張卓 李志剛

黃芪總苷對SCC15口腔癌細(xì)胞活力的影響及機制

張卓 李志剛

目的 探討黃芪總苷對SCC15口腔鱗狀癌細(xì)胞活力的抑制作用及機制。 方法 將不同濃度黃芪總苷(100, 200, 400 μg/ml)作用于SCC15口腔癌細(xì)胞, 72 h后以噻唑藍(lán)比色法檢測各組細(xì)胞活力, Western blot法檢測細(xì)胞凋亡抑制蛋白Survivin的表達(dá)。結(jié)果 黃芪總苷可劑量依賴性地抑制SCC15口腔癌細(xì)胞活力。不同濃度黃芪總苷均可抑制Survivin在SCC15細(xì)胞中的表達(dá), Survivin的表達(dá)隨黃芪總苷濃度增加而減少。 結(jié)論 黃芪總苷可能通過抑制Survivin表達(dá)而降低SCC15口腔癌細(xì)胞活力。

黃芪總苷；SCC15細(xì)胞；細(xì)胞活力；Survivin

黃芪可提高機體免疫力, 具有補中益氣、升陽固表等功效, 是常用的補益類中藥, 也是腫瘤患者扶正固本方劑中的常用藥物［1］。現(xiàn)代研究表明, 黃芪總苷是黃芪的主要有效成分之一, 可誘導(dǎo)人急性早幼粒細(xì)胞、子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞、肝癌細(xì)胞以及肺腺癌等細(xì)胞凋亡［2-5］, 但黃芪總苷對口腔癌細(xì)胞的影響及機制尚不明確。因此, 本研究擬探討黃芪總苷對SCC15口腔癌細(xì)胞的影響及分子機制, 以期為口腔癌的臨床用藥提供理論基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料及儀器 SCC15口腔鱗狀癌細(xì)胞株(中科院上海細(xì)胞庫), 胎牛血清及DMEM培養(yǎng)基(Gibco公司), 黃芪總苷(純度≥98%, 南京廣潤生物制品有限公司), 噻唑藍(lán)(MTT, 南京建成生物工程研究所), Survivin抗體(Santa公司), 酶標(biāo)儀(北京普郎克公司)。

1.2 實驗分組 DMEM培養(yǎng)基中添加10%胎牛血清培養(yǎng)SCC15細(xì)胞, 對照組不添加處理因素, 黃芪總苷處理組分別給予終濃度為100, 200, 400 μg/ml的黃芪總苷。按1×104/孔的密度將SCC15細(xì)胞接種于96孔細(xì)胞培養(yǎng)板。

1.3 MTT法檢測SCC15細(xì)胞存活率 細(xì)胞分組培養(yǎng)72 h,換無血清培養(yǎng)基培養(yǎng)4 h, 向每孔加入20 μl MTT(濃度為5 mg/ml)作用4 h, 棄去96孔板內(nèi)液體, 加入150 μl二甲亞砜振蕩10 min, 酶標(biāo)儀上以490 nm波長檢測各孔吸光度, 細(xì)胞活力=(檢測組吸光度/對照組吸光度)×100%。

1.4 Western blot檢測Survivin蛋白表達(dá) 收集分組培養(yǎng)72 h的SCC15細(xì)胞, 粉碎細(xì)胞后以4℃ 12000 r/min離心15 min, Brafford法檢測并調(diào)節(jié)上清液中蛋白質(zhì)濃度, SDS-PAGE電泳蛋白, 將蛋白轉(zhuǎn)移至PVDF膜, 以Survivin蛋白及β-actin一抗室溫下分別孵育3 h, 再以辣根過氧化物酶標(biāo)記的二抗孵育1 h, 利用增強化學(xué)發(fā)光法顯影。以β-actin為內(nèi)對照, 觀察Survivin蛋白表達(dá)。

2 結(jié)果

2.1 黃芪總苷對SCC15細(xì)胞活力的影響 不同濃度黃芪總苷均可抑制SCC15細(xì)胞活力, 濃度為100、200及400 μg/ml的黃芪總苷處理SCC15細(xì)胞72 h后, 細(xì)胞活力分別為(69.58±9.46)%、(61.31±4.38)%及(48.47±6.83)%, 細(xì)胞活力均明顯低于對照組, 呈劑量依賴性(均為P＜0.01)。

2.2 黃芪總苷對SCC15細(xì)胞Survivin蛋白表達(dá)的影響 Western blot檢測顯示, 黃芪總苷可抑制SCC15細(xì)胞Survivin蛋白表達(dá), 呈明顯的劑量依賴性, Survivin的表達(dá)隨黃芪總苷濃度增加而減少(圖1)。

圖1 Survivin蛋白表達(dá)變化A組：對照組；B組：黃芪總苷100 μg/ml；C組：黃芪總苷200 μg/ml；D組：黃芪總苷400 μg/ml

3 討論

口腔癌是頜面部常見的黏膜上皮腫瘤, 多發(fā)于40～60歲人群, 發(fā)病部位以舌、頰、牙齦以及腭部最多見, 病理類型以鱗狀細(xì)胞癌最常見, 約80%左右［6］?？谇话┰缙谝跃植苛馨徒Y(jié)轉(zhuǎn)移為主, 晚期可發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。該病惡性度較高,目前的治療仍以早發(fā)現(xiàn), 早診斷, 早治療等措施為主, 仍無有效治療手段。

黃芪是傳統(tǒng)的補益類中藥, 具有補中益氣、升陽固表等功效, 現(xiàn)代藥理學(xué)證實黃芪具有抗衰老、提高機體免疫力等功能, 是腫瘤患者扶正固本方劑中的常用藥［1］。黃芪總苷是黃芪的主要有效成分之一, 可誘導(dǎo)人急性早幼粒細(xì)胞NB4細(xì)胞、子宮內(nèi)膜癌KLE細(xì)胞、肝癌BEL-7402細(xì)胞以及肺腺癌A549等細(xì)胞凋亡［2-5］, 本研究也發(fā)現(xiàn), 黃芪總苷可明顯抑制SCC15口腔鱗狀細(xì)胞癌的活力, 且黃芪總苷濃度越高, 腫瘤細(xì)胞活力越低, 對細(xì)胞的抑制作用越明顯, 呈劑量依賴性。Survivin是一種重要的凋亡抑制因子, Survivin的表達(dá)上調(diào)是口腔鱗狀細(xì)胞癌發(fā)生發(fā)展的重要機制之一［7］。本研究發(fā)現(xiàn),黃芪總苷可劑量依賴性地抑制Survivin在SCC15口腔鱗狀細(xì)胞癌中的表達(dá), Surivivin的表達(dá)減少與SCC15細(xì)胞活性降低趨勢一致。因此, 黃芪總苷可能通過抑制Survivin表達(dá)降低了SCC15細(xì)胞活力。盡管本研究仍有許多問題有待進一步探討, 但本文對于揭示黃芪總苷在口腔鱗狀細(xì)胞癌治療中的作用具有重要意義。

［1］ 孫燕, 洪婉君, 鄧健, 等. 扶正中藥治療腫瘤患者的10年隨訪觀察. 中西醫(yī)結(jié)合雜志, 1987, 7(12):712-714.

［2］ 謝晶, 夏瑞祥. 黃芪總苷誘導(dǎo)NB4凋亡過程中死亡受體通路分子變化. 安徽醫(yī)科大學(xué)學(xué)報, 2013,48(1):12-15.

［3］ 孫聰聰, 張英姿, 張玥, 等. 黃芪總苷對人子宮內(nèi)膜癌KLE細(xì)胞作用的研究. 中華臨床醫(yī)師雜志(電子版), 2012,6(8): 59-62.

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［5］ 牛艷, 張羽飛. 黃芪總苷對人肺腺癌A549細(xì)胞增殖及凋亡的影響. 牡丹江醫(yī)學(xué)院學(xué)報, 2008, 29(3): 16-18.

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［7］ Marioni G, D'Alessandro E, Bertolin A, et al. Survivin multifaceted activity in head and neck carcinoma: current evidence and future therapeutic challenges. Acta Otolaryngol. 2010,130(1):4-9.

121000 遼寧醫(yī)學(xué)院附屬二院口腔修復(fù)科

李志剛 E-mail：zgli700103@yahoo.com.cn