(PBS)洗3次，每次5 min，每孔內(nèi)加入酶標(biāo)抗體工作液100 μl，置37℃ CO2培養(yǎng)箱內(nèi)繼續(xù)反應(yīng)60 min，取出后甩干，PBS洗三次，加入鄰苯二胺底物工作液100 μl，避光保溫10 min，每孔內(nèi)加入終止反應(yīng)液50 μl，立即于酶標(biāo)儀波長492 nm測OD值，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品OD值在半對數(shù)坐標(biāo)紙上作圖，查出MMP-2、MMP-9含量，結(jié)果乘以稀釋倍數(shù)即為MMP含量。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法 應(yīng)用SPSS11.0軟件進行t檢驗。

2 結(jié)果

2.1 各組血清 MMP-2、-9含量比較 卵巢癌病人血清中MMP-2、-9含量與對照組相比差異有統(tǒng)計學(xué)意義，尤其是卵巢癌轉(zhuǎn)移組與非轉(zhuǎn)移組相比，MMP-2、-9含量升高非常明顯(P＜0.01)。見表1。

2.2 卵巢癌病人血清中MMP-2、-9含量與病理分級的關(guān)系 卵巢癌病人血清中MMP-2、-9含量與病理分級呈相關(guān)關(guān)系，即病理分級越高，MMP-2、-9含量亦升高明顯。見表2。

表1 卵巢癌病人與對照組血清MMP-2、-9含量比較(±s，ng/ml)

表1 卵巢癌病人與對照組血清MMP-2、-9含量比較(±s，ng/ml)

與正常對照組比較:1)P＜0.05，2)P＜0.01

組別 n MMP-2 MMP-9正常對照組40 212.8±31.6 224.5±36.3卵巢癌非轉(zhuǎn)移組 28 292.3±29.11) 356.2±40.21)卵巢癌轉(zhuǎn)移組 44 623.1±47.42) 494.9±42.52)

表2 卵巢癌病人血清中MMP-2、-9含量與病理分級的關(guān)系(±s，ng/ml)

表2 卵巢癌病人血清中MMP-2、-9含量與病理分級的關(guān)系(±s，ng/ml)

與Ⅰ級比較:1)P＜0.05，2)P＜0.01

組別 n MMP-2 MMP-9Ⅰ級17 323.8±36.2 269.2±37.9Ⅱ級 26 457.2±40.41) 356.2±42.51)Ⅲ級 29 627.8±32.12) 580.6±40.72)

2.3 卵巢癌患者血清中MMP-2、-9含量與臨床分期的關(guān)系MMP-2、-9含量與臨床分期有關(guān)，但是，T1、T2兩組間 MMP-2、-9含量接近，無統(tǒng)計學(xué)意義;T1、T2組分別與T3、T4組相比差異顯著。見表3。

表3 卵巢癌病人血清中MMP-2、-9含量與臨床分期的關(guān)系(±s，ng/ml)

表3 卵巢癌病人血清中MMP-2、-9含量與臨床分期的關(guān)系(±s，ng/ml)

與T1組比較:1)P＜0.05，2)P＜0.01

組別 n MMP-2 MMP-9 T115 302.1±27.6 381.2±29.2 T2 25 421.7±30.41) 406.5±33.1 T3 18 554.3±35.21) 516.5±37.31)T4 14 753.7±41.42) 531.3±27.52)

3 討論

上皮性卵巢癌由于缺乏特異性腫瘤標(biāo)記物和臨床癥狀，早期診斷率非常低，絕大部分患者就診時已屬于晚期，盡管可行瘤體減滅術(shù)和藥物治療，但預(yù)后不容樂觀〔1〕。文獻報道〔2〕，卵巢癌組織類型和分化程度是決定腫瘤行為及預(yù)后的關(guān)鍵因素。掌握不同卵巢癌組織病理學(xué)和分子生物學(xué)特征，有助于選擇早期篩查腫瘤標(biāo)識物。

此外，本文結(jié)果還表明，卵巢癌臨床分期越高，其MMP-2、-9含量亦升高，因為臨床上分期越高的病人腫瘤病變范圍越大。Cottcchia等〔3〕研究發(fā)現(xiàn)MMP-2、-9檢測對進展和復(fù)發(fā)卵巢癌的診斷有重要價值。MMP-2、-9屬于基質(zhì)金屬蛋白酶家族中的明膠酶類，能夠降解細胞外基質(zhì)，在腫瘤細胞生長、分化、侵襲、轉(zhuǎn)移、調(diào)節(jié)腫瘤血管生成及免疫監(jiān)視中發(fā)揮重要作用〔4〕。研究顯示MMP-2、-9含量可以作為一種很有潛力的判斷卵巢癌預(yù)后的生物學(xué)標(biāo)志物〔5〕，動態(tài)觀察其含量變化可以作為評估卵巢癌預(yù)后的客觀指標(biāo)。

1 張英麗，羊正炎.上皮性卵巢癌組織病理學(xué)及分子生物學(xué)研究進展〔J〕.國際腫瘤學(xué)雜志，2010;37(12):942-5.

2 Landen CN Jr，Birrer MJ，Sood AK.Early events in the pathogenesis of epithelial ovarian cancer〔J〕.J Clin Oncol，2008;26(6):995-1005.

3 Cottcchia CM，Curatolo AS，Zurakowski D，et al.Urinary MMP-2 and MMP-9 predict the presence of ovarian cancer in women wity normal CA125 levels〔J〕.Gynecol Oncol，2011;123(2):295-300.

4 Qie S，Sun BC，Zhao XL，et al.Correlation between expressions of matrix metalloproteinsse-2 and 9 and vasculogenic mimicry in gastrointestinal stromal tumors〔J〕.Zhong hua Yi Xue Za Zhi，2009;89(16):1106-9.

5 張明明，徐玉清.MMP-2和MMP-9在惡性腫瘤中的研究進展〔J〕.國際腫瘤學(xué)雜志，2012;39(11):820-3.