石永強，趙向陽，王輝

(溧水縣人民醫(yī)院消化內(nèi)科，江蘇溧水 211200)

潰瘍性結(jié)腸炎(ulcerative colitis，UC)是一種病因尚不明確的主要發(fā)生在結(jié)腸黏膜層的非特異性炎性病變。目前認為，UC的發(fā)病與遺傳、環(huán)境、感染和免疫等多種因素相互作用有關，屬于自身免疫性疾病的一種。研究表明，UC的發(fā)病與Th細胞免疫調(diào)節(jié)失衡密切相關，但具體機制尚未闡明［1］。核因子-κB(nuclear factor-κB，NF-κB p65)在UC的發(fā)生發(fā)展中為一種重要的轉(zhuǎn)錄因子，是多種信號傳導途徑的匯聚點;白介素17(IL-17)是由Th17產(chǎn)生的促炎細胞因子，在炎癥性疾病及自身免疫病的發(fā)病機制中發(fā)揮重要的免疫調(diào)節(jié)作用;細胞質(zhì)銜接蛋白(Act1)是介導IL-17信號和活化NF-κB p65之間的唯一銜接蛋白。本研究通過檢測UC腸黏膜組織中Act1、NF-κB p65、IL-17的表達水平分析三者之間的相關關系，探討三者在UC發(fā)病機制中的作用及機制，為UC的治療提供新的作用靶點。

1 資料與方法

1.1 一般資料

2011年1月至2012年12月在江蘇省溧水縣人民醫(yī)院內(nèi)鏡檢查明確診斷為UC活動期的患者30例，均符合公認的臨床UC診斷標準［2］。其中男17例，女13例，年齡18～66歲，平均(41±3)歲，病程1個月～10年。正常對照組30例，男18例，女12例，年齡18～53歲，平均(38±2)歲，為健康體檢者或結(jié)腸單發(fā)息肉切除術后復查腸鏡結(jié)果正常者，均無其他疾病。

1.2 標本采集

均在患者病變最明顯腸段黏膜潰瘍邊緣或充血水腫最明顯處多點取材(6～8個點)。正常對照者均在乙狀結(jié)腸處取材(6～8個點)?；顧z組織經(jīng)10%甲醛固定，常規(guī)脫水、石蠟包埋、切片，行HE染色，觀察組織學形態(tài)并進行病理分級。

1.3 UC患者的病理分級

UC患者的組織切片由兩位病理科醫(yī)師閱片，按Truelove-Richards標準［3］進行病理學分級。Ⅰ級:無明顯炎癥;Ⅱ級:輕～中度炎癥;Ⅲ級:重度炎癥。

1.4 免疫組化 SP 法檢測 Act1、IL-17、NF-κB p65的表達

切片脫蠟，3%過氧化氫處理，高壓鍋加壓修復抗原，以3%正常小牛血清封閉，一次滴加鼠抗人Act1多克隆抗體、鼠抗人 NF-κB p65單克隆抗體、鼠抗人IL-17單克隆抗體，滴加辣根過氧化物酶標記的鏈霉卵白素，SP復合物，DAB顯色，蘇木素復染。用PBS代替一抗作陰性對照，用已知陽性切片作陽性對照。所有標本均采用Image-Pro Plus型全自動醫(yī)學圖像彩色分析系統(tǒng)進行圖像半定量分析，每個樣本隨機選5個染色較好的高倍視野(×400)，測定細胞棕黃色和棕褐色陽性表達顆粒的積累吸光度(integrated optical density，IOD)值，IOD值越高，說明陽性表達越強。

1.5 統(tǒng)計學處理

2 結(jié) 果

2.1 入選UC患者的臨床病理特點

30例UC患者臨床類型多呈慢性復發(fā)型，病變部位多位于直腸、乙狀結(jié)腸。按Southerland疾病活動指數(shù)(Mayo指數(shù))進行疾病分期［4］，入選患者均為活動期。按Truelove-Richards標準病理學分級Ⅰ級10例、Ⅱ級17例、Ⅲ級3例。

2.2 UC 患者結(jié)腸黏膜組織 Act1、NF-κB p65、IL-17的表達

30例UC組結(jié)腸黏膜表面上皮細胞和固有層Act1、NF-κB p65、IL-17 均呈陽性表達，而且表達與正常對照組比較顯著增強，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。UC 結(jié)腸黏膜組織中 Act1、NF-κB p65、IL-17的表達隨著組織病理分級的增高而逐漸增強，Ⅲ級＞Ⅱ級＞Ⅰ級，不同病理分級間兩兩比較差異均有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。見表1。

2.3 Act1、IL-17 與 NF-κB p65 表達之間的相關性

根據(jù)病理分級，UC患者結(jié)腸黏膜組織中 Act1、NF-κB p65與IL-17的表達均呈正相關，相關系數(shù)r值分別為 0.906、0.912(P ＜0.05)。

表1 各組結(jié)腸黏膜中 Act1、NF-κB p65、IL-17表達及其與組織病理分級的關系(IOD值)(±s)Tab 1 The relationship between the Act1，NF-κB p65，IL-17 expression in colonic mucosa and its histopathological grading(The value of IOD)±s)

表1 各組結(jié)腸黏膜中 Act1、NF-κB p65、IL-17表達及其與組織病理分級的關系(IOD值)(±s)Tab 1 The relationship between the Act1，NF-κB p65，IL-17 expression in colonic mucosa and its histopathological grading(The value of IOD)±s)

組 別 n Act1 NF-κB p65 IL-17正常對照組30 0.21 ±0.02 0.22 ±0.01 0.45 ±0.02 UC組Ⅰ級 10 1.04 ±0.05 3.24 ±0.09 2.06 ±0.03Ⅱ級 17 2.03 ±0.07 6.29 ±0.13 4.71 ±0.13Ⅲ級3 5.03 ±0.08 10.02 ±0.15 7.21 ±0.15

3 討 論

UC是一種病因尚不明的、主要發(fā)生在結(jié)腸黏膜層的非特異性炎性病變，以潰瘍糜爛為主，多累及遠端結(jié)腸，也可遍及全結(jié)腸，以腹痛、腹瀉、黏液膿血便為主要癥狀。UC的發(fā)病率呈逐年上升趨勢［5］。目前認為其原因是易感基因、環(huán)境因素及免疫因素之間相互作用，引起黏膜免疫活性細胞激活，產(chǎn)生炎癥細胞因子和炎癥介質(zhì)，進而導致腸黏膜組織炎癥［6］。

研究［7］證實，NF-κB在 UC的發(fā)生、發(fā)展中作為一種重要的轉(zhuǎn)錄因子，是多種信號傳導途徑的匯聚點，在調(diào)節(jié)炎癥反應的基因中起關鍵作用。NF-κB含有P50和P65兩個亞基。P65在正常組織不表達或低表達，而在活動期UC有不同程度高表達［8］。

研究［9］表明，UC的發(fā)病與Th細胞免疫調(diào)節(jié)失衡密切相關，但具體機制尚未闡明。Th17是區(qū)別于典型Th1和Th2的CD4+輔助細胞，IL-17是由Th17產(chǎn)生的促炎細胞因子，能激活并募集大量的中性粒細胞聚集到炎癥部位，從而引起并擴大炎癥反應。Stasi等［10］研究證實，IL-17促進炎癥細胞因子IL-6及TNF-α的合成并參與炎癥反應，提示以分泌IL-17為主的Th17細胞在炎性疾病的發(fā)病中具有比Th1/Th2更重要的作用。有研究［11-12］發(fā)現(xiàn)，炎癥性腸黏膜含有較高水平的Th17細胞，IL-17的表達相對于正常人結(jié)腸黏膜顯著增高。

Act1是一種胞質(zhì)蛋白，通過作用于T細胞和B細胞介導的免疫反應，從而調(diào)節(jié)自身免疫［13］。有研究［14］表明，Act1在右旋糖聚糖硫酸鈉(DSS)誘導的實驗性腸炎的發(fā)病中起重要作用。Chang等［15］研究表明，Act1調(diào)節(jié)IL-17依賴的NF-κB的活化，是一種重要的信號轉(zhuǎn)導調(diào)節(jié)子，介導從IL-17到NF-κB以及其他轉(zhuǎn)錄因子的活化。Li等［16］研究發(fā)現(xiàn)，Act1能激活NF-κB。Act1是介導和活化之間的唯一銜接蛋白［17］。

本研究發(fā)現(xiàn)，UC 腸黏膜中 Act1、IL-17、NF-κB p65的表達均上調(diào)，并隨UC病理分級的升高而表達升高，提示炎癥越重，Act1、IL-17、NF-κB p65表達越強;Act1、NF-κB p65與IL-17呈正相關關系。本研究結(jié)果表明，NF-κB p65是UC的發(fā)生、發(fā)展中關鍵的轉(zhuǎn)錄因子，是多種信號傳導途徑的匯聚點，與前期研究相同;提示Th17細胞在UC的發(fā)病中發(fā)揮重要的作用，推測該作用與增加IL-17分泌有關;Act1在UC的發(fā)病中發(fā)揮重要的作用，推測這一作用可能通過介導IL-17信號，并進一步活化NF-κB而實現(xiàn)，可能成為未來UC治療的潛在作用靶點。

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