王秀珍，王園園

(1.紹興文理學(xué)院，浙江 紹興 312000;2.浙江美諾華藥物化學(xué)有限公司 浙江 上虞 312369)

珍珠美容由來(lái)已久，我國(guó)珍珠產(chǎn)量不斷提高，急需新產(chǎn)品開發(fā)和產(chǎn)品升級(jí)。不同珍珠產(chǎn)品對(duì)皮膚抗衰老作用效果尚無(wú)對(duì)比研究，珍珠養(yǎng)顏對(duì)皮膚作用機(jī)理在國(guó)內(nèi)也尚無(wú)研究，其藥用療效無(wú)現(xiàn)代研究方法證實(shí)及量化，對(duì)珍珠的基礎(chǔ)研究不足限制了其產(chǎn)業(yè)的發(fā)展。珍珠養(yǎng)殖是紹興的支柱產(chǎn)業(yè)，利用現(xiàn)代藥劑學(xué)新成果開發(fā)珍珠新產(chǎn)品，有利于產(chǎn)業(yè)升級(jí)。脂質(zhì)體化妝品具有普通化妝品不可比擬的效果[1]，可直接為表皮細(xì)胞提供營(yíng)養(yǎng)和補(bǔ)充細(xì)胞間質(zhì)，其特有性能和優(yōu)異的美容效果來(lái)源于脂質(zhì)體的特有結(jié)構(gòu)。目前，尚無(wú)有關(guān)珍珠類脂質(zhì)體的研究。因此，本試驗(yàn)中根據(jù)近年文獻(xiàn)報(bào)道的脂質(zhì)體制備方面方法，先把珍珠粉酸解使成珍珠液，再用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)－冷凍干燥法制備珍珠脂質(zhì)體，利用電鏡觀察珍珠類脂質(zhì)體形態(tài)并測(cè)定其粒徑分布，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

電子恒溫不銹鋼水浴鍋(HHS－4S，上海南洋儀器有限公司);電子恒速攪拌器(GS12－2，上海醫(yī)械專機(jī)廠);電子精密天平(PB303－N);臺(tái)式高速離心機(jī)(LG10－24A);電子萬(wàn)用爐(浙江省上虞市道墟立明化驗(yàn)儀器廠);攝影生物顯微鏡(XS－212－303);透射電子顯微鏡(JEOL－1011日本電子)。珍珠(直徑3～8 mm，紹興諸暨山下湖產(chǎn));無(wú)水氯化鈣(上?；瘜W(xué)試劑有限公司)、氯化鉀(上?；瘜W(xué)試劑公司)、硝酸鉀(北京紅星化工廠)、硝酸鈉(西安化學(xué)試劑廠)均為化學(xué)純;茚三酮(上海劑劑三廠)為分析純;甘氨酸(上海康達(dá)氨基酸廠)為生化試劑;司盤60 150 g，膽固醇100 g，聚乙二醇 6000(PEG6000)22.5 g，無(wú)水乙醇適量，0.1 mol pH=6.8 的磷酸鹽緩沖溶液 677.5 g。

2 方法與結(jié)果

2.1 珍珠水解液制備[2－3]

取珍珠洗凈烘干，在潔凈環(huán)境中砸開，去除母核，置球磨機(jī)內(nèi)反復(fù)粉碎;精密稱取10 g珍珠粉，置250mL燒杯內(nèi)，加6mol/L鹽酸溶液40 mL，磁力攪拌12 h，抽濾、水洗，抽濾液減壓蒸餾出鹽酸溶液約20mL后，定容至100mL，將再生好的陰離子樹脂裝柱，柱高約33 cm，將上述溶液過陰離子樹脂除去Cl－，再過陽(yáng)離子樹脂除去Ca2+，濃縮定溶至100mL;測(cè)定其pH并用氨基酸自動(dòng)分析儀定性定量分析氨基酸。結(jié)果珍珠水解液的Cl－的質(zhì)量濃度為0.84%。氨基酸自動(dòng)化分析儀分析表明，樣品中含有門冬氨酸、蘇氨酸、絲氨酸、谷氨酸、甘氨酸、丙氨酸、酰氨酸、纈氨酸、脯氨酸等。

2.2 珍珠類脂質(zhì)體制備[4－6]

處方:珍珠水解液 100 mL，司盤 60 150 g，膽固醇 100 g，PEG6000 22.5 g，無(wú)水乙醇適量，0.1mol pH=6.8 的磷酸鹽緩沖溶液 677.5 g。

制備方法:稱取司盤 60 150 g、膽固醇 100 g和 PEG6000 22.5 g等固體輔料于西林瓶中，加無(wú)水乙醇，60℃水浴加熱并電磁攪拌使溶解完全;60～65℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)形成薄膜，加入0.1mol pH=6.8的磷酸鹽緩沖溶液，60℃水浴攪拌15min，再室溫?cái)嚢?min，后取出，邊冷卻邊攪拌，即形成泡囊。加入珍珠水解液30mL，混合均勻，真空凍干24 h，室溫放置，緩慢融化，溶解于500mL磷酸鹽緩沖溶液中，即成脂質(zhì)體分散液。

2.3 珍珠脂質(zhì)體分散液電鏡觀察

取泡囊1mL，加pH=6.8的磷酸鹽緩沖溶液至100mL，搖勻，取1滴點(diǎn)樣于有碳膜的銅網(wǎng)上，用 pH=6.5 的磷鎢酸染色，透射電鏡8～10萬(wàn)倍下觀察類脂質(zhì)體大小、粒徑分布。結(jié)果脂質(zhì)體在電鏡下為多囊脂質(zhì)體，形態(tài)為不規(guī)則圓形，粒徑分布10～500 nm，差異較大，見圖1 A。將泡囊置冰箱5℃冷藏48 h，重新觀察。結(jié)果脂質(zhì)體的形態(tài)較為豐滿，呈規(guī)則圓形，粒徑分布無(wú)明顯變化，見圖1B。

圖1 脂質(zhì)體分散液電鏡下形態(tài)

2.4 納米珍珠粉類脂質(zhì)體包封率測(cè)定[7]

取制備的珍珠脂質(zhì)體溶液2 g，加0.1mol pH=6.8的磷酸鹽緩沖溶液至20 g，混勻，置專用高速離心管中，配對(duì)后放入離心機(jī)中離心，轉(zhuǎn)速為 15 000 r/min，分別離心 20，30，40min，觀察游離珍珠水液與脂質(zhì)體分離情況。結(jié)果30，40 min離心時(shí)無(wú)外觀差異。分離液體，測(cè)出游離珍珠水解液質(zhì)量為1.365 g。計(jì)算包封率(QW)=(W總－W游)/W總×100%，結(jié)果包封率為(2－1.365)/2 ×100%=31.75%。

3 討論

珍珠水解液為澄清液體。在珍珠粉水解過程中，除使用鹽酸外，沒使用任何別的有害物質(zhì)，因此只要將Cl－降低到一定程度，就可保證珍珠水解液的安全使用。本試驗(yàn)中過陰離子樹脂后，珍珠水解液內(nèi)Cl－質(zhì)量濃度為0.84%，pH為6.2。

由于珍珠水解液為混合物而非單組分藥物，所以珍珠水解液與脂質(zhì)體膜相互作用更復(fù)雜，其所形成的脂質(zhì)體在電鏡下觀察為多囊脂質(zhì)體[8]，脂層由許多同心囊泡構(gòu)成，由于珍珠水解液中各成分的油水分配系數(shù)不同，故親脂性強(qiáng)的組分分散于泡囊的脂質(zhì)雙分子層中，親水性強(qiáng)的組分可在泡囊的水相中，在水相與膜內(nèi)部的交界磷脂中包有兩性化合物。因此，電鏡下的脂質(zhì)體形態(tài)為不規(guī)則圓形，粒徑分布10～500 nm，差異較大。

冷凍過程中，由于冰晶的形成使脂質(zhì)體膜破裂，形成冰晶與破碎的脂膜同時(shí)存在的不穩(wěn)定狀態(tài);然后在融化時(shí)暴露的脂膜會(huì)互相融合重新形成脂質(zhì)體。此方法最大的優(yōu)點(diǎn)是不需要加入機(jī)溶劑，而且在2.1項(xiàng)下操作中，經(jīng)過陽(yáng)離子樹脂除去Ca2+時(shí)的同時(shí)除去了其他高強(qiáng)度的離子，所以凍融過程不僅增加了脂質(zhì)體的穩(wěn)定性[5]，而且提高了脂溶性藥物的包封率[6]。這是制備包囊蛋白質(zhì)、多肽微粒制劑的主要方法。本試驗(yàn)電鏡下觀察到，該脂質(zhì)體的形態(tài)為較豐滿、呈規(guī)則圓形，粒徑分布無(wú)明顯變化，穩(wěn)定性增加。

[1]陳懷穎，王詠梅，常 首，等.納米脂質(zhì)體化妝品的質(zhì)量研究[J].中國(guó)化妝品，2008(6):92－94.

[2]劉其城，唐良榮，毛小輝，等.淡水珍珠水解液的制備研究[J].食品與機(jī)械，1999，74(6):21 －22.

[3]吳紅棉，蔣志紅，雷曉凌.傳統(tǒng)“珍珠水解液”的工藝改進(jìn)研究[J].湛江水產(chǎn)學(xué)院學(xué)報(bào)，1994，14(2):57－60.

[4]孫 蕓，許漢林.中藥脂質(zhì)體制備的研究進(jìn)展[J].中華醫(yī)學(xué)研究雜志，2004，4(7):619－621.

[5]敬思群，迪里努爾·阿布都熱合曼，米熱班古·本太力甫.高寒香菊花黃酮固體脂質(zhì)體制備工藝優(yōu)化[J].中國(guó)釀造，2011(11):50－54.

[6]李志平，梁 慶，劉文彬，等.哈西奈德脂質(zhì)體制備方法的選擇及其含量與包封率的測(cè)定[J].今日藥學(xué)，2011，21(6):332－334.

[7]李唐棣，郝麗梅，梅興國(guó).脂質(zhì)體包封率的研究進(jìn)展[J].國(guó)外醫(yī)學(xué):藥學(xué)分冊(cè)，2006，33(3):224 －227.

[8]王曉梅，唐 星，何梅冰.多囊脂質(zhì)體的研究進(jìn)展[J].中國(guó)新藥雜志，2006，15(15):1 243 －1 246.