蔡 娟 顧 歡 常玲玲 鄒劍敏 施壽榮＊

（1.揚(yáng)州大學(xué)動(dòng)物科學(xué)與技術(shù)學(xué)院，揚(yáng)州 225009；2.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院家禽研究所，揚(yáng)州225125）

大豆黃酮（daidzein，DA）屬異黃酮類植物雌激素，廣泛存在于豆類、牧草、谷物等天然植物中。其化學(xué)結(jié)構(gòu)與17β－雌二醇類似，生物測(cè)定它的雌激素活性約占17β－雌二醇的10－2～10－3倍［1］。近年來，大豆黃酮在人醫(yī)臨床保健及動(dòng)物飼料添加劑方面越來越受到重視，研究發(fā)現(xiàn)，它具有抗氧化、抗癌、降低膽固醇、提高機(jī)體免疫力等生物學(xué)功能［2－4］。在家禽上的研究結(jié)果表明，大豆黃酮對(duì)家禽的生產(chǎn)性能有很好的促進(jìn)作用，添加5～10mg/kg大豆黃酮可以提高蛋雞、蛋鴨、鵪鶉的產(chǎn)蛋率，降低料蛋比，增加平均蛋重等［5－8］。但其長期高劑量添加是否具有副作用及關(guān)于其安全性問題目前尚未見報(bào)道。因此，本試驗(yàn)旨在研究飼糧中長期添加高劑量大豆黃酮對(duì)產(chǎn)蛋后期蛋雞生產(chǎn)性能、蛋品質(zhì)和繁殖性能器官發(fā)育安全性的影響，從而為飼料生產(chǎn)企業(yè)和養(yǎng)殖場（戶）科學(xué)使用大豆黃酮提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料與動(dòng)物

大豆黃酮（4，7－二羥基異黃酮，含量＞97.5%）。試驗(yàn)動(dòng)物為56周齡海蘭褐蛋雞。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

選取體重、產(chǎn)蛋率相近的56周齡海蘭褐蛋雞640只，隨機(jī)分為4組，每組8個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)20只雞。Ⅰ組（對(duì)照組）飼喂基礎(chǔ)飼糧，試驗(yàn)Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ組飼喂在基礎(chǔ)飼糧中分別添加10（最高推薦有效量）、50（5倍最高推薦有效 量）、100mg/kg（10倍最高推薦有效量）大豆黃酮的試驗(yàn)飼糧。預(yù)試期3周，試驗(yàn)期12周，從59周齡到70周齡。基礎(chǔ)飼糧組成及營養(yǎng)水平見表1。

表1 基礎(chǔ)飼糧組成及營養(yǎng)水平（風(fēng)干基礎(chǔ)）Table 1 Composition and nutrient levels of the basal diet（air－dry basis） %

1.3 飼養(yǎng)管理

試驗(yàn)雞采用3層階梯式籠養(yǎng)，每天定時(shí)飼喂2次（08：00和15：00），自由采食及飲水。各組飼養(yǎng)管理?xiàng)l件保持完全相同，參考美國海蘭公司推薦的飼養(yǎng)方法飼養(yǎng)管理。

1.4 指標(biāo)測(cè)定及方法

1.4.1 生產(chǎn)性能

每天15：00準(zhǔn)時(shí)收蛋，以重復(fù)為單位每天記錄產(chǎn)蛋數(shù)、蛋重，每周統(tǒng)計(jì)耗料量和和雞只死亡數(shù)，計(jì)算全期產(chǎn)蛋率、采食量、料蛋比、產(chǎn)蛋量。

1.4.2 蛋品質(zhì)

在試驗(yàn)開始、第4周、第8周、第12周（試驗(yàn)結(jié)束時(shí)），每個(gè)重復(fù)選取8只蛋測(cè)定蛋品質(zhì)，包括蛋重、蛋殼顏色、蛋殼強(qiáng)度、蛋殼厚度、蛋形指數(shù)、蛋白高度、蛋黃顏色以及蛋殼、蛋白、蛋黃的重量等參數(shù)。測(cè)定儀器包括多功能蛋品質(zhì)測(cè)定儀、蛋殼厚度測(cè)定儀、蛋殼強(qiáng)度測(cè)定儀（以色列ORKA公司）、CM－2300d分光測(cè)色計(jì)（日本 MINOLTA公司）、電子數(shù)顯卡尺（廣陸數(shù)字測(cè)控股份有限公司）。

1.4.3 繁殖器官發(fā)育

將雞頸部放血致死，稱取輸卵管、子宮、卵巢、小黃卵泡等臟器重量并計(jì)算各器官與體重的比值；量取輸卵管長度；數(shù)排卵前卵泡（直徑＞10mm）、小黃卵泡（直徑＞4～10mm）、大白卵泡（直徑2～4mm）個(gè)數(shù)。

1.5 數(shù)據(jù)處理

數(shù)據(jù)經(jīng)Excel 2003整理后，用SPSS 16.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，單因子方差分析（one－way ANOVA）檢驗(yàn)組間差異顯著性。P＜0.05表示差異顯著。

2 結(jié) 果

2.1 大豆黃酮對(duì)產(chǎn)蛋后期蛋雞生產(chǎn)性能的影響

由表2可知，大豆黃酮顯著影響了全期蛋雞死亡率（P＜0.05）。全期未見雞只出現(xiàn)不適癥狀。

大豆黃酮對(duì)產(chǎn)蛋后期蛋雞產(chǎn)蛋率、采食量、產(chǎn)蛋量和料蛋比的影響見表3、圖1、圖2、圖3、圖4。大豆黃酮顯著影響全期平均產(chǎn)蛋率、產(chǎn)蛋量和料蛋比（P＜0.05），且產(chǎn)蛋率（P＝0.029）、產(chǎn)蛋量（P＝0.003）和料蛋比（P＝0.019）與大豆黃酮添加量呈二次曲線關(guān)系；大豆黃酮對(duì)采食量沒有顯著影響（P＞0.05）。從第4周開始，50mg/kg組的產(chǎn)蛋率、產(chǎn)蛋量和料蛋比與對(duì)照組維持在顯著水平（P＜0.05）。平均產(chǎn)蛋率、產(chǎn)蛋量和料蛋比（y）與大豆黃酮添加量（x）的二次曲線關(guān)系分別為：y＝83.994＋0.145x－0.001x2、y＝54.282＋0.093x－0.001x2、y ＝2.181－0.004x ＋0.000 033 6x2，依此模型推算，達(dá)到最佳平均產(chǎn)蛋率、產(chǎn)蛋量和料蛋比的大豆黃酮添加量分別為72.50、46.50和59.52mg/kg。

表2 大豆黃酮對(duì)產(chǎn)蛋后期蛋雞死亡率的影響Table 2 Effects of daidzein on mortality of hens during the late laying period（n＝8） %

表3 大豆黃酮對(duì)產(chǎn)蛋后期生產(chǎn)性能的影響Table 3 Effects of daidzein on performance of hens during the late laying period（n＝8）

圖1 大豆黃酮對(duì)產(chǎn)蛋后期蛋雞產(chǎn)蛋率的影響Fig.1 Effects of daidzein on egg production of hens during the late laying period

圖2 大豆黃酮對(duì)產(chǎn)蛋后期蛋雞采食量的影響Fig.2 Effects of daidzein on feed intake of hens during the late laying period

圖3 大豆黃酮對(duì)產(chǎn)蛋后期蛋雞產(chǎn)蛋量的影響Fig.3 Effects of daidzein on egg mass of hens during the late laying period

圖4 大豆黃酮對(duì)產(chǎn)蛋后期蛋雞料蛋比的影響Fig.4 Effects of daidzein on ratio of feed to egg of hens during the late laying period

2.2 大豆黃酮對(duì)產(chǎn)蛋后期蛋雞蛋品質(zhì)的影響

由表4可知，大豆黃酮僅對(duì)蛋殼厚度、蛋殼比例和蛋殼強(qiáng)度有顯著影響（P＜0.05），對(duì)其余指標(biāo)均沒有顯著影響（P＞0.05）。從第4周開始，蛋殼厚度受到大豆黃酮的顯著影響（P＜0.05，線性P＜0.05），隨著大豆黃酮添加量的升高而升高。從第8周開始，蛋殼比例和蛋殼強(qiáng)度受到大豆黃酮的顯著影響（P＜0.05，線性P＜0.05），隨著大豆黃酮添加量的升高而升高。

表4 大豆黃酮對(duì)產(chǎn)蛋后期雞蛋蛋品質(zhì)的影響Table 4 Effects of daidzein on egg quality of hens during the late laying period（n＝8）

續(xù)表4

2.3 大豆黃酮對(duì)產(chǎn)蛋后期蛋雞繁殖器官的影響

由表5可知，大豆黃酮僅對(duì)輸卵管指數(shù)有顯著影響（P＜0.05，線性P＜0.05），輸卵管指數(shù)隨著大豆黃酮添加量的升高而降低；其他指標(biāo)組間差異均不顯著（P＞0.05）。小黃卵泡數(shù)和大白卵泡數(shù)在數(shù)值上呈現(xiàn)出隨著大豆黃酮添加量升高而先升高后降低的趨勢(shì)。

表5 大豆黃酮對(duì)產(chǎn)蛋后期蛋雞繁殖器官的影響Table 5 Effects of daidzein on reproductive organs of hens during the late laying period（n＝8）

3 討 論

3.1 大豆黃酮對(duì)產(chǎn)蛋后期蛋雞生產(chǎn)性能的影響

大豆黃酮具有抗氧化、提高機(jī)體免疫功能的作用［9］。朱新建等［10］研究發(fā)現(xiàn)，飼糧中添加大豆黃酮可在一定程度上提高老齡蛋雞機(jī)體的抗氧化能力。本試驗(yàn)研究結(jié)果表明，大豆黃酮顯著降低了成年蛋雞的死亡率，這也進(jìn)一步證實(shí)了大豆黃酮提高免疫功能的作用。

本研究結(jié)果顯示，全期平均產(chǎn)蛋率與大豆黃酮呈現(xiàn)顯著二次曲線關(guān)系，這表明產(chǎn)蛋率隨著大豆黃酮含量升高（0、10、50、100mg/kg）呈現(xiàn)先提高后降低的趨勢(shì)。本試驗(yàn)低劑量部分研究結(jié)果與Zhao等［6－7］在 蛋 鴨 （5mg/kg），Ni等［5］、Liu等［11］在蛋雞（10mg/kg）上得出的大豆黃酮可顯著提高產(chǎn)蛋率的結(jié)論一致。這可能由于適宜劑量大豆黃酮具有雌激素受體激動(dòng)劑，增強(qiáng)雌激素作用，上調(diào)了促性腺激素受體mRNA的表達(dá)量，從而促進(jìn)了產(chǎn)蛋后期蛋雞卵泡的發(fā)育［11－12］；同時(shí)過高劑量的大豆黃酮起抗雌激素的作用，與雌激素競爭雌激素受體，降低雌激素作用［13］，這點(diǎn)由本試驗(yàn)中100mg/kg大豆黃酮組產(chǎn)蛋率、產(chǎn)蛋量和料蛋比低于50mg/kg大豆黃酮組得到進(jìn)一步證實(shí)，同時(shí)此部分與前人研究結(jié)果存在差異主要原因是之前對(duì)高劑量添加大豆黃酮（＞50mg/kg）的研究很少。

3.2 大豆黃酮對(duì)產(chǎn)蛋后期蛋雞蛋品質(zhì)的影響

大豆黃酮在蛋殼形成過程中起到重要作用，這主要由于大豆黃酮降低了破骨細(xì)胞細(xì)胞內(nèi)鈣濃度，從而增加殼腺形成過程中鈣的數(shù)量［14－16］。本試驗(yàn)中3個(gè)與鈣代謝相關(guān)的蛋品質(zhì)指標(biāo)（蛋殼厚度、蛋殼比例、蛋殼強(qiáng)度）均受到了大豆黃酮的顯著影響。這與Ni等［5］研究發(fā)現(xiàn)大豆黃酮顯著增強(qiáng)蛋殼厚度、降低破殼率結(jié)論一致。Sahin等［8］研究報(bào)道，大豆黃酮可顯著改善產(chǎn)蛋后期日本鵪鶉骨密度和血清骨鈣素、血清維生素D、血鈣和血磷水平及堿性磷酸酶活性。

3.3 大豆黃酮對(duì)產(chǎn)蛋后期蛋雞繁殖器官的影響

雌禽的生殖系統(tǒng)包括卵巢和輸卵管2部分。禽類卵巢上聚集著數(shù)量龐大的卵泡，卵泡的生長發(fā)育與產(chǎn)蛋性能密切相關(guān)［17］。劉紅云［18］研究發(fā)現(xiàn)，大豆黃酮未顯著影響52周齡伊莎蛋雞排卵前卵泡數(shù)，這與本試驗(yàn)結(jié)果一致，這可能是由于排卵前卵泡已進(jìn)入排卵隊(duì)伍，數(shù)量相對(duì)恒定（6～7個(gè)），每天其中1個(gè)進(jìn)入輸卵管形成雞蛋；同時(shí)，其研究結(jié)果顯示大豆黃酮（10mg/kg）顯著增加了小黃卵泡數(shù)和大白卵泡數(shù)，而本試驗(yàn)研究得出小黃卵泡數(shù)和大白卵泡數(shù)未受大豆黃酮顯著影響，這可能是因?yàn)橛糜诒驹囼?yàn)的蛋雞周齡（59周齡）高于其試驗(yàn)蛋雞周齡（52周齡），卵泡發(fā)育相對(duì)成熟，可調(diào)控程度相對(duì)較低。小黃卵泡數(shù)和大白卵泡數(shù)作為影響產(chǎn)蛋性能的重要因素，其本身不受大豆黃銅影響，為何產(chǎn)蛋率被顯著提高，大豆黃酮與其的調(diào)控關(guān)系有待進(jìn)一步研究。

禽類輸卵管不僅是運(yùn)送卵子和受精的場所，同時(shí)也是形成蛋的卵白、殼膜、蛋殼、角質(zhì)薄膜的場所，并且它還具有能較長時(shí)間貯存精子的功能［17］。本試驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，大豆黃酮未顯著影響輸卵管長度，但顯著降低了輸卵管指數(shù)（輸卵管相對(duì)重量），顯著提高了產(chǎn)蛋率，胡順勇等［19］指出，輸卵管變粗變重會(huì)影響蛋雞產(chǎn)蛋率，可能是由于輸卵管變粗變重影響了卵泡在其中的運(yùn)輸。

4 結(jié) 論

① 產(chǎn)蛋后期蛋雞長期飼喂高劑量大豆黃酮對(duì)采食量、蛋品質(zhì)和繁殖器官發(fā)育沒有副作用。

② 大豆黃酮可以改善產(chǎn)蛋后期蛋雞蛋品質(zhì)。

③ 大豆黃酮對(duì)產(chǎn)蛋后期蛋雞產(chǎn)蛋率、產(chǎn)蛋量和料蛋比的最高限量建議值為72.50、46.50和59.52mg/kg。

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