陳桂琴，羅香，李桂生，黃優(yōu)生，陳瑛

（江西省分析測(cè)試研究所，南昌 330029）

廣霍香油是從廣霍香嫩葉中通過分子蒸餾法而得［1］，是一種應(yīng)用廣泛的天然香料。在工業(yè)生產(chǎn)中，廣霍香油定香性能優(yōu)越，是一種常用的定香劑；在醫(yī)藥方面，廣藿香油有明顯的止咳、化痰、抗炎、鎮(zhèn)痛作用［2–3］；在食品加工行業(yè)廣霍香油為允許使用的食用香料［4］，主要用于可樂型飲料等。百秋李醇作為廣藿香揮發(fā)油的主要成分，是歷版《中華人民共和國(guó)藥典》規(guī)定的用于評(píng)價(jià)廣藿香油質(zhì)量的指標(biāo)成分［5］。目前對(duì)廣藿香油中百秋李醇的測(cè)定主要采用氣相色譜法，定量方法有內(nèi)標(biāo)法［6］與外標(biāo)法［7］，但哪種定量方法更準(zhǔn)確、更精密未見報(bào)道。筆者對(duì)兩種定量方法在廣霍香油中百秋李醇含量的測(cè)定中的差異進(jìn)行比較。而以往的檢測(cè)中，檢測(cè)時(shí)間較長(zhǎng)，筆者通過對(duì)色譜柱的選擇以及柱溫程序升溫過程的優(yōu)化，有效縮短檢測(cè)時(shí)間，為廣藿香油中百秋李醇的測(cè)定提供了一種簡(jiǎn)單、快速、準(zhǔn)確的測(cè)定方法。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 主要儀器與試劑

氣相色譜儀：GC–2010型，日本島津公司；

電子分析天平：Mettler Toledo Al204型，瑞士梅特勒–托利多公司；

廣霍香油：江西吉水縣金海天然香料科技有限公司；

百秋李醇對(duì)照品：30 mg/支，中國(guó)藥品生物制品檢定所；

正十八烷內(nèi)標(biāo)物：色譜純；

內(nèi)標(biāo)溶液的配制：準(zhǔn)確稱取正十八烷2.500 0 g，用正己烷溶解并定容至100 mL，得25.0 mg/mL正十八烷內(nèi)標(biāo)溶液；

對(duì)照品溶液的配制：準(zhǔn)確稱取百秋李醇對(duì)照品250 mg置于10 mL容量瓶中，用正己烷定容，搖勻，配制成25.0 mg/mL百秋李醇標(biāo)準(zhǔn)工作液。取此使用液1 mL置于25 mL容量瓶中，再加入1 mL正十八烷內(nèi)標(biāo)溶液，用正己烷定容，搖勻，配制成百秋李醇標(biāo)準(zhǔn)溶液。該標(biāo)準(zhǔn)溶液中百秋李醇含量為 1.0 mg/mL，內(nèi)標(biāo)為 1.0 mg/mL，取 1 μL 進(jìn)樣；

供試品溶液的配制：精密稱取廣霍香油0.1 g，正己烷溶解，再加入1 mL正十八烷內(nèi)標(biāo)溶液，定容至25 mL，搖勻，待測(cè)；

實(shí)驗(yàn)所用其它試劑均為分析純。

1.2 色譜條件

色 譜 柱：DB–5MS（30 m×0.32 mm，0.25 μm，美國(guó)安捷倫公司）；進(jìn)樣口溫度：250℃；程序升溫：柱溫起始溫度150℃，并保持8 min，然后以5℃/min的速率升溫至180℃，保持2 min；氫火焰離子化檢測(cè)器（FID）溫度：250℃；分流比：30∶1；空氣流量：400 mL/min；載氣壓力：100 kPa；線速度：44.6 cm/s；氫氣流量：40 mL/min；進(jìn)樣量：1 μL。

2 結(jié)果與討論

2.1 色譜柱的選擇

取同一供試品溶液，分別使用DB–5MS（30 m×0.32 mm，0.25μm）、DB–1（30 m×0.32 mm，0.25 μm）、DB–1701（30 m×0.32 mm，0.25 μm）、DB–WAX（30 m×0.32 mm，0.25 μm）色譜柱進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果顯示，采用DB–5MS測(cè)得的峰形對(duì)稱度以及樣品分離度優(yōu)于其它色譜柱，故本方法選擇DB–5MS色譜柱。

2.2 色譜條件的優(yōu)化

為了保證樣品氣化完全，分析時(shí)間短，分離度高，且與內(nèi)標(biāo)正十八烷的分離度大于2.0，經(jīng)過多次實(shí)驗(yàn)，最終確定進(jìn)樣口溫度為250℃；程序升溫，起始溫度150℃，保持8 min，然后以5℃/min的速率升溫至180℃后，保持2 min；氫火焰離子化檢測(cè)器（FID）溫度250℃；分流比30∶1。在選定的該實(shí)驗(yàn)最優(yōu)條件下，樣品色譜圖如圖1所示。

圖1 樣品的色譜圖

2.3 內(nèi)標(biāo)法與外標(biāo)法定量結(jié)果比較

取不同批次的廣藿香油共3個(gè)批次，在1.2色譜條件下，分別用內(nèi)標(biāo)法與外標(biāo)法檢測(cè)，結(jié)果見表1。

表1 內(nèi)標(biāo)法與外標(biāo)法測(cè)定結(jié)果的比較 %

由表1可見，內(nèi)標(biāo)法和外標(biāo)法測(cè)得的3個(gè)含量的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差均小于5%，雖然兩種定量方法均可滿足檢測(cè)工作的需要，但從測(cè)定精度來考慮，內(nèi)標(biāo)法測(cè)定結(jié)果的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差明顯小于外標(biāo)法的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差，表明內(nèi)標(biāo)法在精密度方面優(yōu)于外標(biāo)法，故本實(shí)驗(yàn)選擇內(nèi)標(biāo)法。

2.4 工作曲線與檢出限

精密移取25.0 mg/mL百秋李醇標(biāo)準(zhǔn)工作液0.2，0.4，0.6，0.8，1.0，1.5，2.0 mL 置 于 25 mL 容 量瓶中，分別加入1.0 mL正十八烷內(nèi)標(biāo)液，用正己烷稀釋定容，搖勻，在1.2色譜條件下進(jìn)樣分析。以百秋李醇與內(nèi)標(biāo)物的峰面積比（x）對(duì)百秋李醇濃度（y）回歸，得到回歸方程y=0.014 576+0.865 76x，線性相關(guān)系數(shù)r=0.999 7，線性范圍為0.2～2.0 mg/mL。以3倍基線噪音計(jì)算檢出限，計(jì)算得方法的檢出限為 1 μg/mL。

2.5 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取同一份供試品溶液，每隔1 h進(jìn)樣1次，在10 h內(nèi)記錄峰面積，峰面積測(cè)定結(jié)果的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為2.01%（n=6），表明在10 h內(nèi)被測(cè)溶液是基本穩(wěn)定的。

2.6 精密度試驗(yàn)

取同一批號(hào)的廣藿香油6份，按供試品溶液的配制方法制得6份溶液，按1.2色譜條件測(cè)定，結(jié)果見表2。由表2可知，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.22%（n=6），表明該方法精密度良好。

表2 精密度試驗(yàn)結(jié)果 %

2.7 加標(biāo)回收試驗(yàn)

精密稱取同一批號(hào)廣藿香油0.1 g共6份，用正己烷溶解，分別加百秋李醇 5.0，7.5，10.0，12.5，15.0，17.5 mg，再加入1 mL正十八烷內(nèi)標(biāo)溶液，搖勻，并定容至25 mL，按1.2色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，結(jié)果見表3。由表3可知，該方法測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確可靠，可用于測(cè)定廣藿香油中百秋李醇含量。

表3 加標(biāo)回收率試驗(yàn)結(jié)果

3 結(jié)論

采用毛細(xì)管色譜柱氣相色譜法測(cè)定廣藿香油中百秋李醇，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，內(nèi)標(biāo)法定量比外標(biāo)法具有更好的精密度和準(zhǔn)確度。該法簡(jiǎn)便快速，測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確，重現(xiàn)性高，為廣藿香油質(zhì)檢工作提供了更為準(zhǔn)確、快速的方法。

［1］陳慧，張金巍，朱合偉，等.分子蒸餾法純化廣藿香揮發(fā)油中廣藿香醇［J］.中草藥 .2009，40(1): 60–63.

［2］趙書策，賈強(qiáng)，廖富林，等.廣藿香提取物的止咳、化痰、平喘藥理研究［J］.中成藥，2008，30(3): 449–450.

［3］趙書策，賈強(qiáng)，廖富林.廣藿香提取物的抗炎、鎮(zhèn)痛藥理研究［J］.中成藥，2007，29(2): 285–487.

［4］GB 2760–2011 食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品添加劑使用標(biāo)準(zhǔn)［S］.

［5］國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典：一部［M］.北京: 化學(xué)工業(yè)出版社，2005: 272.

［6］劉青，江波，于宗淵.氣相色譜法測(cè)定廣藿香揮發(fā)油中廣藿香醇的含量［J］.山東醫(yī)藥，2007，47 (2): 3.

［7］國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典: 一部［M］.北京: 化學(xué)工業(yè)出版社，2010: 373.