王 坤， 謝強勝

(山東省食品藥品檢驗所，山東濟南 250101)

解肌寧嗽丸一方來源于《沈氏尊生書》寧嗽湯加減，后收錄在《北京市中藥成方選集》，主治相同。現(xiàn)行標準為《中國藥典》2010年版一部［1］?，F(xiàn)行標準中定量測定是以柚皮苷為指標［1-2］，測定枳殼中柚皮苷［3-4］。本實驗參考相關報道［10-12］，建立了同時測定解肌寧嗽丸中有效成分橙皮苷［5-6］、柚皮苷［7］、葛根素、甘草苷［8-9］的定量測定，試驗結果表明，該方法可用于解肌寧嗽丸的質量控制。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 Waters2695-2996液相色譜儀;METTLER AE240電子天平 (瑞士梅特勒公司)。

1.2 試藥 甘草苷 (批號111610-200401)、葛根素 (批號110752-200209)、柚皮苷 (批號110722-200309)、橙皮苷 (批號110721-200211)對照品均購自于中國藥品生物制品檢定所;甲醇 (分析純、色譜純);解肌寧嗽丸 (天津中新藥業(yè)集團股份有限公司達仁堂制藥廠)，為大蜜丸。

2 實驗方法

2.1 色譜條件 Diamonsil ODS C18色譜柱 (250 mm×4.5 mm，5 μm);流動相為甲醇－0.1%磷酸溶液 (25∶75);體積流量1.0 mL/min;檢測波長283 nm;柱溫為35℃;進樣量10 μL。

2.2 混合對照品溶液的制備 精密稱取甘草苷、葛根素、柚皮苷、橙皮苷10.05 mg、12.75 mg、20.30 mg、20.40 mg，置100 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，分別精密吸取2、2、3、3 mL，置10 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得，制成20.1、25.5、60.9、61.2 μg/mL混合對照品溶液。

2.3 供試品溶液的制備 取重量差異項下的本品，剪碎，混勻，取約2 g，精密稱定，置具塞錐型瓶中，精密加入50%甲醇50 mL，稱定質量，超聲處理 (功率300 W，頻率40 kHz)45 min，取出，放冷，再稱定質量，用50%甲醇補足減失的質量，搖勻，濾過，濾液用微孔濾膜 (0.45 μm)濾過，即得。

2.4 陰性溶液的制備 取不加甘草、葛根、枳殼、陳皮的空白樣品按照供試品溶液的制備項下的方法，制成溶液，即得。

2.5 系統(tǒng)適用性及專屬性試驗 分別精密吸取上述對照品混合溶液、供試品溶液及陰性對照溶液各10 μL，注入液相色譜儀進行測定，測定結果見圖1。4種成分分離度均大于2.0。理論板數以4個目標成分計均不低于3 000。陰性樣品在4個目標成分的色譜峰位置上無干擾，表明專屬性好。

3 實驗結果

3.1 線性關系考察 精密吸取上述對照品混合溶液4、8、12、16、20 μL，按上述色譜條件測定，以峰面積積分值為縱坐標，對照品的量為橫坐標，繪制標準曲線，得回歸方程。結果顯示在相應進樣量范圍內，4個成分線性良好，結果見表1。

3.2 精密度試驗 精密吸取上述對照品混合溶液10 μL，注入液相色譜儀，連續(xù)進樣6次，測其峰面積積分值。計算得甘草苷RSD為1.08%，葛根素RSD為0.75%，柚皮苷RSD為1.18%，橙皮苷RSD為0.34%。試驗結果顯示儀器精密度良好。

圖1 混合對照品 (A)、供試品 (B)和陰性對照 (C)HPLC色譜圖Fig.1 HPLC chromatograms of mixture standard substances(A)，sample(B)and negative sample(C)

表1 4個成分線性測定結果Tab.1 Linearity of four components

3.3 重復性試驗 依2.3項供試品溶液的制備方法制備，按照樣品測定方法，對同一批號樣品進行6次平行試驗，計算質量分數，結果顯示，甘草苷平均質量分數為0.36 mg/g，RSD為1.56%;葛根素質量分數為0.25 mg/g;RSD為1.74%;柚皮苷質量分數為1.41 mg/g，RSD為1.18%;橙皮苷質量分數為1.72 mg/g，RSD為1.22%。

3.4 穩(wěn)定性試驗 取同一供試品溶液，每隔2 h進樣一次，每次10 μL，共考察12 h，以觀察樣品溶液在檢測過程中待測成分的穩(wěn)定性。計算得甘草苷RSD為1.47%，葛根素RSD為0.36%，柚皮苷RSD為1.19%，橙皮苷RSD為0.87%%。說明供試品溶液在12 h內穩(wěn)定。

3.5 加樣回收試驗 精密稱取3.3項下已測定的重量差異項下的樣品6份，每份約1.0 g，分別置50 mL量瓶中，精密加入甘草苷對照品溶液 (0.58 mg/mL)、葛根素對照品溶液 (0.21 mg/mL)，柚皮苷對照品溶液 (1.60 mg/mL)，橙皮苷對照品溶液 (1.90 mg/mL)混合對照品1 mL，加入50%甲醇至刻度，超聲處理 (功率300 W，頻率40 kHz)45 min，取出，放冷，再稱定質量，用50%甲醇補足減失的質量，搖勻，濾過，濾液用微孔濾膜(0.45 μm)濾過，即得。按2.1項下測定方法進行測定，分別計算回收率，結果表明本法具有良好的回收率，結果見表2。

表2 加樣回收率試驗結果Tab.2 Results of recovery tests

3.6 樣品的測定 按2.3項下的方法制成供試品溶液，精密量取上述混合對照品溶液和供試品溶液各10 μL，按2.1項下方法進行測定4個成分，按外標法計算，結果見表3。

4 討論

4.1 色譜條件的優(yōu)化 原《中國藥典》甘草、葛根、枳殼、陳皮項下流動相為甲醇-水、乙腈-水、甲醇－0.1%磷酸水溶液，從色譜結果看，甲醇－0.1%磷酸水溶液為流動相測定時理論板數及拖尾因子結果最理想，加入酸有利于減少拖尾，故最終確定以甲醇－0.1%磷酸水溶液為流動相。

4.2 吸收波長的選擇 為了保證被測組分具有適宜靈敏度和精密度，本課題組測定了橙皮苷、柚皮苷、葛根素、甘草苷在流動相中紫外吸收光譜，甘草苷在277 nm有最大吸收;葛根素在250 nm處有最大吸收，柚皮苷［11］和橙皮苷在283 nm處有最大吸收。經過研究確定283 nm為本實驗的吸收波長。在283 nm條件下，建立以上定量測定方法，該方法穩(wěn)定可靠。

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