方文富 郭海坤 胡發(fā)明 林 靜 鄧群芳 王麗蓉 黃文英 賴福平 丁維凱 郭 俊

（福建農(nóng)林大學(xué)蜂學(xué)學(xué)院，福州金山 350002）

蜂花粉是蜜蜂主要的蛋白質(zhì)營養(yǎng)來源。在科學(xué)養(yǎng)蜂中，當外界缺乏花粉時常常通過補充飼喂人工花粉代用品來彌補粉源的不足，促進蜂群繁殖和提高蜂王漿產(chǎn)量。目前，人工花粉代用品已成為科學(xué)飼養(yǎng)蜜蜂重要的蛋白質(zhì)補充飼料[1-3]。有關(guān)人工花粉代用品及其添加劑對蜜蜂的作用前人也作了一些有益的探討[4-15]，即豐富了蜜蜂營養(yǎng)相關(guān)生理學(xué)理論，又為養(yǎng)蜂生產(chǎn)采用適合的人工花粉代用品提供了科學(xué)依據(jù)。本文試圖通過采用不同配比油菜花粉與黃豆粉的人工花粉代用品飼喂蜜蜂，就其對意大利蜜蜂所產(chǎn)蜂王漿的10-羥基-癸烯酸（10-HDA）、粗蛋白、灰分和水分等含量的影響進行探討，以為研制更為科學(xué)的蜜蜂人工花粉代用品提供借鑒。

1 材料與方法

本實驗于2009年3～5月在福州西郊福建農(nóng)林大學(xué)蜂學(xué)學(xué)院教學(xué)蜂場進行。

1.1 實驗材料

1.1.1 實驗蜂群

實驗蜂群為福州本地意大利蜜蜂（Apis mellifera ligustica，簡稱“意蜂”），40群，蜂群遺傳性狀一致，群勢 1 足框，采用1/2脾蜂箱飼養(yǎng)。實驗蜂群分 5 組，每組 8 群。實驗期間，實驗群巢門均安裝蜂花粉采集器（脫粉板圓孔直徑4.9 mm），防止蜜蜂把天然花粉帶進蜂巢，并同時開始飼喂實驗用人工蛋白質(zhì)飼料。

1.1.2 實驗用蛋白質(zhì)飼料

油菜（Brassica napusL.）花粉2007年產(chǎn)自甘肅省民樂縣。

黃豆（Glycine max Merrill）粉來自杭州市蕭山區(qū)靖江鎮(zhèn)；直徑0.3 mm。

實驗用蛋白質(zhì)飼料由油菜花粉與黃豆粉按不同比例混合而成。1號飼料：100%花粉，2 號飼料：75%花粉、25%黃豆粉，3 號飼料：50%花粉、50% 黃豆粉，4 號飼料：25%花粉、75%黃豆粉，5 號飼料：100%黃豆粉。

1.2 實驗方法

1.2.1 人工蛋白質(zhì)飼料飼喂方法

實驗時，在各實驗蜂群分別安裝 1 個巢門蜂花粉采集器，截留工蜂從外界攜帶返巢的花粉，當日開始分別飼喂不同蛋白質(zhì)飼料，飼喂時將人工蛋白質(zhì)飼料制成花粉餅，置于蜂群內(nèi)巢框上梁供蜜蜂自由采食，飼喂的量以略有剩余為度，每 3 d 飼喂 1次，持續(xù)到實驗結(jié)束為止。

1.2.2 實驗樣本的提取

1.2.2.1 意大利蜜蜂蜂王漿樣本的提取

生產(chǎn)供試蜂王漿在不同實驗蜂群同一時間進行。方法是：在生產(chǎn)供試蜂王漿前 1 d 用王籠將實驗群蜂王扣起來。然后，按常規(guī)方法移蟲產(chǎn)漿。所生產(chǎn)王漿分別裝入大號Eppendorf 管，做好標記，并馬上放入有冰塊的保溫杯中，取漿結(jié)束后，統(tǒng)一冷凍保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.3 蜂王漿中10-HDA含量的測定方法

采用高效液相色譜法測蜂王漿中10-HDA的含量。方法是：

（1）樣液的制備 樣品解凍至室溫后用玻璃棒攪勻，取約0.5 g，置已稱重的50 mL容量瓶中，精密稱定，加0.03 mol/L 鹽酸 1 mL 和水 2 mL，加純甲醇30 mL，邊加入邊輕輕搖動，再精密加入內(nèi)標溶液（每毫升含對羥基苯甲酸甲酯約0.65 mg）10 mL，并用純甲醇稀釋至刻度，搖勻，置超聲波浴中超聲15 min，放置冰箱過夜后測定。

（2）色譜條件 測定波長：210 nm；柱溫度：35℃；流動相（純甲醇＋0.03 mol/L 鹽酸＋重蒸餾水）流速：1 mL/min。

（3）校正因子的測定 精密吸取10-HDA標準溶液0.5、1、2、3、4、5 mL 至10 mL 容量瓶中。精密加入內(nèi)標溶液 2 mL，用純甲醇稀釋至刻度，搖勻。分別吸取此溶液 2 uL。注入色譜儀，用峰面積比值計算，應(yīng)呈線性，求出校正因子 F 。

（4）試樣測定 吸取試樣溶液 4 uL，注入色譜儀，按“內(nèi)標法”定量。

1.2.4 王漿中粗蛋白含量的測定方法

采用凱氏定氮法測定粗蛋白含量。方法是：

（1）配制藥品 用電子天平稱取樣品，將待測樣品與濃硫酸（20 mL）、CuSO4（0.5 g）和K2SO4（4.5 g）放入消化管中。一部份的消化管裝只濃硫酸（20 mL）、CuSO4（0.5 g）和K2SO4（4.5 g）留作空白。

（2）硝化 儀器預(yù)熱 5 min 后，將裝好藥品的硝化管放入消化儀器中消化 2 h。硝化結(jié)束，冷卻30 min。

（3）蒸餾 儀器預(yù)熱后開始蒸餾。加入適量蒸餾水，再加入適量33%氫氧化鈉溶液。用裝有20 mL 2%硼酸、3～5 滴甲基紅—溴甲酚綠混合指示劑的錐形瓶作為吸收液接取蒸餾物質(zhì)。

（4）滴定 將吸收液用一定濃度的鹽酸標準溶液滴定至由藍綠色變?yōu)榉凵珵榻K點。

（5）記錄 計算出樣品含氮量。每個樣品做3次重復(fù)測定，取平均值。

1.2.5 王漿中灰分含量的測定方法

采用硫酸鹽法測定。方法是：精密稱取蜂王漿試樣約1.5 g置于已灼燒至恒重并知其精確質(zhì)量的瓷坩堝中，在電爐上緩緩灼燒至完全炭化，冷卻至室溫，加入硫酸0.5～l mL，使其濕潤，低溫加熱至硫酸蒸汽除后，放入高溫爐，在700～800℃下灼燒至完全炭化，冷至200℃以下后取出放路干燥器內(nèi)冷卻至室溫。精確稱量后在放入高溫電爐反復(fù)灼燒至恒重（前后兩次質(zhì)量差＜0.0003）為止。

1.2.5 王漿中水分含量的測定方法

采用常壓干燥法。方法是：精確稱取蜂王漿1～2 g，放入已干燥至恒重并知其精確質(zhì)量的稱量瓶中，并置于電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱中，溫度控制在100～105℃。烘 2 h，取出放入干燥器內(nèi)冷卻至室溫，稱量，再烘 1 h，取出放入干燥器中，冷卻、稱量，重復(fù)此操作至前后兩次質(zhì)量差不超過0.0002 g，即完成測定。

1.3 實驗數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析方法

1.3.1 王漿中10-HDA含量計算方法

式中：X：王漿中10-HDA含量（%）；F：校正因子；As：試樣中內(nèi)標物峰面積；Ai：試樣中被測組分峰面積；Ms：內(nèi)標物質(zhì)量（g）；M1：試樣質(zhì)量（g）。

1.3.2 王漿中蛋白質(zhì)含量的計算方法

式中：X：蜂王漿中蛋白質(zhì)含量（%）；0.014：氮的毫摩爾質(zhì)量；c：鹽酸標準溶液的濃度（mol/L）；m：樣本的質(zhì)量（g）；V：樣本消耗標準鹽酸的體積（mL）；V0：空白樣本消耗標準鹽酸的體積（mL）；n：稀釋倍數(shù)

1.3.3 王漿中灰分含量的計算方法

式中：X：蜂王漿灰分（%）；M1：坩堝和樣品的重量（g）；M2：恒重后坩堝和灰分的質(zhì)量（g）；M3：灼燒至恒重的坩堝重量（g）。

1.3.4 王漿中水分含量的計算方法

式中：X：蜂王漿水分（%）；M1：稱量瓶和試樣的質(zhì)量（g）；M2：恒重后稱量瓶和試樣的質(zhì)量（g）；M3：稱量瓶的質(zhì)量（g）。

1.3.5 差異顯著性統(tǒng)計分析方法

采用SPSS17.0統(tǒng)計軟件進行 F 檢驗統(tǒng)計分析實驗數(shù)據(jù)的差異顯著性。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同配比油菜花粉與黃豆粉飼料對王漿中10-HDA含量影響的實驗和統(tǒng)計分析結(jié)果

飼喂5 種不同配比油菜花粉與黃豆粉飼料對意蜂王漿中 10-HDA 含量影響的實驗和統(tǒng)計結(jié)果顯示：飼喂不同配比油菜花粉與黃豆粉飼料意蜂所產(chǎn)王漿中的 10-HDA 含量之間差異不顯著（P＞0.05）。說明不同配比油菜花粉與黃豆粉飼料對王漿中 10-HDA 含量基本不產(chǎn)生影響（表 1 ）。

表1 不同配比油菜花粉與黃豆粉飼料對意蜂王漿10-HDA含量影響的實驗結(jié)果（± s ）

表1 不同配比油菜花粉與黃豆粉飼料對意蜂王漿10-HDA含量影響的實驗結(jié)果（± s ）

注：1）小寫字母表示差異達顯著水平。

處理 n 10-HDA 平均含量（%）3 號飼料 5 1.6700±0.2453 a1）2 號飼料 4 1.6250±0.1066 a 1 號飼料 4 1.6050±0.2342 a 4 號飼料 5 1.5280±0.1522 a 5 號飼料 5 1.3540±0.2730 a

2.2 飼喂不同配比油菜花粉與黃豆粉飼料對意蜂王漿粗蛋白含量影響的實驗和統(tǒng)計分析結(jié)果

飼喂5 種不同配比油菜花粉與黃豆粉飼料對意蜂王漿中粗蛋白含量影響的實驗和統(tǒng)計結(jié)果顯示：飼喂 5 號飼料的王漿粗蛋白含量極顯著高于飼喂1、2、3、4 號飼料的（P＜0.01）；飼喂 4 號飼料的王漿粗蛋白含量極顯著高于飼喂 1、2、3 號飼料的（P＜0.01）；飼喂 3 號飼料的王漿粗蛋白含量極顯著高于飼喂 1 號飼料的（P＜0.05），顯著高于飼喂 2 號飼料的（P＜0.01）；飼喂 2 號飼料的王漿粗蛋白含量顯著高于飼喂 1 號飼料的（P＜0.05）。說明不同配比油菜花粉與黃豆粉飼料對意蜂王漿的粗蛋白含量影響顯著，蛋白質(zhì)飼料中黃豆粉的含量越多，生產(chǎn)的王漿中粗蛋白含量越高（表 2）。

2.3 飼喂不同配比油菜花粉與黃豆粉飼料對意蜂王漿灰分含量影響的實驗和統(tǒng)計分析結(jié)果

表2 不同配比油菜花粉與黃豆粉飼料對意蜂王漿粗蛋白含量影響的實驗和統(tǒng)計分析結(jié)果（± s ）

表2 不同配比油菜花粉與黃豆粉飼料對意蜂王漿粗蛋白含量影響的實驗和統(tǒng)計分析結(jié)果（± s ）

注：1）大寫字母表示差異達極顯著水平，小寫字母表示差異達顯著水平。

處理 n 粗蛋白平均含量（%）5號飼料 5 19.1180±0.7219 aA1）4號飼料 5 17.3140±0.2185 bB 3號飼料 5 16.3440±0.3829 cCD 2號飼料 5 15.4640±0.6717 dDE 1號飼料 5 14.6620±0.4481 eE

飼喂5 種不同配比油菜花粉與黃豆粉飼料對意蜂王漿中灰分含量影響的實驗和統(tǒng)計結(jié)果顯示：飼喂 1 號飼料的王漿灰分含量極顯著高于飼喂 3、4、5 號飼料的（P＜0.01），但與飼喂2號飼料的差異不顯著（P＞0.05）；飼喂 2 號飼料的王漿灰分含量與飼喂 3、4 號飼料的王漿灰分含量之間無顯著差異（P＞0.05），但極顯著高于飼喂 5 號飼料的（P＜0.01）；飼喂 3 號飼料的王漿灰分含量與飼喂 4號飼料的無顯著差異（P＞0.05），但極顯著高于飼喂 5 號飼料的（P＜0.01）；飼喂 4、5 號飼料的王漿灰分含量之間有顯著差異（P＜0.05）（表 3）。說明不同配比油菜花粉與黃豆粉飼料對意蜂王漿的灰分含量影響較大，而且蛋白質(zhì)飼料中花粉的含量越多，生產(chǎn)的王漿中灰分含量越高。

表3 不同配比油菜花粉與黃豆粉飼料對意蜂王漿灰分含量影響的實驗和統(tǒng)計分析結(jié)果（± s ）

表3 不同配比油菜花粉與黃豆粉飼料對意蜂王漿灰分含量影響的實驗和統(tǒng)計分析結(jié)果（± s ）

注：1）大寫字母表示差異達極顯著水平，小寫字母表示達差異顯著水平。

處理 n 灰分平均含量（%）1 號飼料 5 1.1220±0.0712 aA1）2 號飼料 5 0.9860±0.0841 abAB 3 號飼料 5 0.9280±0.1657 bB 4 號飼料 5 0.9080±0.1132 bBC 5 號飼料 5 0.7020±0.1199 cC

2.4 不同配比油菜花粉與黃豆粉飼料對意蜂蜂王漿水分含量影響的實驗和統(tǒng)計分析結(jié)果

飼喂5 種不同配比油菜花粉與黃豆粉飼料對意蜂王漿水分含量影響的實驗和統(tǒng)計結(jié)果顯示：飼喂5 種不同配比油菜花粉與黃豆粉飼料，意蜂所生產(chǎn)王漿的水分含量之間差異不顯著（P＞0.05），說明不同配比油菜花粉與黃豆粉飼料對意蜂蜂王漿的水分含量無影響。

表4 不同比例油菜花粉與黃豆粉飼料對意蜂王漿水分含量影響的實驗和統(tǒng)計結(jié)果（± s ）

表4 不同比例油菜花粉與黃豆粉飼料對意蜂王漿水分含量影響的實驗和統(tǒng)計結(jié)果（± s ）

注：1）小寫字母表示達差異顯著水平。

處理 n 灰分平均含量（%）3 號飼料 5 64.9720 ± 2.7461 a1）1 號飼料 5 64.8340 ± 2.2919 a 5 號飼料 5 63.6760 ± 1.0289 a 2 號飼料 4 64.5950 ± 2.4246 a 4 號飼料 5 64.5020 ± 0.3881 a

4 討論

（1）采用 5 種不同配比油菜花粉與黃豆粉蛋白質(zhì)飼料對意蜂王漿中10-HDA含量影響的實驗結(jié)果顯示，不同飼料組的王漿中 10-HDA 含量之間差異不顯著（P＞0.05），說明不同配比油菜花粉與黃豆粉飼料對王漿中 10-HDA 含量無影響。

實驗用 1～5 號飼料的蛋白質(zhì)含量分別為24.508%、28.849%、34.3726%、36.755%和38.808%，不同配比油菜花粉與黃豆粉混合飼料的蛋白質(zhì)含量有較大的差異，但研究結(jié)果這5種不同配比蛋白質(zhì)飼料對王漿中10-HDA含量無影響。這主要可能是蜂王漿中的10-HDA為脂肪酸，其含量多少與飼料中的蛋白質(zhì)營養(yǎng)水平無必然關(guān)系所致。

（2）采用 5 種不同配比油菜花粉與黃豆粉蛋白質(zhì)飼料對意蜂王漿粗蛋白含量影響的實驗結(jié)果顯示，飼喂 5 號飼料的王漿粗蛋白含量極顯著高于飼喂 1、2、3、4 號飼料的（P＜0.01）；飼喂 4 號飼料的王漿粗蛋白含量極顯著高于飼喂 1、2、3 號飼料的（P＜0.01）；飼喂 3 號飼料的王漿粗蛋白含量極顯著高于飼喂 1 號飼料的（P＜0.05），顯著高于飼喂 2 號飼料的（P＜0.01）；飼喂 2 號飼料的王漿粗蛋白含量顯著高于飼喂 1 號飼料的（P＜0.05）。說明不同配比油菜花粉與黃豆粉飼料對意蜂王漿的粗蛋白含量影響顯著，飼料中黃豆粉的含量越多，生產(chǎn)的王漿中粗蛋白含量越高。

由于實驗用 1～5 號飼料的蛋白質(zhì)含量分別為：1 號飼料（100%花粉）24.508%，2號飼料（75%花粉、25%黃豆粉）28.849%，3號飼料（50%花粉、50%黃豆粉）34.3726%，4號飼料（25%花粉、75%黃豆粉）36.755%，5號飼料（100%黃豆粉）38.808%。即黃豆粉含量越多，油菜花粉與黃豆粉混合飼料的蛋白質(zhì)含量越高。所以實驗結(jié)果顯示的混合飼料中黃豆粉的含量越多，生產(chǎn)的王漿中粗蛋白含量越高的情況這主要是由于油菜花粉與黃豆粉混合飼料的蛋白質(zhì)含量所致。

據(jù)此，鑒于蛋白質(zhì)是蜂王漿的主要成分之一，在養(yǎng)蜂生產(chǎn)中，可以通過適當提高混合蛋白質(zhì)飼料中蛋白質(zhì)含量來提高所生產(chǎn)蜂王漿的粗蛋白含量。

（3）采用5種不同配比油菜花粉與黃豆粉蛋白質(zhì)飼料對意蜂王漿中灰分含量影響的實驗結(jié)果顯示，飼喂1號飼料的王漿灰分含量極顯著高于飼喂3、4、5號飼料的（P＜0.01），但與飼喂2號飼料的差異不顯著（P＞0.05）；飼喂2號飼料的王漿灰分含量與飼喂 3、4 號飼料的王漿灰分含量之間無顯著差異（P＞0.05），但極顯著高于飼喂 5 號飼料的（P＜0.01）；飼喂 3 號飼料的王漿灰分含量與飼喂 4 號飼料的無顯著差異（P＞0.05），但極顯著高于飼喂 5 號飼料的（P＜0.01）；飼喂 4、5 號飼料的王漿灰分含量之間有顯著差異（P＜0.05）（表3）。說明不同配比油菜花粉與黃豆粉飼料對意蜂王漿的灰分含量影響較大，而且蛋白質(zhì)飼料中花粉的含量越多，生產(chǎn)的王漿中灰分含量越高。

蜂王漿 的灰分含量高低反映蜂王漿中礦物質(zhì)的多寡。不同配比油菜花粉與黃豆粉混合蛋白質(zhì)飼料中油菜花粉含量越多，生產(chǎn)的蜂王漿中灰分含量越高，這主要是飼料中的礦物質(zhì)含量不同造成的。

飼喂1、2號飼料的王漿灰分含量之間無顯著差異（P＞0.05），說明采用75%花粉與25%黃豆粉構(gòu)成的混合飼料對蜂王漿中灰分含量不會造成影響。因此，在生產(chǎn)蜂王漿時，可以考慮采用這一比例的混合飼料作為人工花粉代用品飼喂蜜蜂。

（4）采用5 種不同配比油菜花粉與黃豆粉飼料對意蜂王漿水分含量影響的實驗和統(tǒng)計結(jié)果顯示：飼喂5 種不同配比的蛋白質(zhì)飼料，意蜂所生產(chǎn)王漿的水分含量之間差異不顯著（P＞0.05），說明不同配比油菜花粉與黃豆粉飼料對意蜂蜂王漿的水分含量無影響。這主要可能是因為飼料的蛋白質(zhì)營養(yǎng)水平與蜂王漿水分含量沒有必然關(guān)系的結(jié)果。

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