江蘇 王彩玉

《醫(yī)學(xué)微生物學(xué)》是一門(mén)重要的基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)課程，《醫(yī)學(xué)微生物學(xué)》實(shí)驗(yàn)教學(xué)是整門(mén)課程中相當(dāng)重要的組成部分。實(shí)驗(yàn)教學(xué)中涉及的實(shí)驗(yàn)標(biāo)本多為活的細(xì)菌，由于細(xì)菌毒力強(qiáng)、易變異、易污染、培養(yǎng)結(jié)果出現(xiàn)慢，準(zhǔn)備1次實(shí)驗(yàn)往往要花費(fèi)幾天時(shí)間，而一般衛(wèi)生類(lèi)高職校實(shí)驗(yàn)室設(shè)備及實(shí)驗(yàn)室人員配備不足，所以給實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備帶來(lái)了一定困難。筆者針對(duì)微生物實(shí)驗(yàn)以示教為主的特點(diǎn)，根據(jù)多年實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備的經(jīng)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)部分實(shí)驗(yàn)可以用替代的方法來(lái)解決開(kāi)設(shè)實(shí)驗(yàn)時(shí)示教標(biāo)本難取的困難，介紹如下。

1 銅綠假單胞菌色素觀察

由于能產(chǎn)生典型藍(lán)綠色色素的銅綠假單胞菌在臨床上并不多見(jiàn)，實(shí)驗(yàn)時(shí)常取不到新鮮菌種。此時(shí)，可以根據(jù)銅綠假單胞菌產(chǎn)生水溶性藍(lán)綠色色素的特點(diǎn)，用普通瓊脂培養(yǎng)基溶化后加入綠色水彩粉混勻制成固體斜面，然后在斜面上涂上大腸桿菌（取材方便）菌苔，稍加培養(yǎng)即可達(dá)到實(shí)驗(yàn)效果。

2 硫化氫試驗(yàn)

真正的硫化氫試驗(yàn)在培養(yǎng)基配制和菌種來(lái)源上都存在一定困難?？梢愿挠酶邔与p糖鐵培養(yǎng)基代替醋酸鉛培養(yǎng)基，乙型副傷寒沙門(mén)菌在雙糖鐵培養(yǎng)基上產(chǎn)生的黑色沉淀的結(jié)果，可用帶7號(hào)針頭的注射器吸取少量黑墨水垂直刺入尚未完全凝固的培養(yǎng)基底部緩緩注入，使之呈現(xiàn)黑色穿刺線，然后在上面接種少量葡萄球菌，培養(yǎng)24小時(shí)即可達(dá)到與硫化氫試驗(yàn)相似的實(shí)驗(yàn)效果。

3 糖發(fā)酵試驗(yàn)

糖發(fā)酵試驗(yàn)包括葡萄糖發(fā)酵試驗(yàn)、麥芽糖發(fā)酵試驗(yàn)、甘露醇發(fā)酵試驗(yàn)、蔗糖發(fā)酵試驗(yàn)、乳糖發(fā)酵試驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)時(shí)要將細(xì)菌接種于糖發(fā)酵管內(nèi)，根據(jù)細(xì)菌分解糖的分解能力不同用于鑒別細(xì)菌。原理是細(xì)菌如能分解糖，則產(chǎn)生酸性物質(zhì)、糖發(fā)酵管內(nèi)酸堿度下降，使糖發(fā)酵管中溴甲酚紫從紫色變成黃色，若分解糖后產(chǎn)生氣體，則在糖發(fā)酵管的小套管內(nèi)出現(xiàn)小氣泡。如果沒(méi)時(shí)間準(zhǔn)備各種糖發(fā)酵示教管，可以利用指示劑因酸堿度不同而呈現(xiàn)不同顏色的特點(diǎn)進(jìn)行直接顯色，即直接在糖發(fā)酵管內(nèi)滴加稀鹽酸，使酸堿度下降，使糖發(fā)酵管中溴甲酚紫從紫色變成黃色，小套管中氣泡可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要排盡或放入，為了求得實(shí)驗(yàn)的真實(shí)性，在調(diào)試顏色前可以在肉湯管內(nèi)接種葡萄球菌并培養(yǎng)24小時(shí)，以顯示液體混濁。

4 吞噬細(xì)胞的吞噬作用

這實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備要將細(xì)菌注入小白鼠腹腔，再抽取腹腔液涂片、鏡檢。此實(shí)驗(yàn)困難的主要問(wèn)題是小白鼠腹腔液難以吸取，且觀察到的吞噬效果較差。如果直接將葡萄球菌液加入人血觀察，效果也很好。具體方法是在實(shí)驗(yàn)前到醫(yī)院取2ml新鮮抗凝血，加入含菌量適中的葡萄球菌液1ml，混勻后置37℃30分鐘，取出后作血推片，自然干燥后瑞氏染色或用甲、乙快速染色液染色，干后鏡檢。

5 豚鼠過(guò)敏試驗(yàn)

此實(shí)驗(yàn)在實(shí)驗(yàn)前需先將馬血清注入豚鼠體內(nèi)，使之致敏，實(shí)驗(yàn)時(shí)再在豚鼠心臟內(nèi)注入馬血清使之發(fā)敏。實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備過(guò)程復(fù)雜、且需一定時(shí)間，一旦實(shí)驗(yàn)失敗，難以補(bǔ)救。為了應(yīng)急處理，可以在實(shí)驗(yàn)演示時(shí)直接用組織胺代替馬血清注入豚鼠心臟，約1分鐘后即出現(xiàn)與Ⅰ型超敏反應(yīng)相同的現(xiàn)象。

6 抗酸染色法

做這項(xiàng)實(shí)驗(yàn)要取結(jié)核病人的痰標(biāo)本，目前陽(yáng)性標(biāo)本難以取到，即使取到也易造成污染。為了提高實(shí)驗(yàn)效果、減少對(duì)學(xué)生感染的危險(xiǎn)，可用卡介苗代替結(jié)核病人的痰標(biāo)本，在實(shí)驗(yàn)時(shí)取3支卡介苗液加入3m l肉湯管內(nèi)放入溫箱加溫2小時(shí)，取出后充分吹打混勻，然后涂片、染色、鏡檢。

7 玻片凝集試驗(yàn)

按要求玻片凝集試驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)材料為傷寒沙門(mén)菌及相應(yīng)的診斷血清，如果讓學(xué)生自己使用這些材料進(jìn)行實(shí)驗(yàn)易造成感染，而且要耗去較多的傷寒診斷血清。可以用金黃色葡萄球菌與血漿發(fā)生凝固的現(xiàn)象來(lái)代替，這樣既安全又能明顯顯示凝集現(xiàn)象。同理，反向間接凝集試驗(yàn)所用的乙型肝炎陽(yáng)性血清可改用新鮮的胎盤(pán)血清，這樣取材既方便又不易造成污染。

8 血凝與血凝抑制試驗(yàn)

按要求做這項(xiàng)病毒實(shí)驗(yàn)較困難，可根據(jù)病毒的血凝原理直接用雞瘟病毒懸液（市售雞瘟V粉劑+5mlNS）作倍比稀釋后加0.5%雞紅細(xì)胞，這樣得出的結(jié)果與用病毒培養(yǎng)的尿囊提出液做的結(jié)果一樣。在做血凝抑制實(shí)驗(yàn)時(shí)，方法更簡(jiǎn)單，只要把做血凝試驗(yàn)的管號(hào)倒排就是血凝抑制結(jié)果。當(dāng)然，這些都只能在準(zhǔn)備室里做好后給學(xué)生看，而且血凝的時(shí)間要掌握恰當(dāng)。

綜上所述，用因地制宜、以簡(jiǎn)代繁的方法代替部分微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)，不僅可以克服實(shí)驗(yàn)材料不足、設(shè)備簡(jiǎn)陋的困難，而且可以節(jié)約時(shí)間，節(jié)省實(shí)驗(yàn)費(fèi)用；同時(shí)還可以用于預(yù)實(shí)驗(yàn)失敗時(shí)的應(yīng)急處理。不過(guò)需要強(qiáng)調(diào)的是為了讓學(xué)生有完整系統(tǒng)的概念，在進(jìn)行示教操作時(shí)一定要嚴(yán)格按照實(shí)驗(yàn)操作規(guī)范要求進(jìn)行，將替代的標(biāo)本巧妙地溶入實(shí)驗(yàn)過(guò)程，以起到較好的實(shí)驗(yàn)效果。