羅永惠 任彩芬

（1.貴州德良方藥業(yè)股份有限公司，貴州 興義 562400；2.貴州大成藥業(yè)有限公司，貴州 龍里 551200）

柏花草膠囊批準文號為：國藥準字Z20110015，由黃柏、靈芝、仙鶴草、紅花、百合共 5味中藥組成，原為我省苗族民間長期使用確有療效的驗方。有清熱止血，補氣養(yǎng)陰的功效，用于治療痔瘡癥見肛門腫痛，便時滴血，伴見口干口苦，大便干結(jié)、或伴見頭暈?zāi)垦！⑺闹珶o力、面色無華、失眠多夢等癥。為提高質(zhì)量標(biāo)準，經(jīng)研究，建立了該制劑中君藥黃柏有效組分鹽酸小堿高效液相色譜（HPLC）的含量測定方法，極道如下。

1 儀器與試藥

島津LC-IATvp型高效液相色譜儀（SPD-10A紫外檢測器），咸馬龍色譜數(shù)據(jù)工作站；島津UV-250IPC紫外 -可見分光光度計；梅特勒-托利多GF-2000型、AG245型電子天平。柏花草膠囊（貴州德良方藥業(yè)股份有限公司），批號為 20090501、20090603、20090605；甲醇為色譜試劑，水為重蒸餾水，其他試劑均為分析純；鹽酸小檗堿（中國藥品生物制品檢定所，供含量測定用，批號為110751-200810）。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性試驗：色譜柱：SUPELCOSILTM LC-C18（5μm，250×4.6i.d.mm）。

流動相：乙腈-四氫呋喃 -0.05mol·L-1磷酸二氫鉀（含 0.07%三乙胺，磷酸調(diào) PH為 3）（140∶40∶820）；流速：1.2ml/min；柱溫：30℃；檢測波長：430nm；靈敏度0.5；進樣量 10μl。

在此色譜條件下，理論塔板數(shù)以鹽酸小檗堿計應(yīng)不低于4000，陰性對照樣品溶液在與對照品溶液和供試品溶液相同保留時間處未顯色譜峰，故無干擾（圖1）。

2.2 溶液制備：精密稱取鹽酸小檗堿對照品15.51mg（含量 98.14%）,置50mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，得每1mL含0.305mg的對照品溶液。取裝量差異項下的內(nèi)容物，混合均勻，取約0.4g，精密稱定，置100mL容量瓶中，精密加入甲醇-水-鹽酸（80∶19∶1）50mL，密塞，于超聲波中超聲提取 10min，搖勻，靜置，取上清液用0.45μm濾膜過濾，即得供試品溶液。取除黃柏外的其余處方量藥材飲片，按處方比例及工藝制備不含黃柏的陰性樣品，同供試品溶液制備方法制備陰性對照品溶液。

2.3 方法學(xué)考察：標(biāo)準曲線的繪制：精密吸取對照品溶液 2、4、6、8、10μL，分別注入液相色譜儀，記錄色譜以峰面積（μV·s）對質(zhì)量（μg）進行線性回歸計算（圖7-3）， 得 回 歸 線 性 方 程 為 ：C （μg）=6.9173×10-6A+9.186×10-3，τ=0.9999，擬和為過坐標(biāo)原點的直線方程為 C（μg）=6.948×10-6A.將一供試品溶液進樣分析所得峰面積分別代入上兩式方程計算，結(jié)果的相對偏差為0.055%，由此可視截距近似為零，故正文采用外標(biāo)一點法計算含量。線性范圍為0.610～3.050μg。

對照品

樣品

陰性

溶劑

精密度試驗：取一供試品，按藥材質(zhì)量標(biāo)準草案中供試液的制備方法制備供試液，重復(fù)進樣5次，依法測定計算。峰面積值的RSD為0.47%（n=5），表明儀器精密度良好。

重現(xiàn)性試驗：取同一批號的樣品（批號為20090501）5份，精密稱定同法制備5份供試液，分別進樣，測定峰面積，結(jié)果鹽酸小檗堿平均含量為3.53%，RSD為0.63%.表明方法重現(xiàn)性較好。

穩(wěn)定性試驗：取同一份供試品溶液，分別在制備后0、2、4、6、12、24h進行測定峰面積。結(jié)果表明供試品溶液在 24h內(nèi)測定穩(wěn)定性良好，RSD為 0.11%（n=5）。

加樣回收率試驗：稱取已測定含量為4.72%的樣品（批號為 20090601）細粉 150mg,加入不同量的鹽酸小檗堿對照品，同法制備6份供試液，分別進樣，測定峰面積，結(jié)果鹽酸小檗堿的平均回收率為99.16%，RSD為0.11%，說明具有較好的加樣回收率。

2.4 樣品含量測定：精密吸取對照品溶液和供試品溶液各10μl，按上述色譜條件測定十批樣品的鹽酸小檗堿含量結(jié)果，其結(jié)果分別為21.55、21.20、16.80、16.20、16.10、18.20、17.90、24.10、23.50、23.80mg/粒（n=2）.

3 討 論

根據(jù)鹽酸小檗堿紫外掃描結(jié)果，鹽酸小檗堿在228.6、264.6、348.8、429.4nm處均有顯著吸收峰，實驗結(jié)果表明，在430nm下檢測，圖譜分離較好，陰性對照無干擾，故選定430nm為制劑中鹽酸小檗堿的檢測波長。用乙腈-四氫呋喃-0.05mol/L磷酸二氫鉀（含0.07%三乙胺，磷酸調(diào) pH為 3）（140∶40∶820）；乙腈-0.1%磷酸溶液（每100ml加十二烷基磺酸鈉0.1g）（50∶50）等流動相試驗，結(jié)果以文中所用流動相所得圖譜峰形，分離度較好。曾以流速為0.8、1.0、1.2ml/min進行試驗，結(jié)果流速為1.0ml/min時峰形、壓力最好。根據(jù)10批樣品測定結(jié)果及考慮到黃柏藥材的產(chǎn)地、采收季節(jié)、制劑等因素，按70%計算，可考慮柏花草膠囊中鹽酸小檗堿的含量限度為不得少于10mg/粒。

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（一部）[S].北京：化學(xué)工業(yè)出版社,2005,10.

[2]張緒嶠.藥物制劑設(shè)備與車間工藝設(shè)計[M].北京：中國醫(yī)藥科技出版社,2000,8.