廖子君 曹 舫 姚俊濤 趙 征 梁秦龍 白新寬

（陜西省腫瘤醫(yī)院，陜西 西安 710061）

腦瘤消膠囊對環(huán)己亞硝脲減毒作用的實驗研究

廖子君 曹 舫 姚俊濤 趙 征 梁秦龍 白新寬

（陜西省腫瘤醫(yī)院，陜西 西安 710061）

目的 觀察腦瘤消膠囊對環(huán)己亞硝脲（CCNU）所致S180肉瘤小鼠骨髓造血功能與肝腎功能損害的預防治療作用。方法 在建立S180肉瘤小鼠模型的基礎(chǔ)上，設荷瘤空白對照組（以生理鹽水灌胃）、環(huán)己亞硝脲組（以40mg/kg的CCNU灌胃）及CCNU+小劑量NLX組、CCNU+中劑量NLX組、CCNU+大劑量NLX組（分別以2.5%、5%、10%的腦瘤消膠囊混懸液和40mg/kg的CCNU灌胃）和平消膠囊+CCNU組（以5%平消膠囊混懸液和40mg/kg的CCNU灌胃）；檢測外周血象與肝腎功能、骨髓粒細胞、紅細胞數(shù)，測定脾臟指數(shù)和胸腺指數(shù)。結(jié)果 腦瘤消膠囊在500、1000、2000mg/kg劑量并聯(lián)合CCNU時，與CCNU單用組比較，可對抗環(huán)己亞硝脲引起的荷瘤S180小鼠外周血白細胞和網(wǎng)織紅細胞減少（P＜0.01），可使荷瘤S180小鼠骨髓粒細胞比值上升和骨髓紅細胞比值回落（P＜0.01），可減輕CCNU引起的小鼠肝功能損害（P＜0.05），對腎功能無明顯影響（P＞0.05）；可升高荷瘤S180小鼠胸腺和脾臟指數(shù)（P＜0.01）。結(jié)論 腦瘤消膠囊可對抗細胞毒藥物環(huán)己亞硝脲所引起的骨髓造血功能和肝功能損害及免疫抑制作用。

腦腫瘤；環(huán)己亞硝脲；腦瘤消膠囊

腦瘤消膠囊是一種主要用于顱內(nèi)原發(fā)性或轉(zhuǎn)移性腫瘤輔助治療的純中藥復方制劑，由菝葜、黃芪、山慈菇、蚤休、生南星等13味中藥組成，具有補益正氣、托毒化毒、祛痰化瘀、利尿消腫、息風止痙等多種作用。

前期實驗表明[1-5]，腦瘤消膠囊對G422膠質(zhì)母細胞瘤、艾氏腹水癌、S180肉瘤生長具有顯著抑制作用，可增強60Co放射治療療效、降低60Co放射反應，并可增強荷瘤小鼠的免疫功能，同時還具有抗炎鎮(zhèn)痛作用。本研究主要觀察該藥對環(huán)己亞硝脲所致S180肉瘤小鼠骨髓造血功能、肝腎功能損害及免疫抑制的預防治療作用，報道如下。

1 材料與方法

1.1 動物來源

選用健康昆明封閉群小鼠，每次實驗用單性別動物，體質(zhì)量18～22g，由西安醫(yī)科大學實驗動物中心提供（動物合格證：陜醫(yī)動08-004號）。

1.2 藥品和試劑

腦瘤消（NLX）膠囊，棕褐色粉末（陜西省腫瘤醫(yī)院提供），配成2.5%、5%和10%的混懸液備用；環(huán)己亞硝脲膠囊（CCNU，南京制藥廠產(chǎn)，批號970602），肝、腎功測定試劑盒（北京中生生物工程高技術(shù)公司，批號970225）。

1.3 方法

1.3.1 建立小鼠S180肉瘤模型[6]

選擇接種后7～10d一般狀況較好的瘤種動物，頸椎脫臼，固定于蠟板上，腹部皮膚消毒后，剪開皮膚，用滅菌的空針穿刺抽取腹水（腹水應為乳白色濃稠液體）放入滅菌針管內(nèi)，用生理鹽水稀釋成1∶4的溶液，置冰塊保存，以備腹腔-腋窩交替?zhèn)鞔c接種；其后用上述稀釋后的腹水混懸液在無菌條件下注射到小鼠右上肢臂部靠近腋窩處，每鼠注入0.2mL。

1.3.2 分組

取荷S180肉瘤小鼠60只，按體質(zhì)量和性別均衡隨機分為6組，每組10只。荷瘤空白對照組以生理鹽水灌胃，環(huán)己亞硝脲組（CCNU）、CCNU+小劑量NLX組、CCNU+中劑量NLX組、CCNU+大劑量NLX組，分別以2.5%、5%、10%的腦瘤消混懸液和40mg/kg的CCNU灌胃；平消膠囊+CCNU組（CCNU+平消膠囊），以5%平消膠囊混懸液和40mg/kg的CCNU灌胃。灌胃容量均為0.2mL/10g，每天1次，連續(xù)10d（除荷瘤空白對照組外，各組在接種后第1、第7日給同一劑量的CCNU）。第10天稱取動物體質(zhì)量，摘除眼球采血1～2mL，檢查外周血象和測定小鼠的肝、腎功能；處死動物，分離和鋸斷股骨，檢測骨髓粒細胞數(shù)和紅細胞數(shù)；取出脾臟和胸腺稱重，測定脾指數(shù)和胸腺指數(shù)。計算方法是，胸腺指數(shù)=（胸腺重量/小鼠體質(zhì)量）× 10脾臟指數(shù)=（脾臟重量/小鼠體質(zhì)量）×10。

表1 腦瘤消對CCNU荷瘤小鼠外周血作用的影響[()，n=10]

表1 腦瘤消對CCNU荷瘤小鼠外周血作用的影響[()，n=10]

注：與CCNU組比較※P＜0.05，※※P＜0.01

40+5006.70±1.257.24±2.13※277.67±35.809.80±3.23※40+10006.57±1.006.80±1.41※273.86±32.2510.14±3.39※40+20006.73±1.258.24±1.58※※277.13±28.3011.11±2.26※※CCNU+平消組40+1006.80±0.406.91±1.56※284.26±39.6410.29±2.63※※組別劑量(mg/kg)RBC(×1012/L)WBC(×109/L)血小板(×109/L)網(wǎng)織紅胞(×109/L)空白對照組-6.82±0.308.52±1.59※※298.00±21.919.10±2.42※CCNU組406.36±1.165.22±1.11274.13±42.126.63±2.50 CCNU+NLX組

1.4 統(tǒng)計方法

用非配對t檢驗及tr檢驗。

2 結(jié) 果

2.1 腦瘤消膠囊對環(huán)己亞硝脲荷瘤S180小鼠外周血象的影響

研究發(fā)現(xiàn)，CCNU可使荷瘤小鼠外周血中白細胞及網(wǎng)織紅細胞降低，而對紅細胞和血小板數(shù)無明顯性影響。腦瘤消膠囊在500、1000、2000mg/kg劑量時可顯著對抗環(huán)己亞硝脲引起的白細胞和網(wǎng)織紅細胞減少，tr檢驗表明，其作用呈一定的量效關(guān)系（表1）。

2.2 腦瘤消膠囊對環(huán)己亞硝脲荷瘤S180小鼠髓粒/紅細胞比值的影響

觀察發(fā)現(xiàn)，與荷瘤空白組比較，CCNU可使荷瘤小鼠骨髓粒/紅細胞比值下降和骨髓紅細胞比值上升；與CCNU組比較，腦瘤消膠囊在使用以上三種劑量時均可使骨髓粒細胞比值上升和骨髓紅細胞比值回落。研究表明，500～2000mg/kg劑量的腦瘤消膠囊皆可對抗環(huán)己亞硝脲的骨髓抑制作用（表2）。

表2 腦瘤消膠囊對CCNU中毒時荷瘤S180小鼠骨髓粒/紅細胞比值的影響()

表2 腦瘤消膠囊對CCNU中毒時荷瘤S180小鼠骨髓粒/紅細胞比值的影響()

與CCNU組比較※P＜0.05；※※P＜0.01

1040+50048.8±7.87※※23.0±5.13※※1040+100051.9±6.31※※23.4±4.28※※1040+200049.9±7.11※※26.2±4.50※CCNU+平消組10400+10049.9±5.46※※26.7±4.64※組別動物數(shù)(只)劑量(mg/kg)骨髓粒細胞(%)骨髓紅細胞(%)荷瘤對照組10-53.1±7.07※※26.6±4.01※CCNU組104037.6±8.4331.3±4.33 CCNU+NLX組

2.3 腦瘤消膠囊對CCNU荷瘤S180小鼠肝、腎功能的影響

與荷瘤對照組比較，CCNU組血清ALT（谷丙轉(zhuǎn)氨酶）升高，但BUN無明顯差異；與CCNU組比較，腦瘤消膠囊各劑量組血清ALT下降，提示腦瘤消膠囊可減輕CCNU引起的小鼠肝功能損害（表3）。

表3 腦瘤消膠囊對CCNU荷瘤S180小鼠肝、腎功能的影響()

表3 腦瘤消膠囊對CCNU荷瘤S180小鼠肝、腎功能的影響()

注：與CCNU中毒組比較※P＜0.05，※※P＜0.01

BUN (mmol/L)荷瘤對照組10-24.40±4.60※※4.80±1.16 CCNU組104032.88±5.245.65±2.25組別動物數(shù)(n)劑量(mg/kg) ALT (U/L) 1040+50023.22±5.49※※4.00±1.53 1040+100017.43± 5.00※※3.96±1.80 1040+200026.38±5.88※5.07±1.82 CCNU+平消膠囊組10400+10022.29±9.11※※4.69±1.06 CCNU+NLX組

2.4 腦瘤消膠囊對CCNU荷瘤S180小鼠胸腺和脾臟指數(shù)影響

與荷瘤空白組比較，CCNU組胸腺和脾臟指數(shù)降低；腦瘤消膠囊各劑量組胸腺和脾臟指數(shù)回升，表明腦瘤消膠囊可減輕CCNU引起的小鼠免疫功能損害（表4）。

3 討 論

在美國，惡性原發(fā)性腦腫瘤約占惡性腫瘤的2%，占癌癥每年死亡人數(shù)的2.5%[7]。在我國，原發(fā)性腦腫瘤的發(fā)病率為7.8萬～12.5/10萬人，成人腦原發(fā)腫瘤占全身惡性腫瘤第11位，兒童占第2位（僅次于白血病）；2010年，徐林平等[8]分析了我國2004年至2005年人群腦腫瘤死亡水平及不同時期病死率的變化情況，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，我國腦腫瘤病死率呈上升趨勢，男性居民腦腫瘤病死率高于女性。近年來，隨著惡性腫瘤多學科治療的協(xié)作，腫瘤患者的生存期有顯著延長，而腦轉(zhuǎn)移瘤的發(fā)生率卻在明顯升高，我國報道腦轉(zhuǎn)移瘤占顱內(nèi)腫瘤的3.5%～10%（尸檢腦轉(zhuǎn)移率為14.4%），遠高于原發(fā)腫瘤。

表4 腦瘤消膠囊對CCNU荷瘤小鼠胸腺和脾臟指數(shù)影響()

表4 腦瘤消膠囊對CCNU荷瘤小鼠胸腺和脾臟指數(shù)影響()

注：與CCNU中毒組比較※P＜0.05，※※P＜0.01

1040+5000.98±0.804.48±0.86 1040+10002.36± 0.68※※5.77±1.15※※1040+20002.62±0.887.08±2.25※※CCNU+平消膠囊組10400+1004.21±2.582.89±.3.09脾臟(mg/10g)荷瘤對照組10-2.33±0.85※※8.39±2.15※※CCNU組10400.54±0.143.70±0.94 CCNU+NLX組組別動物數(shù)(n)劑量(mg/kg)胸腺(mg/10g)

近年來，盡管CT、MRI、顯微神經(jīng)外科、激光、超聲吸引、立體定向放療等設備和技術(shù)的應用大大提高了惡性腦腫瘤的診治水平，但其總體預后仍然很差，從癥狀出現(xiàn)到死亡平均期限不到6個月，手術(shù)加放療平均存活期未逾1年，聯(lián)合應用手術(shù)及放、化療1年生存率為45%，2年生存率20%，5年生存率僅6%。腦膠質(zhì)瘤細胞動力學研究表明，即使切除了

99%的腫瘤，8周后就可增殖恢復到原來的大小。因此，無論是腦原發(fā)腫瘤還是轉(zhuǎn)移瘤的治療仍是我們面臨的嚴峻挑戰(zhàn)。

細胞毒藥物環(huán)己亞硝脲（CCNU）主要通過烷化作用和氨甲?；饔闷茐哪[瘤DNA一些酶蛋白，其脂溶性高，可迅速穿過胃腸黏膜和血腦屏障，腦脊液濃度為血漿濃度的50%-55%，是治療腦質(zhì)瘤首選藥之一，但其骨髓抑制作用明顯[9]。因此本研究旨在觀察腦瘤消膠囊對CCNU的解毒作用，從研究結(jié)果可以看出，腦瘤消膠囊在500、1000、2000mg/kg劑量時，聯(lián)合CCNU，與CCNU單用組比較，可對抗環(huán)己亞硝脲引起的荷瘤S180小鼠外周血白細胞和網(wǎng)織紅細胞減少（P＜0.01），可使荷瘤S180小鼠骨髓粒細胞比值上升和骨髓紅細胞比值回落（P＜0.01），表明腦瘤消膠囊對骨髓有保護作用；在上述劑量下，腦瘤消膠囊可減輕CCNU引起的小鼠肝功能損害（P＜0.05），對腎功能無明顯影響（P＞0.05）。

細胞毒藥物對機體免疫功能的損害亦乃常見副作用之一，本研究亦觀察了腦瘤消膠囊降低CCNU對機體免疫功能損害的作用。研究發(fā)現(xiàn)，腦瘤消膠囊各劑量組可升高荷瘤S180小鼠胸腺和脾臟指數(shù)（P＜0.01）。

根據(jù)前期研究及本研究結(jié)果，腦瘤消膠囊抗腫瘤作用雖不及細胞毒藥物，但在降低化療藥物毒副作用、增強免疫功能、改善癥狀、提高生活質(zhì)量、延長生存期等方面具有一定優(yōu)勢，可作為腦原發(fā)腫瘤與轉(zhuǎn)移瘤手術(shù)、放療、化療補充治療手段。

[1] 曹舫,贠重娥.腦瘤消膠囊鎮(zhèn)痛和抗炎作用的藥理學研究[J].陜西腫瘤醫(yī)學,2001,9(2):89-90.

[2] 曹舫,趙保華.腦瘤消膠囊對荷S180肉瘤小鼠的抗腫瘤作用[J].陜西腫瘤醫(yī)學,2002,10(1):6-7.

[3] 曹舫,袁秉祥.腦瘤消膠囊對艾氏腹水癌小鼠的抗腫瘤作用[J].現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學,2004,6(12):514-515.

[4] 曹舫,程曉玲.腦瘤消膠囊對荷瘤小鼠免疫功能的影響[J].實用腫瘤雜志,2005,20(2):163-164.

[5] 曹舫,廖子君.腦瘤消膠囊對60Co照射增效減毒的實驗研究[J].腫瘤防治雜志,2002,9(6):606-608.

[6] 徐淑云,卞如濂,陳修.藥理實驗方法學[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,1994:1423.

[7] Dennis AC,劉云鵬(譯),李智(譯),等.Manual Of Clinical Oncology [M].北京:中國協(xié)和醫(yī)科大學出版社,2012:346.

[8] 許林平,馬雅婷.2004-2005年中國腦部腫瘤死亡率描述性分析[J].中華預防醫(yī)學雜志,2010,44(5):413-417.

[9] Glimoas Meta-Analysis Group.Chemotherapy in adult high-grade glioma:a systematic review and meta-analysis of invidual patient data from 12 randomise trials[J].Lancet,2002,359(9311):1011.

Experimental Study on the Attenuation Function of the NLX Capsule to Lomustine

LIAO Zi-jun, CAO Fang, YAO Jun-tao, ZHAO Zheng, LIANG Qin-long, BAI Xin-kuan
(Shaanxi Province Tumour Hospital, Xi’an 710061, China)

Objective To observe the prevention treatment of the NLX Capsule on injury of bone marrow, liver and kidney function induced by cyclohexyl nitrosourea (CCNU)in S180-bearing mice. Methods The S180-bearing mouse were randomLy divided into 6 eaqual goups: control group(gavaged by saline), cyclohexyl nitrosourea group (gavage by 40mg/kg of CCNU), CCNU + low-dose NLX group, CCNU + middle-dose NLX group, CCNU + high-dose NLX group (gavage by 2.5%, 5%, 10% of the NLX capsule suspension and cancellation of CCNU 40mg/kg), and Pingxiao capsule + CCNU group(gavaged by 5% Pingxiao capsule suspensions and 40mg/kg of CCNU). Peripheral blood, liver and kidney function, bone marrow granulocyte and erythrocyte count were detected, spleen and thymus index were also measured. Results In S180-bearing mice, NLX capsule with 500, 1000, 2000 mg/kg plus CCNU, could antagonize white blood cells and reticulocytes reduce induced by CCNU(P＜0.01), promote bone marrow granulocyte ratio increased and red blood cell ratio declined(P＜0.01), reduce liver damage(P＜0.05), renal function had no significant effect(P＞0.05), can be elevated tumor thymus and spleen index in S180-bearing mice(P＜0.01). Conclusion NLX capsules against cytotoxic cyclohexyl nitrosourea induced bone marrow function and liver dysfunction and immune inhibition.

Brain tumor; Cyclohexyl nitrosourea; NLX capsule

R-33

B

1671-8194（2013）36-0001-03

陜西省科學技術(shù)研究發(fā)展計劃項目(編號：97K12-G22)；西安市科技獎二等