黃 艷 林國強 江玉姬*

（1.武夷學院 茶與食品學院，福建 武夷山 354300；2.福建農(nóng)林大學 食品科學學院，福建 福州 350002）

竹蓀(Dictyophora indusiata)，又名竹笙、竹參，屬真菌門、擔子菌亞門、腹菌綱、鬼筆目、鬼筆科竹蓀屬真菌。素有“菌類皇后”之稱[1]的竹蓀因高蛋白、低脂肪、氨基酸種類齊全等特點而被譽為 “現(xiàn)代保健食品”及“十分好的蛋白質(zhì)來源”食品。除了食用價值，竹蓀還具有一定的藥用保健價值。相關(guān)研究[2-3]表明竹蓀可以減少促癌物質(zhì)和腸膜的接觸時間，從而起到預防消化道癌、結(jié)腸癌的作用；此外，它還可以有效預防動脈粥樣硬化、高血壓、糖尿病、心肌梗塞等慢性疾病的發(fā)生。

由于竹蓀具有較高的營養(yǎng)價值和藥用價值，且竹蓀具有良好的防腐效果[4]，近年來對竹蓀的研究成為食用菌科研工作者的重點研究課題之一。與香菇、金針菇等相比，竹蓀的培養(yǎng)相對較難，在液體培養(yǎng)基中，不易生長，發(fā)酵周期很長。目前，針對竹蓀液體培養(yǎng)所需的理化條件的摸索和短時間內(nèi)獲得大量營養(yǎng)菌絲體的研究報道已有一些，但并不多，國外的報道幾乎沒有。吳振強等[5]對長裙竹蓀進行了液體培養(yǎng)的研究，得出葡萄糖是最佳碳源，最適溫度是21～25℃，菌絲得率為1.10%(W/V)。杜顯光等[6]通過對長裙竹蓀液體培養(yǎng)所需物理、化學條件的初步研究，確定了長裙竹蓀菌絲體生長所需的一些理化條件，表明短時間內(nèi)要獲得大量菌絲體是可行的。竹蓀菌絲體的液體培養(yǎng)主要問題是適宜培養(yǎng)基的選擇、培養(yǎng)條件的控制以及培養(yǎng)液的開發(fā)利用等。

本試驗以竹蓀350和竹蓀D-8兩個菌株為材料，研究不同培養(yǎng)基、pH值、溫度及VB1濃度對這兩種菌株生長的影響，為竹蓀的液體發(fā)酵提供理論依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 供試菌株

竹蓀菌株：竹蓀350和竹蓀D-8，引自福建省蠶桑研究所食用菌站。

抑菌試驗供試菌株：大腸桿菌，金黃色葡萄球菌，引自福建農(nóng)林大學食品科學學院微生物實驗室。

1.1.2 試驗設(shè)備

不銹鋼手提式滅菌器DSX-280B型：上海申安醫(yī)療器械廠；不銹鋼電熱鼓風干燥箱DHG-9241A型：江蘇省金壇市大地自動化儀器廠；數(shù)顯恒溫水浴鍋HH-2型：江蘇省金壇市榮華儀器制造有限公司；智能型生化培養(yǎng)箱SPJ-250W型：江蘇省金壇市大地自動化儀器廠；單人凈化工作臺SW-CJ-2D型：蘇州凈化設(shè)備有限公司；全溫振蕩器ZHWY-211B型：廈門德維科技有限公司；DELTA-320 pH計：梅特勒-托利多儀器（上海有限公司）；電子天平LP1002B型：常熟市百靈天平儀器有限公司。

1.1.3 培養(yǎng)基配方

（1）馬鈴薯固體培養(yǎng)基(PDA固體培養(yǎng)基)

馬鈴薯 （去皮）200g，葡萄糖20g，磷酸二氫鉀0.3g，硫酸鎂 0.8g，瓊脂 18-20g，水 1000mL。

（2）黃豆粉固體培養(yǎng)基

馬鈴薯（去皮）200g，黃豆粉 50g，葡萄糖 20g，磷酸二氫鉀 0.3g，硫酸鎂0.8g，瓊脂18-20g，水1000mL。

（3）玉米粉固體培養(yǎng)基

馬鈴薯（去皮）200g，玉米粉 50g，葡萄糖 20g，磷酸二氫鉀 0.3g，硫酸鎂0.8g，瓊脂18-20g，水1000mL。

（4）麩皮固體培養(yǎng)基

馬鈴薯（去皮）200g，麩皮 50g，葡萄糖 20g，磷酸二氫鉀 0.3g，硫酸鎂 0.8g，瓊脂 18-20g，水 1000mL。

（5）牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基

牛肉膏 5g，蛋白胨 10g，NaCl5g，水 1000mL，瓊脂20g。

1.2 試驗方法

1.2.1 培養(yǎng)基制作

（1）馬鈴薯固體培養(yǎng)基（PDA固體培養(yǎng)基）

選擇質(zhì)量較好的馬鈴薯，削皮，去芽眼，切成小方塊，稱取200g，加少量水，煮沸后改小火煮30min，然后用8層沾濕紗布過濾，往濾液中加入瓊脂20g，葡萄糖20g，使其溶解后，攪勻，補足水至1000mL，最后分裝試管，塞好硅膠塞或棉花塞。以1.05kg/cm2（15磅/英寸 2），121.3℃，30min 滅菌，擺成斜面，備用。

（2）馬鈴薯液體培養(yǎng)基

其制作方法與其固體培養(yǎng)基的制作相同，但不用加瓊脂。制作完之后將其分裝在300mL三角瓶中，每瓶裝量為100mL，滅菌備用。

（3）黃豆粉固體培養(yǎng)基

在PDA培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上按比例加入黃豆粉溶解均勻，分裝試管，其它步驟同PDA固體培養(yǎng)基的制作。

（4）玉米粉固體培養(yǎng)基

在PDA培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上按比例加入玉米粉溶解均勻，分裝試管，其它步驟同PDA固體培養(yǎng)基的制作。

（5）麩皮固體培養(yǎng)基

稱取50g麩皮放入已制好的1000mL PDA液體培養(yǎng)基中，用小火煮5-10min左右，過濾，將濾液加入瓊脂溶解，分裝試管，其它步驟同PDA固體培養(yǎng)基的制作。

（6）牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基

按培養(yǎng)基配方比例依次準確地稱取牛肉膏、蛋白胨、NaCl、瓊脂放入燒杯中，加入所需要的水量，在石棉網(wǎng)上加熱使其溶解，用1mol/L NaOH或1mol/L HCl調(diào)pH至7.6。將配制的培養(yǎng)基分裝入三角燒瓶內(nèi)，每瓶裝 150mL，以 1.05kg/cm2（15 磅/英寸 2），121.3℃，滅菌30min，備用。

1.2.2 試驗菌種的培養(yǎng)

（1）竹蓀的培養(yǎng)：在無菌室中將竹蓀350和竹蓀D-8分別轉(zhuǎn)接到PDA試管斜面培養(yǎng)基，在25℃生化培養(yǎng)箱內(nèi)連續(xù)活化3次，第三次每個菌株分別轉(zhuǎn)接20支備用。

（2）大腸桿菌和金黃色葡萄球菌的培養(yǎng)：在無菌室中將供試菌種接入相對應(yīng)的牛肉膏蛋白胨斜面，置于37℃恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)18-24h，備用。

1.2.3 濾紙圓片的準備

用打孔器將新華1號定性濾紙打成直徑6mm的小圓片，于培養(yǎng)皿中160℃干熱滅菌1-2h。

1.2.4 不同培養(yǎng)基對竹蓀菌絲生長的影響

將竹蓀350和竹蓀D-8斜面種分別切成大小約為5mm×5mm的小菌塊，分別接在馬鈴薯斜面培養(yǎng)基、玉米粉斜面培養(yǎng)基、麩皮斜面培養(yǎng)基、黃豆粉斜面培養(yǎng)基中，每種培養(yǎng)基每個菌種各接5支，在25℃生化培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，測定每種菌株菌絲的生長速度，確定每種菌株生長的最適培養(yǎng)基。

1.2.5 不同pH值對竹蓀菌絲生長的影響

根據(jù)上述篩選出來的兩種培養(yǎng)基，進一步測定不同pH值對竹蓀菌絲生長的影響。用酸度計將培養(yǎng)基的 初 始 pH 值 調(diào) 至 5.00、5.50、6.00、6.50、7.00、7.50、8.00七個梯度，每個梯度每個菌株5個重復，接種方法、培養(yǎng)條件同1.2.4。測定每種菌株菌絲的生長速度，確定每種菌株生長的最適pH值。

1.2.6 不同溫度對竹蓀菌絲生長的影響

在所篩選出來的兩種培養(yǎng)基中，測定不同溫度對竹蓀菌絲生長的影響。溫度設(shè)16℃、19℃、22℃、25℃、28℃、31℃、34℃七個梯度，每個梯度每個菌株5個重復，接種方法同1.2.4，接種完畢，分別置于相應(yīng)溫度的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。測定每種菌株菌絲的生長速度，確定每種菌株生長的最適溫度。

1.2.7 不同濃度VB1對竹蓀菌絲生長的影響

在所篩選出來的兩種培養(yǎng)基中，分別加入濃度為0.005% 、0.010% 、0.015% 、0.020% 的 VB1，以 VB1濃度為0作為對照。接種方法同1.2.4。接種完畢，置于每種菌株生長的最適溫度下恒溫培養(yǎng)，測定每種菌株菌絲的生長速度。

1.2.8 竹蓀菌絲生長速度測量方法

菌絲生長速度采用直接測定法，即在菌絲萌發(fā)后對其邊緣畫線，幾天后再對其邊緣畫線，用刻度尺測量兩條線的平均距離，除以天數(shù)即為竹蓀的生長速度，單位為 mm/d，(d：day)。

1.2.9 差異顯著性分析

采用DPS軟件進行數(shù)據(jù)處理。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同培養(yǎng)基對竹蓀菌絲生長速度的影響

竹蓀的生長與營養(yǎng)成分有關(guān)，本試驗設(shè)計了4種培養(yǎng)基進行對比，結(jié)果見表1。

由表1可知，竹蓀350在麩皮和馬鈴薯培養(yǎng)基生度速度最快，而且二者無顯著差異；對于竹蓀D-8，同樣也是麩皮和馬鈴薯培養(yǎng)基生度速度最快，而且二者無顯著差異，因此，既可選擇麩皮也可選擇馬鈴薯培養(yǎng)基作為以下試驗的培養(yǎng)基質(zhì)。本試驗選用兩種培養(yǎng)基，進一步測定其它因素對竹蓀菌絲生長的影響。

表1不同培養(yǎng)基對竹蓀菌絲生長速度的影響Tab.1 The effects of media ingredients on mycelial growth of Dictyophora indusiata

2.2 不同pH值對竹蓀菌絲生長速度的影響

大多數(shù)食用菌在微酸和中性pH條件下長勢良好，而在堿性條件下生長緩慢。竹蓀在不同pH條件下，在麩皮和馬鈴薯兩種培養(yǎng)基中的生長速度見表2和表3。

表2麩皮培養(yǎng)基下不同pH值對竹蓀菌絲生長速度的影響Tab.2 The effects of pH on mycelial growth of Dictyophora indusiata

表3馬鈴薯培養(yǎng)基下不同pH值對竹蓀菌絲生長速度的影響Tab.3 The effects of pH on mycelial growth of Dictyophora indusiata

由表2可知，在麩皮培養(yǎng)基中，竹蓀350和在竹蓀D-8都是在pH6.0和pH5.5中長勢最好，而且二者無顯著差異。

由表3可知，在馬鈴薯培養(yǎng)基中，竹蓀350在pH5.5和pH6.0中長勢最好，而且二者無顯著差異；對于竹蓀D-8，同樣也在pH6.0和pH5.5中長勢最好，而且二者無顯著差異。這與相關(guān)資料研究的其他竹蓀品種在pH5.5-6.0生長速度最快是相符的[10]。

2.3 不同溫度對竹蓀菌絲生長速度的影響

不同溫度對竹蓀生長的影響見表4和表5。

表4麩皮培養(yǎng)基下不同溫度對竹蓀菌絲生長速度的影響Tab.4 The effects of temperature on mycelial growth of Dictyophora indusiata

表5馬鈴薯培養(yǎng)基下不同溫度對竹蓀菌絲生長速度的影響Tab.5 The effects of temperature on mycelial growth of Dictyophora indusiata

由表4可知，竹蓀350在麩皮培養(yǎng)基中，25℃和22℃條件長勢最好，而且二者無顯著差異；竹蓀D-8在麩皮培養(yǎng)基中，則25℃條件長勢最好，25℃與其它溫度差異顯著。

由表5可知，竹蓀350在馬鈴薯培養(yǎng)基中，25℃和28℃條件下長勢最好，而且二者無顯著差異；竹蓀D-8在馬鈴薯培養(yǎng)基中，25℃條件下長勢最好，25℃與其他溫度差異顯著。

2.4 不同VB1濃度對竹蓀菌絲生長速度的影響

本試驗所用的VB1是從藥店所買的VB1片。不同VB1濃度對竹蓀菌絲生長的影響如表6和表7所示。

由表6可知，竹蓀350在麩皮培養(yǎng)基中，對照組的長勢最好而且與其它濃度的VB1差異顯著；竹蓀D-8在麩皮培養(yǎng)基中，同樣也是對照組的長勢最好而且與其它濃度的VB1差異顯著。說明在本試驗濃度下，VB1會抑制竹蓀菌絲的生長。

表6麩皮培養(yǎng)基下不同VB1濃度對竹蓀菌絲生長速度的影響Tab.6 The effects of VB1 on growth of Dictyophora indusiata

表7馬鈴薯培養(yǎng)基下不同VB1濃度對竹蓀菌絲生長速度的影響Tab.7 The effects of VB1 on growth of Dictyophora indusiata

由表7可知，竹蓀350在馬鈴薯培養(yǎng)基中，CK、0.005%、0.010%、0.015%的VB1濃度下竹蓀菌絲的長勢都很好，無顯著差異，與0.20%VB1差異顯著；說明VB1濃度過高，抑制竹蓀350菌絲生長的作用越強。在本試驗濃度下，VB1對竹蓀D-8無顯著抑制作用。

由表6和表7可知，在配制培養(yǎng)基時，不需要添加VB1。

3 結(jié)論

3.1 馬鈴薯培養(yǎng)基和麩皮培養(yǎng)基是竹蓀生長的良好基質(zhì)，可以用于今后試驗竹蓀的液體發(fā)酵培養(yǎng)。由于麩皮培養(yǎng)基的制作過程相對馬鈴薯培養(yǎng)基復雜，因此可選擇馬鈴薯培養(yǎng)基。

3.2 不同竹蓀菌株對pH要求比較一致，最適pH范圍為5.50～6.00。竹蓀生長的條件受溫度影響也很大，試驗發(fā)現(xiàn)竹蓀在16～34℃都能生長，以25℃最佳。

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