索明環(huán)，溫冬梅，張秀明，吳劍楊，陳亞瓊，徐全中（中山大學附屬中山醫(yī)院檢驗醫(yī)學中心，廣東中山 528403）

血紅蛋白病是我國長江以南發(fā)病率最高、危害最大的一類人類遺傳性溶血性血液病，目前為止該病還無有效的治療方法，通過產前篩查預防受累重型胎兒的出生是目前公認最為有效的對策。血紅蛋白電泳是一種常用的血紅蛋白病篩查手段，通過電泳能夠定量檢測HbA、HbF、HbA2含量以及其他異常血紅蛋白，用于輔助診斷珠蛋白生成障礙性貧血（地貧）和異常血紅蛋白?。?－2］?，F(xiàn)回顧本院2011年1月至2012年6月以來進行血紅蛋白電泳檢測的資料，并計算其與基因檢測結果的符合率，以便對以后工作進行指導，進一步提高對血紅蛋白病的篩查效能。

1 資料與方法

1.1 研究對象 2011年1月至2012年6月來自本院和外院1歲以上進行血紅蛋白電泳檢測的患者。收集患者資料，進行總結歸類，計算疑似α、β地貧及異常血紅蛋白病患者數(shù)。經過臨床醫(yī)生篩選，這些患者平均紅細胞體積（MCV）≤82fL和（或）平均紅細胞血紅蛋白濃度（MCH）≤27pg/fL。

1.2 方法

1.2.1 標本準備 乙二胺四乙酸二鉀（EDTA－K2）抗凝血或肝素抗凝血3mL，離心5min（5 000r/min），吸去血漿層及白細胞層，搖勻備用。

1.2.2 HbA2定量檢測 采用法國Sebia公司生產的Sebia Cappilarys 2型全自動毛細管電泳分析儀及廠家提供的配套試劑及配套質控品。在9.8kV電壓、pH 9.4的緩沖液條件下，8條并聯(lián)的石英毛細管內進行血紅蛋白電泳，用415μm波長直接檢測血紅蛋白個組分的含量。檢測標本前首先做7次室內質控。室內質控在控后進行患者標本檢測，每13例患者插入一個質控品，保證檢測全過程都處于在控狀態(tài)。

1.2.3 基因檢測 全血基因組提取試劑盒和α、β基因診斷試劑盒均由深圳益生堂公司公司提供。擴增儀為PT－2000PCR儀。檢測中國人常見的3種缺失型α地貧（－－SEA/αα，－α3.7/αα，－α4.2/αα）和中國人常見的β地貧17個位點突變基因型（41－42N，654N，－28N，71－72N，17N，CD26M，31N，27/28M，41－42M，654M，－28M，71－72M，17M，βEM，31M，IVS1－1M，43M，－32M，－29M，－30M，14－15M，CAP，IntM，IVS1－5M）。

1.2.4 判斷標準［3］當 HbA2＜2.5和（或）出現(xiàn) HbH，Hb－Bart′s或Hb Constant Spring，并未出現(xiàn)其他異常血紅蛋白帶，初步判斷該患者疑似α地貧患者；當2.5≤ HbA2≤3.5，并未出現(xiàn)異常血紅蛋白帶，初步判斷該患者非α，β地貧患者，HbA2＞3.5和（或）HbF帶升高，則初步判斷該患者為β地貧患者。出現(xiàn)異常血紅蛋白帶比如HbE、HbD、HbS、HbC、HbJK等則判斷為異常血紅蛋白病。

2 結 果

2.1 人群分布 2011年1月至2012年6月以來共檢測血紅蛋白電泳標本11 519例，年齡分布在1～71歲，18～35歲占89%。其中男140例，占1.22%，女11 379例，占98.78%，患者主要來自產前診斷中心及血液內科。

2.2 血紅蛋白電泳結果 11 519例患者中，通過法國Sebia毛細管電泳儀篩查出1 193例疑似血紅蛋白病患者，檢出率10.36%，其中疑似α地貧患者395例，占3.43%。疑似α地貧者中出現(xiàn)HbH帶2例，同時出現(xiàn)HbH和HbBart′s帶19例，出現(xiàn)Hb Constant Spring共7例。疑似β地貧患者755例，占6.55%。HbE變異體檢出18例，占0.16%，HbJ－K變異體檢出20例，占0.17%，HbN帶1例，HbD帶4例。見表1。

2.3 地貧基因檢測結果 血紅蛋白電泳篩查出的1 193例陽性患者中，有357例進行了α地貧基因檢測，而與基因結果相符的僅有268例，符合率75.07%，而HbH的符合率達到100%。有419例進行了β地貧基因檢測，408例與基因檢測結果相符，符合率達97.37%。但是16例血紅蛋白電泳篩查為β地貧的患者，基因檢測顯示該患者為α合并β地貧患者。有8例HbE變異體患者同時做了基因檢測，全部檢出CD26M，符合率100%，并且有1例同時合并了β地貧基因的其他變異。

3 討 論

血紅蛋白病是一組遺傳性疾病，如果夫妻雙方為同型地貧則有可能造成子代的重型地貧。重癥β地貧的兒童患有嚴重貧血、黃疸、脾臟腫大、骨變形、生長遲緩，需要輸血維持生命，通常在青春期前死亡。廣東省是該病的高發(fā)區(qū)，α地貧發(fā)生率8.53%，β地貧發(fā)生率2.54%，α合并β地貧發(fā)生率0.26%［4］。目前該病無有效的治療方法，主要通過產前診斷避免中、重型地貧兒出生。

血紅蛋白電泳是目前產前篩查地貧及異常血紅蛋白病的一種重要的方法。本實驗室采用了法國Sebia Capillarys 2電泳儀進行血紅蛋白電泳檢測，具有較好的可靠性［5］。而通過對11 519例電泳結果的分析發(fā)現(xiàn)：（1）廣東地區(qū)α地貧發(fā)生率比β地貧要高，但通過血紅蛋白電泳篩查，α地貧發(fā)生率低于β地貧的發(fā)生率。這可能是因為一些標準型和靜止性α地貧患者其MCV、MCH及HbA2是正常的，通過血紅蛋白電泳不能篩查出這些患者，故致使α地貧發(fā)生率降低。另外本組資料顯示，α地貧發(fā)生率3.43%，β地貧發(fā)生率6.55%，與Xu等 的結果有所差異，這可能與調查人群不同有關。（2）毛細管電泳可以很好地篩查出異常血紅蛋白，這組資料中發(fā)現(xiàn)Hb Constant Spring條帶7例，HbE條帶18例，并且HbE與基因檢測的符合率可達到100%。而本實驗室并未開展非缺失α地貧及其他異常血紅蛋白基因檢測，無法計算符合率，下一步的工作是開展這些檢測來彌補這一缺陷。（3）本組資料顯示，α地貧與基因檢測的符合率僅有75.07%，而β地貧的符合率高達97.37%，該結果與文獻［6］報道基本一致。這可能是因為血紅蛋白電泳不能區(qū)分缺鐵性貧血，自身免疫性溶血性貧血或其他血紅蛋白合成障礙性疾病，也可造成MCV、MCH及HbA2的減低［7－8］。這說明毛細管電泳篩查β地貧的效能要優(yōu)于α地貧。（4）本組資料顯示16例電泳篩查為β地貧的患者，基因檢測顯示該患者為α合并β地貧患者，這說明當HbA2升高時不能排除α合并β地貧的可能。

盡管如此，血紅蛋白電泳作為一種篩查指標在篩查血紅蛋白病方面有著重要作用?！稄V東省衛(wèi)生廳產前診斷技術管理實施細則》中明確了地貧產前診斷技術規(guī)范，包括了血細胞分析、血紅蛋白分析和基因診斷。血細胞分析用于初篩，進一步進行血紅蛋白分析，結果異常者才進行基因診斷以便確診。實施細則中指出當HbA2降低時，首先檢測血清鐵以排除缺鐵性貧血，當血清鐵正常時才懷疑α地貧。按照這一流程，可以降低α地貧的誤篩率，提高血紅蛋白電泳的篩查效能。血紅蛋白病篩查是一個有序的過程，執(zhí)行好這3個過程，做好地中海貧血及異常血紅蛋白病的篩查是每個產前診斷中心重要任務之一。

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