紅 梅 陳秋紅 劉有菊 王志瑾

（1.青海省藏醫(yī)藥研究院藥物研究所， 青海 西寧 810003；2.青海高原醫(yī)學科學研究所中心實驗室，青海 西寧810012）

藏藥安神丸由檳榔、沉香、丁香、肉豆蔻、木香、廣棗等15味藏藥組成，用于養(yǎng)心安神，治療失眠、神經(jīng)衰弱的藏藥精品，是西藏醫(yī)保品種。先后被列入《青海省藏藥標準》[1]和《衛(wèi)生部部頒藥品標準》[2]。在治療神經(jīng)官能癥有獨特的療效[3]。為觀察藏藥安神丸的安全性，進行了為期14天的急性毒性實驗和3個月的長期毒性實驗研究，提供科學的實驗依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 藥品與試劑：安神丸由金訶藏藥藥業(yè)生產(chǎn)部提供，批號：20110303，成年人常規(guī)用量 0.03g/（kg.d）實驗前加蒸餾水制成一定濃度的混懸液，置冰箱備用。

1.2 實驗動物：KM種小鼠、體質(zhì)量 18～22g，清潔級，均由青海省實驗動物中心提供，合格證號：青醫(yī)動字第零零一號，SD大鼠體質(zhì)量90～110g，由軍事醫(yī)學科學院提供，合格證號：1100007611。雌雄各半，分籠飼養(yǎng)，室溫（22±2）℃,溫度 40%～60%，人工控制光照晝夜各 12h，自由飲水。

1.3 儀器：全自動生化分析儀 Olympas-au640（日本）、血細胞分析儀 KX-21N（日本）、電子天平、離心機、石蠟切片機、顯微鏡（北航醫(yī)學圖象分析管理系統(tǒng)）等。

1.4 統(tǒng)計學分析：各項指標均用組間比較進行顯著性t檢驗，所有劑量資料以均數(shù)±標準差表示。

1.5 實驗方法

1.5.1 急性毒性實驗[4]：經(jīng)預實驗，由于受藥物濃度以及給藥體積的限制，無法測出半數(shù)致死量（LD50），只能測定其1日內(nèi)最大耐受量。

表1 給藥、停藥期間大鼠體質(zhì)量變化情況（ ± s）

表1 給藥、停藥期間大鼠體質(zhì)量變化情況（ ± s）

與空白對照組比較，P>0.05

日期（w） 空白對照組 安神丸低 安神丸中 安神丸高給藥前體質(zhì)量第一第二第三第四第五第六第七第八第九第十第十一第十二第十三停藥第一停藥第二117.40±8.06 152.91±10.46 186.68±16.69 213.75±27.97 240.78±38.89 261.64±47.42 279.80±58.15 301.70±67.65 307.28±70.68 323.22±78.61 320.79±78.98 325.72±85.95 338.86±86.16 340.50±88.97 341.42±93.35 341.74±89.50 116.01±21.36 148.17±9.39 193.29±16.11 217.96±23.43 241.43±35.66 262.06±41.99 278.69±52.14 291.83±54.07 294.31±58.85 311.73±67.60 318.53±69.15 320.50±75.56 340.29±80.64 337.95±76.24 337.55±79.79 341.74±78.55 113.58±21.94 146.96±12.27 192.23±23.27 217.59±33.73 242.62±43.40 262.26±51.51 279.05±61.12 298.71±68.49 297.08±68.64 317.00±75.22 334.89±112.13 322.39±83.20 340.67±86.47 340.29±84.22 345.80±93.04 344.17±87.66 108.87±34.05 149.24±11.67 193.18±23.29 215.91±30.66 238.72±41.12 260.95±51.18 284.44±62.30 290.75±70.44 297.33±70.03 310.87±77.36 309.23±71.72 310.98±77.86 325.23±80.14 324.09±74.62 329.38±80.06 333.55±82.58

表2 給藥 45d、90d及停藥 15d大鼠臟器系數(shù)的變化（ ±s，n=10，mg/100g）

表2 給藥 45d、90d及停藥 15d大鼠臟器系數(shù)的變化（ ±s，n=10，mg/100g）

與空白對照組比較，P>0.05

項目 日期（d） 空白對照組 安神丸低 安神丸中 安神丸高心肝脾肺腎腎上腺大腦給藥45給藥90停藥15給藥45給藥90停藥15給藥45給藥90停藥15給藥45給藥90停藥15給藥45給藥90停藥15給藥45給藥90停藥15給藥45給藥90停藥15 294.69±21.64 282.76±27.83 280.49±60.96 2628.70±257.03 2555.42±282.84 2592.44±427.26 176.79±24.38 169.00±30.29 182.97±31.55 504.13±46.09 502.30±54.57 485.23±103.57 689.45±44.44 582.94±51.01 594.17±112.53 17.49±5.08 16.39±7.39 13.03±6.24 672.4±135.52 620.86±147.03 606.01±163.25 285.00±80.05 263.88±20.87 265.91±40.30 3031.27±1028.94 2507.27±242.54 2959.37±492.55 195.95±64.33 179.88±27.72 166.30±24.79 546.86±174.14 475.43±77.92 624.93±399.49 655.95±211.09 582.60±37.04 534.08±69.83 19.71±5.74 16.00±7.29 16.15±7.23 697.35±153.08 627.63±149.22 610.33±142.55 303.73±64.83 275.22±26.74 276.40±28.26 3035.45±592.02 2541.98±148.42 2666.62±308.94 194.66±53.47 169.81±23.50 197.80±99.92 505.88±74.90 487.33±65.46 423.17±161.15 667.06±89.96 593.38±39.59 695.83±289.26 19.72±9.42 16.25±5.58 13.96±4.35 697.72±165.34 629.34±138.77 593.72±150.04 288.34±28.64 278.96±20.51 317.47±118.29 2930.81±308.94 2655.51±262.38 2760.41±230.88 192.34±46.35 189.03±30.57 151.65±62.56 475.51±51.87 485.85±56.53 438.98±108.27 677.90±52.59 624.86±50.58 618.49±71.85 19.30±5.41 15.54±6.61 16.05±5.55 691.65±156.59 654.23±143.34 651.72±145.03

表3 給藥 45d、、90d及停藥 15d大鼠的血液生化指標（± s，n=10）

表3 給藥 45d、、90d及停藥 15d大鼠的血液生化指標（± s，n=10）

與空白對照組比較，P>0.05

空白對照組項目 日期（d） 安神丸低 安神丸中 安神丸高ALT（U/L）AST（U/L）T-BIL（μmol/L）TP（g/L）A/G UA（μmol/L）ALB（g/L）BUN（mmol/L）GLU（mmol/L）CREA(umol/l)給藥45給藥90停藥15給藥45給藥90停藥15給藥45給藥90停藥15給藥45給藥90停藥15給藥45給藥90停藥15給藥45給藥90停藥15給藥45給藥90停藥15給藥45給藥90停藥15給藥45給藥90停藥15給藥45給藥90停藥15 30.89±4.28 34.10±5.24 33.70±4.27 133.67±30.68 162.00±22.14 141.90±45.93 1.01±0.62 1.06±0.48 1.13±0.47 58.69±4.77 56.54±6.50 55.62±4.11 0.84±0.09 0.78±0.11 0.83±0.16 49.00±15.06 52.30±8.82 52.80±13.61 26.92±2.99 24.79±3.49 25.17±3.10 6.01±0.67 7.62±0.99 5.94±0.73 3.57±1.57 2.97±0.44 4.28±0.78 61.56±6.50 51.40±6.60 63.20±5.33 29.70±6.62 35.90±6.82 36.10±6.76 136.80±41.52 156.31±20.41 148.30±27.89 0.77±0.32 0.99±0.49 1.08±0.42 55.93±3.32 57.09±2.81 57.68±5.06 0.83±0.07 0.77±0.07 0.86±0.10 59.30±39.22 44.80±11.79 53.70±11.21 25.08±1.51 24.19±2.48 26.55±3.49 6.14±1.27 7.34±0.84 5.75±0.81 4.25±0.99 2.68±0.65 5.08±0.96 67.70±12.88 48.70±4.55 59.34±5.13 31.90±6.62 32.80±4.02 34.90±6.19 125.70±21.15 149.80±15.34 139.10±34.39 0.76±0.37 0.93±0.46 1.37±0.53 54.41±4.71 58.19±4.66 56.46±4.33 0.85±0.07 0.72±0.09 0.83±0.13 41.30±10.54 54.40±33.99 64.10±30.87 25.13±2.81 24.47±2.77 25.68±3.74 6.31±0.59 7.01±1.11 5.53±0.96 3.98±0.81 2.70±0.59 4.76±0.39 65.70±7.79 47.40±3.03 62.00±7.76 31.60±6.31 39.20±8.88 34.90±6.77 138.40±41.00 164.40±26.98 152.10±43.83 0.66±0.36 1.15±0.62 1.45±0.16 54.04±2.32 57.27±3.41 57.86±4.92 0.84±0.05 0.74±0.08 0.81±0.12 45.10±9.45 51.80±46.35 54.00±9.33 24.88±1.35 24.90±2.61 25.72±2.09 5.62±0.65 7.59±1.01 6.22±0.99 3.63±1.07 2.61±0.74 4.62±0.37 60.50±7.71 48.20±3.46 65.24±9.13

表4 給藥 45d、、90d及停藥 15d大鼠的血象指標（± s ，n=10）

表4 給藥 45d、、90d及停藥 15d大鼠的血象指標（± s ，n=10）

與空白對照組比較，P>0.05

安神丸低 安神丸中空白對照組安神丸高項目 日期（d）WBC（109/L）RBC（1012/L）HGB（g/L）HCT（%）MXD（%）NEUT（%）LYM（%）MCHC（g/L）MCH（pg）Plt（109/L）給藥45給藥90停藥15給藥45給藥90停藥15給藥45給藥90停藥15給藥45給藥90停藥15給藥45給藥90停藥15給藥45給藥90停藥15給藥45給藥90停藥15給藥45給藥90停藥15給藥45給藥90停藥15給藥45給藥90停藥15 3.27±1.34 3.39±1.84 4.66±2.30 8.29±0.73 8.22±0.84 8.61±0.86 166.67±10.81 151.50±10.36 154.60±12.00 48.63±2.44 46.38±2.73 47.99±3.43 3.58±1.40 3.52±2.11 3.91±0.82 15.54±6.47 11.54±7.87 10.74±4.53 72.88±25.28 78.78±5.27 82.06±3.02 331.25±6.42 326.70±8.38 322.00±5.60 20.17±0.69 18.52±0.71 18.00±0.58 865.24±88.07 786.90±96.57 881.20±102.67 4.27±1.55 3.88±1.87 4.38±4.38 8.02±0.63 8.67±0.86 8.63±0.61 155.50±11.33 160.00±8.37 157.90±9.33 47.65±3.95 47.85±2.58 48.00±2.47 4.04±1.54 4.93±3.89 3.11±1.40 16.23±5.60 13.47±6.55 11.24±4.41 83.34±2.93 77.20±4.96 83.18±4.76 326.50±8.46 328.43±6.00 328.80±6.43 19.75±0.34 18.57±1.09 18.32±0.45 866.2±170.99 824.80±142.94 815.50±108.73 3.41±1.65 3.64±1.93 3.53±1.70 7.89±0.53 0.70±0.67 8.88±0.80 159.90±11.92 155.50±6.20 162.10±10.06 47.93±3.48 47.05±1.34 48.98±2.62 4.09±2.07 4.02±1.07 3.13±1.64 19.98±7.13 12.35±3.79 15.46±10.05 73.21±6.56 77.91±3.95 76.16±7.21 333.60±5.13 330.50±4.74 324.15±5.82 20.26±0.53 18.09±0.79 18.32±0.73 862.80±71.73 845.61±113.27 906.60±105.72 3.61±1.86 4.11±1.98 4.20±2.55 7.84±0.49 8.29±0.70 8.33±0.81 159.80±10.00 152.60±11.34 151.50±11.69 47.67±2.46 46.76±3.39 46.98±2.86 3.04±1.84 3.33±1.15 5.36±5.11 15.14±7.29 11.32±5.12 11.49±6.30 78.63±7.18 78.78±3.03 78.26±7.35 335.10±6.97 326.40±7.41 322.40±6.57 20.38±0.56 18.43±0.44 18.25±0.51 853.00±81.79 827.40±75.54 880.80±123.38

取健康昆明種小白鼠60只，雌雄各半，隨機分為2組，分別為空白組和安神丸組。選用擬臨床實驗的給藥途徑—灌胃（ig），以小鼠能夠耐受的最大濃度0.35g/ml、最大體積0.5ml/只的藥量24h內(nèi)連續(xù)4次給予小鼠，空白對照組給痛體積的蒸餾水，實驗期間觀察動物行為、外觀、毛色、尿色、糞便、活動情況、飲水和飲食量及檢測給藥前和給藥后2周體質(zhì)量等；抽取空白組和給藥組雌雄各4只，處死、解剖，肉眼觀察各臟器有無明顯病變，取肝、腎臟器，進行常規(guī)病理學檢查。

1.5.2 長期毒性實驗[4]：健康高白鼠 128只，雌雄各半，隨機分為4組，分別為空白組、安神丸低劑量組（0.75g/kg）、安神丸中劑量組（1.5g/kg）和安神丸高劑量組（3g/kg）（該劑量相當于臨床擬日用藥量的 25、50、100倍）組，每組32只。ig給藥，每天1次，空白對照組給同體積的蒸餾水，共 90d，實驗期間觀察動物行為、外觀、毛色、尿色、糞便、活動情況、飲水和飲食量及檢測每周體質(zhì)量；在給藥45d、90d和停藥 15d每組各處死 10只，腹主動脈采血測定血液學指標、血液生化指標，分別取心、肝、脾、肺、腎、腎上腺、大腦等臟器肉眼觀察有無異常并稱重，隨后于各劑量組抽取3～4只大鼠所取臟器（雌雄各半），進行常規(guī)病理組織學檢查。

2 實驗結果

2.1 小鼠最大耐受量：24h給藥4次藏成藥安神丸混懸液，觀察第四次給藥時，發(fā)現(xiàn)雄性3只小鼠有輕微豎毛，精神不振。給藥總劑量為35g/kg，相當于臨床常規(guī)用藥劑量的1167倍，藥后觀察 14d，小鼠外觀、行為、體質(zhì)量增長等均和空白組無明顯差異，未出現(xiàn)小鼠死亡情況，各組小鼠解剖經(jīng)肉眼觀察，給藥組與空白組比較小鼠心、肝、脾、肺、腎、腎上腺、腸等臟器亦無明顯異常，對抽取的肝、腎組織的病理檢查亦未見明顯的病理改變。

2.2 大鼠長期毒性實驗

2.2.1 安神丸對長毒大鼠行為、外觀等影響：通過90d的實驗觀察表明，安神丸各組劑量組對大鼠的毛色、尿色、糞便、活動情況、外觀、飲水和飲食量均無明顯影響，和空白對照組比較無明顯差異。

2.2.2 安神丸對長毒大鼠體質(zhì)量的影響：實驗結果見表1。結果表明 ig安神丸 3 g/kg、1.5 g/kg及 0.75g/kg對大鼠的體質(zhì)量均未見明顯的影響，和空白對照組比較無顯著性差異（P>0.05）。

2.2.3 安神丸對長毒大鼠臟器比重的影響：實驗結果見表2。結果表明：安神丸給藥 90d后高、中、低各劑量組臟器指標均未見明顯改變，和空白對照組比較無顯著性差異（P>0.05）。

2.2.4 安神丸對長毒大鼠血液生化指標、血液學指標的影響：結果表明，安神丸給藥 45、90、停藥 15d后低、中、高各劑量組血液生化、血象指標均未見明顯改變，和空白對照組比較無顯著性差異（P>0.05）。

2.2.5 安神丸對長毒大鼠主要器官組織形態(tài)學的影響：藏藥安神丸給藥90d并停藥15d，麻醉采血后，解剖取各組大鼠心、肝、脾、肺、腎、腎上腺、大腦等主要臟器，首先肉眼觀察色澤、形態(tài)、體積與空白組比較無明顯異常，然后每組隨機取3～4只大鼠臟器同一位置，4%的甲醛溶液固定，進行常規(guī)病理學檢查。結果表明：各給藥組臟器光鏡下觀察形態(tài)均無異常，與空白組比較未見藥物性病變。

3 討 論

本文觀察了藏藥安神丸最大耐受量為35g/kg，是臨床劑量的 1167倍，連續(xù)觀察 14d，小鼠外觀、行為、體質(zhì)量增長等均和空白組無明顯差異，未出現(xiàn)小鼠死亡情況，各組小鼠解剖經(jīng)肉眼觀察，給藥組小鼠心、肝、脾、肺、腎、腎上腺、腸等臟器亦無明顯改變，取肝、腎光鏡檢查和空白組相比無明顯差異。

長期毒性實驗，以藏藥安神丸每天灌胃連續(xù)90天，大鼠生長發(fā)育良好，無死亡，實驗動物外觀、行為活動、體質(zhì)量增長、主要臟器系數(shù)、血象、血液生化等指標與空白對照組比較均無顯著性差異。對心、肝、脾、肺、腎、腎上腺等主要臟器組織結構肉眼及光鏡檢查亦無異常發(fā)現(xiàn)。

以上毒性實驗研究結果提示，大鼠在0.75～3g/(kg.d)連續(xù)灌胃給藥 3個w，未發(fā)現(xiàn)藥物所致的毒副反應，所以在臨床用藥周期內(nèi)是安全的。

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[2]中華人民共和國衛(wèi)生部藥典委員會.中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標準藏藥[S].1995:316.

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