王團(tuán)美,劉曉亮
(長(zhǎng)沙市中心醫(yī)院,湖南 長(zhǎng)沙 410000)
新生兒缺氧缺血性腦?。℉ypoxic Ischemic Encephalopathy HIE)是指新生兒圍產(chǎn)期窒息引起的部分或完全缺氧、腦血流量減少或暫停而導(dǎo)致的腦部損傷[1],是導(dǎo)致新生兒死亡和致殘的重要因素[2]。HIE的發(fā)病機(jī)制十分復(fù)雜,近年來(lái),免疫系統(tǒng)在HIE 發(fā)病中的作用日益受到重視[3]。國(guó)內(nèi)外研究表明[4-5],腦缺血再灌注后,腦組織局部過(guò)度炎癥反應(yīng)是造成腦再灌注損傷的重要原因,而細(xì)胞因子在這個(gè)病理過(guò)程中起著非常重要的作用,因此,本文對(duì)白細(xì)胞介素1β(IL-1β)、白細(xì)胞介素6(IL-6)、白細(xì)胞介素8(IL-8)、白細(xì)胞介素10(IL-10)和腫瘤壞死因子α(TNF-α)這5 種致炎性細(xì)胞因子在HIE 患兒和正常兒童血清中含量的變化及其臨床意義進(jìn)行了研究,對(duì)加強(qiáng)HIE 病程監(jiān)測(cè),改善HIE的預(yù)后具有指導(dǎo)意義。
HIE組:2007年1月~2011年12月我院新生兒病房收治的HIE 患兒112例,均符合新生兒缺氧缺血性腦病診斷標(biāo)準(zhǔn)[6]。其中,放棄治療5例,轉(zhuǎn)院治療9例,共調(diào)查患兒98例。
正常對(duì)照組:隨機(jī)抽取同期正常分娩的新生兒100例,無(wú)宮內(nèi)發(fā)育遲緩,宮內(nèi)及生后無(wú)窒息,并排除宮內(nèi)感染,生后7d 內(nèi)無(wú)合并癥,母親孕期體健,分娩前無(wú)明顯感染史,無(wú)血制品及免疫抑制或增強(qiáng)劑使用史。2組新生兒在性別、胎齡、出生體質(zhì)量方面均無(wú)顯著性差異。
1.2.1 標(biāo)本采集
HIE組和正常對(duì)照組新生兒均于出生后24h內(nèi)(急性期)和出生后第7天(恢復(fù)期)以無(wú)菌操作采集外周靜脈血2mL,用低溫離心機(jī)(4 ℃、3000r/min)離心10min,收集上層血清,并置于-40℃冰箱內(nèi)保存待檢。
1.2.2 檢測(cè)方法
用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA) 雙抗體夾心法檢測(cè)2組新生兒出生后24h 內(nèi)和出生后第7天的血清IL-1β、IL-6、IL-8、IL-10和TNF-α 水平,酶標(biāo)檢測(cè)試劑盒由Rapul Bio Lab Calabasas,California,USA 公司提供,ELISA 檢測(cè)分析儀為華東電子管廠產(chǎn)品。
1.2.3 HIE 臨床分度
根據(jù)第7 版兒科學(xué)標(biāo)準(zhǔn)[1],將HIE 分為輕度、中度和重度三種,輕度患兒興奮、抑制交替,肌張力正?;蛏愿?,擁抱反射活躍,吸吮反射正常,瞳孔正常或擴(kuò)大,EKG 正常,可有肌陣攣,無(wú)中樞性呼吸衰竭;中度患兒嗜睡,肌張力減低,擁抱反射減弱,吸吮反射減弱,瞳孔??s小,EKG 呈低電壓,常伴有驚厥或中樞性呼吸衰竭;重度患兒出現(xiàn)昏迷,肌松軟,擁抱反射消失,吸吮反射消失,瞳孔不對(duì)稱或擴(kuò)大,EKG表現(xiàn)為爆發(fā)抑制和等電線,驚厥可呈持續(xù)狀態(tài),中樞性呼吸衰竭明顯。
1.2.4 資料處理
實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以mean±SD表示,所有數(shù)據(jù)均采用Epidata 雙核雙錄法,并導(dǎo)入SPSS17.0 進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。統(tǒng)計(jì)方法包括:統(tǒng)計(jì)描述、t 檢驗(yàn)和方差分析。如無(wú)特殊說(shuō)明,顯著性水準(zhǔn)=0.05,所有的P值均表示雙側(cè)概率。
將HIE 分為輕、中和重三度,其中,HIE 輕度患兒42例,中度患兒31例,重度患兒25例,比較急性期不同臨床分度的HIE 患兒和正常新生兒血清中IL-1β、IL-6、IL-8、IL-10、TNF-α 水 平的 差異,具體見(jiàn)表1 所示。經(jīng)方差分析,不同臨床分度的HIE 患兒和正常新生兒血清中IL-1β、IL-6、IL-8、IL-10、TNF-α 水平不完全相同(P<0.05)。
對(duì)不同臨床分度的HIE 患兒和正常新生兒5種血清細(xì)胞因子水平進(jìn)行LSD 兩兩比較,可知,輕、中、重三度HIE 患兒和正常新生兒血清IL-1β、IL-6、IL-8、IL-10、TNF-α 水平兩兩之間均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05),HIE組患兒血清IL-1β、IL-6、IL-8、IL-10和TNF-α 水平均高于正常新生兒,且隨著HIE 病情的加重,IL-1β、IL-6、IL-8、IL-10、TNF-α5 種細(xì)胞因子水平均有顯著性上升 (P<0.05)。
表1 HIE和對(duì)照組急性期血清細(xì)胞因子水平比較
比較恢復(fù)期HIE組和正常新生兒血清IL-1β、IL-6、IL-8、IL-10和TNF-α 水平,具體見(jiàn)2 所示,經(jīng)方差分析,在恢復(fù)期,HIE組患兒血清IL-1β、IL-6、IL-8、IL-10、TNF-α 水平與正常新生兒也不完全相同(P<0.05)。經(jīng)LSD 兩兩比較法可知,恢復(fù)期,HIE 輕度患兒和正常新生兒的IL-6、IL-8、IL-10、TNF-α 水平無(wú)顯著性差異,HIE中度患兒和正常新生兒的IL-8、IL-10 無(wú)顯著性差異(P>0.05),HIE 輕度患兒和中度患兒IL-1β、IL-8、IL-10 無(wú)顯著性差異,HIE中度患兒和重度患兒TNF-α 無(wú)顯著性差異。
表2 HIE和對(duì)照組恢復(fù)期血清細(xì)胞因子水平比較
采用配對(duì)t 檢驗(yàn)的方法,比較急性期和恢復(fù)期HIE 患兒的血清細(xì)胞因子水平,具體見(jiàn)表3 所示,可知,急性期IL-1β、IL-6、IL-8、IL-10和TNF-α5種血清細(xì)胞因子水平都顯著高于恢復(fù)期(P<0.05)。
表3 急性期與恢復(fù)期HIE 血清細(xì)胞因子水平比較
腦缺血再灌注后,腦組織局部過(guò)度炎性反應(yīng)是導(dǎo)致新生兒HIE 腦損傷的主要機(jī)制之一[7~8]。IL-1β、IL-6、IL-8、IL-10和TNF-α 是炎性反應(yīng)中較為主要的細(xì)胞因子,臨床研究發(fā)現(xiàn)[9~17],這幾種細(xì)胞因子相互作用,在新生兒腦缺血-再灌注損傷過(guò)程中具有重要的意義。
本研究顯示,急性期HIE組患兒血清IL-1β水平高于正常新生兒,且隨著HIE 病情的加重,IL-1β 水平有顯著性上升,與王建、Aly 等[9~10]報(bào)道一致,經(jīng)治療后,恢復(fù)期HIE 患兒IL-1β 水平顯著降低,中度患兒IL-1β 水平和輕度患兒已無(wú)顯著性差異,IL-1β 水平的降低,在新生兒HIE 恢復(fù)過(guò)程中發(fā)揮了重要的作用;急性期HIE組患兒血清IL-6水平高于正常新生兒,且隨著HIE 病情的加重,IL-6 水平有顯著性上升,恢復(fù)期HIE 患兒IL-6 水平顯著降低,輕度患兒IL-6 水平已達(dá)到正常新生兒水平,與劉文東、Hasan T 等[11~12]報(bào)道一致;急性期HIE組患兒血清IL-8 水平高于正常新生兒,且隨著HIE 病情的加重,IL-8 水平有顯著性上升,與Berger RP、賈菲菲等[13~14]研究結(jié)果一致,經(jīng)治療后,恢復(fù)期HIE 患兒IL-8 水平顯著降低,HIE 輕度患兒和中度患兒IL-8 已達(dá)正常新生兒水平,因此,IL-8的動(dòng)態(tài)變化可作為HIE 治療效果的監(jiān)測(cè)及預(yù)后的評(píng)估;本研究顯示,急性期HIE組患兒血清IL-10 水平高于正常新生兒,且隨著HIE 病情的加重,IL-10 水平有顯著性上升,恢復(fù)期HIE 患兒IL-10 水平顯著降低,HIE 輕度患兒和中度患兒IL-10已達(dá)正常新生兒水平;急性期HIE組患兒血清TNF-α 水平高于正常新生兒,且隨著HIE 病情的加重,TNF-α 水平有顯著性上升,恢復(fù)期,TNF-α水平顯著下降,HIE 輕度患兒TNF-α 已達(dá)正常新生兒水平,HIE中度患兒和重度患兒TNF-α 無(wú)顯著性差異,隨著腦缺血缺氧損傷的逐漸好轉(zhuǎn),血清TNF-α 也逐漸恢復(fù)正常。
本研究說(shuō)明,血清細(xì)胞因子IL-1β、IL-6、IL-8、IL-10、TNF-α 均參與了新生兒HIE 腦損傷的過(guò)程,隨著HIE 病情的加重,細(xì)胞因子水平顯著上升,在HIE 腦損傷好轉(zhuǎn)時(shí),細(xì)胞因子水平逐漸下降。其中,IL-1β 可誘導(dǎo)多種損傷性細(xì)胞因子的合成,促進(jìn)過(guò)度炎性反應(yīng),并促進(jìn)自由基的釋放及增強(qiáng)興奮性氨基酸的毒性作用,加重腦缺血-再灌注損傷的發(fā)生[16];IL-6 可抑制TNF-α和IL-1β的合成,對(duì)抗興奮性氨基酸的神經(jīng)毒性,促進(jìn)促腎上腺皮質(zhì)激素釋放激素的釋放以及抑制免疫反應(yīng),對(duì)中樞神經(jīng)細(xì)胞起到保護(hù)作用;IL-8 具有強(qiáng)烈的趨化作用,通過(guò)吸引中性粒細(xì)胞至病變部位促進(jìn)血管內(nèi)血栓的形成,增強(qiáng)IL-1β、TNF-α的神經(jīng)毒性作用,從而介導(dǎo)腦缺血-再灌注損傷的發(fā)生;IL-10 可抑制主要炎性因子TNF-α、IL-1β的產(chǎn)生,發(fā)揮廣泛的抗炎作用,使機(jī)體內(nèi)源性抗炎機(jī)制加強(qiáng),有利于炎癥的消除,對(duì)腦缺血-再灌注損傷具有保護(hù)作用[15];TNFα 在新生兒HIE中具有雙重作用[16~17],首先它可通過(guò)抗氧化途徑抵抗氧自由基的損傷,刺激星形細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、膠質(zhì)細(xì)胞表達(dá)合成神經(jīng)生長(zhǎng)因子,從而促進(jìn)神經(jīng)細(xì)胞的修復(fù),其次,它還可以損傷血管內(nèi)皮細(xì)胞,開(kāi)放和破壞血腦屏障,促進(jìn)和誘發(fā)IL-1β、IL-8 等細(xì)胞因子的合成和釋放,促進(jìn)過(guò)度炎性反應(yīng),誘導(dǎo)腦細(xì)胞調(diào)亡,加重腦缺血-再灌注損傷。
綜上所述,IL-1β、IL-6、IL-8、IL-10、TNF-α五種血清細(xì)胞因子在新生兒HIE 腦損傷中發(fā)揮了重要的作用,其動(dòng)態(tài)變化可作為HIE 病程監(jiān)測(cè)的重要指標(biāo),加強(qiáng)對(duì)血清細(xì)胞因子的監(jiān)測(cè)對(duì)減少腦缺血-再灌注損傷、改善HIE的預(yù)后具有重要的意義。
[1]沈曉明,王衛(wèi)平,主編.兒科學(xué)[M].第7 版.北京:人民衛(wèi)生出版社,2008,102.
[2]薛碧萍.新生兒缺氧缺血性腦病治療進(jìn)展[J].中國(guó)婦幼保健,2011,06:2571-2572.
[3]Distefano G,PraticòAD.Actualities on molecular pathogenesis and repairing processes of cerebral damage in perinatal hypoxic-ischemic encephalopathy [J].Ital J Pediatr,2010,16 (36):63.
[4]麥水強(qiáng),陳銘珍,蘇贊彩.新生兒缺氧缺血性腦病血清細(xì)胞因子測(cè)定及其臨床意義.中國(guó)婦幼保健.2007,22(21):3001~3002.
[5]Nacinovic-Duletic A,Stifter S,Dvornik S,et al.Correlation of ser-um IL-6,IL-8 and IL-10 levelswith clinicopathological featuresand prognosis in patientswith diffuse large B-cell lymphoma[J].IntJ Lab Hematol,2008,30(3):230~239 .
[6]韓玉昆,楊于嘉,邵肖梅主編.新生兒缺氧缺血性腦病[M].第2 版.北京:人民衛(wèi)生出版社,2010,6.
[7]董愛(ài)萍,姚銳,馮美果.新生兒缺氧缺血性腦病血清細(xì)胞因子的動(dòng)態(tài)變化和預(yù)后分析.咸寧學(xué)院學(xué)報(bào) (醫(yī)學(xué)版).2011,25(2):144~145.
[8]毛瓊,高改蘭,何利珍,等.新生兒缺氧缺血性腦病血清細(xì)胞因子水平變化的臨床意義[J].現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志,2011,20(26):3256~3257.
[9]王健,陸勤.缺氧缺血性腦病新生兒血細(xì)胞因子表達(dá)的意義[J].實(shí)用兒科臨床雜志,2006,21(6):341~342.
[10]Aly H,Khashaba MT,El Ayouty M,et al .IL-1β,IL-6 and TNF-αand out comes of neonatal hypoxic ischemic encephalopathy[J].Brain Dev,2006,28(3):178~182.
[11]劉文東,王彩霞,金心,等.新生兒缺氧缺血性腦病血清細(xì)胞因子測(cè)定及意義.中國(guó)優(yōu)生與遺傳雜志.2012,20(1):64~65.
[12]Hasan T,Mehmet Y,Necil K,et al.Value of biochemical markers for outcome in term infants with asphyxia [J].Obstet Gynecol Surv,2005,60(5):293~295.
[13]Berger RP,Bazaco MC,Wagner AK,et al.Trajectory analysis of serum biomarker concentrations facilitates outcome prediction after pediatric traumatic and hypoxemic brain injury[J].Dev Neurosci,2010,32 (5-6):396~405 .
[14]賈菲菲,徐德恩.新生兒缺氧缺血性腦病血清IL-8 水平與腦血流變化的臨床研究[J].中國(guó)實(shí)用醫(yī)藥,2008,3(11):4~5.
[15]張曉燕,林麗星.部分細(xì)胞因子在新生兒缺氧缺血性腦病中的保護(hù)作用[J].蘭州大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版),2005,31(4):74~76.
[16]閻雯,黃妮娜,賈曉芳,等.IL-1β和TNF-α表達(dá)量與新生兒缺血缺氧性腦病腦損傷程度的相關(guān)性.細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志,2010,26(7):693~694.
[17]劉海英.缺氧缺血性腦病新生兒血清巨噬細(xì)胞移動(dòng)抑制因子、腫瘤壞死因子-α和白細(xì)胞介素-1β 變化的意義.實(shí)用兒科臨床雜志.2011,26(14):1110~1111.