彭 莉 彭 娟

（1 益陽市中心醫(yī)院，湖南 益陽 413000；2 婁底市中心醫(yī)院，湖南 婁底 417000）

解析COMT基因Met多態(tài)與子宮內(nèi)膜異位癥的關(guān)系

彭 莉1彭 娟2

（1 益陽市中心醫(yī)院，湖南 益陽 413000；2 婁底市中心醫(yī)院，湖南 婁底 417000）

目的分析COMT基因Met多態(tài)與子宮內(nèi)膜異位癥的關(guān)系。方法選取2011年6月至2012年6月期間于我院就診的100內(nèi)膜異位癥患者為試驗組（其中包括45腺肌病患者），以蛋白酶K消化-飽和酚氯仿法對其外周血細(xì)胞基因組DNA進(jìn)行提取，并采用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)-限制性片段長度多態(tài)性（PCR-RFLP）方法對以上患者進(jìn)行基因分型，另選取同時期100例未患有子宮內(nèi)膜異位癥（其中包括50例非腺肌病患者）的患者為對照組，采取與試驗組同樣的方式進(jìn)行基因分型。結(jié)果對比兩組G/G、G/A、A/A基因型頻率，其中試驗組分別為38.0%、37.0%、25.0%，對照組分別為40.0%、41.0%、19.0%，兩組對比差異性較小，無統(tǒng)計學(xué)意，P＞0.05；對比兩組A等位基因頻率，試驗組為42.3%，對照組為34.1%，兩組對比差異性較小，無統(tǒng)計學(xué)意義，P＞0.05。結(jié)論COMT基因Met多態(tài)與子宮內(nèi)膜異位癥無明顯相關(guān)性。

子宮內(nèi)膜異位癥；多態(tài)性；COMT基因

子宮內(nèi)膜異位癥，簡稱內(nèi)異癥，是婦科中的多發(fā)病及常見病，多發(fā)于育齡期的婦女。近年來，內(nèi)異癥的發(fā)病率越來越高，給患病婦女們帶來了身心的損傷，值得臨床上重視。但因其致病原因及發(fā)病機(jī)制仍未不明確，故臨床療效不算滿意。明確的是內(nèi)異癥是屬于雌激素的依賴疾病，而COMT基因為關(guān)鍵的雌激素代謝解毒酶，其基因的多態(tài)性可能能改變解毒酶的活性及含量，促進(jìn)雌激素的代謝[1,3]。本次研究使用PCR-RFLP技術(shù)來檢測所選試驗組及對照組的COMT基因的158位G-A密碼子的單核苷酸多態(tài)，進(jìn)而探討COMT基因Met多態(tài)性與內(nèi)異癥的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 基本資料

選取2011年6月至2012年6月期間于我院就診的100內(nèi)膜異位癥患者為試驗組，其中含有子宮腺肌病患者45例，以上患者均于我院采取腹腔鏡手術(shù)或剖腹手術(shù)進(jìn)行治療，以上所有患者標(biāo)本均通過手術(shù)病理學(xué)得以證實；另選取同時期于我院進(jìn)行體驗的健康女性100例為對照組。試驗組中患者年齡為21～42歲，平均年齡為（30.25±1.2）歲，對照組患者年齡為20～45歲，平均年齡為（32.12±2.8）歲，對兩組一般資料進(jìn)行對比，差異無統(tǒng)計學(xué)意義，P＞0.05，具有可比性。以上所有納入試驗的對象，相互之間均無血緣關(guān)系，且排除了患有內(nèi)分泌疾病、高血壓及糖尿病等患者，所有試驗對象月經(jīng)周圍均較為規(guī)律，試驗組患者在進(jìn)行手術(shù)前未服用過任何激素類藥物和抑制免疫類的藥物。

1.2 方法

①收集標(biāo)本與基因組DNA提?。河谇宄炕颊呋蚪】嫡呖崭?fàn)顟B(tài)下，抽取5mL的靜脈血，采用檸檬酸鈉進(jìn)行抗凝，并經(jīng)其置入溫度為零下70°的冰箱內(nèi)進(jìn)行保存。對患者或健康者外周血基因組DNA進(jìn)行提取，所使用的方法為蛋白酶K消化-苯酚法[4,5]。②設(shè)計引物及合成：本次引物設(shè)計由北京賽百盛公司進(jìn)行合成，其中F為5’-TCGTGGACGCCGTGATTCAGG-3’,R為5’-AGGTCTGACAACGGGTCAGGC-3’,127bp的片段大小。③酶切分析：PCR產(chǎn)物經(jīng)限制性內(nèi)切酶Nla Ⅲ于37℃酶切過夜，20μL酶切體系：5μLPCR產(chǎn)物，12.3μL雙蒸水，10倍NE buf fer 2μL，100倍BSA 0.2μL，NlaⅢ0.5μL（10U/μL）。④基因型鑒定：選擇40g/L質(zhì)量濃度的瓊脂糖凝膠對酶切產(chǎn)物進(jìn)行電泳，并對其進(jìn)行EB染色，明確其基因型。⑤序列分析：以隨機(jī)法選擇COMT3種基因型PCR產(chǎn)物，將其送至北京賽百盛公司后，對其進(jìn)行測序驗證，其中等位基因頻率的計算方法為2倍的純合子數(shù)與雜合子數(shù)之和與2倍受檢人群數(shù)之比。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS13.0統(tǒng)計學(xué)軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行處理分析，以計數(shù)法對基因型、等位基因頻率進(jìn)行計算，組間差異采用卡方檢驗，并采用非條件logistic回歸模型對比值與95%可信區(qū)間進(jìn)行計算。

2 結(jié) 果

2.1 基因組DNA提取結(jié)果

選擇30ulDNA溶解液所進(jìn)行溶解后的DNA，采用紅紫外分光光度儀對OD260/OD280進(jìn)行檢測，所檢測的比值為1.6～1.8，結(jié)果顯示本次提取的DNA純度相對較高，其質(zhì)量濃度處于0.5～0.8g/L，可于下一步的實驗中進(jìn)行使用。

2.2 COMT基因Met多態(tài)與子宮內(nèi)膜異位癥的關(guān)系

兩組基因頻率分布與Hardy-Weinberg遺傳平衡定量相符，這說明本次所進(jìn)行研究的對象的選擇按照遺傳學(xué)來說均是屬于隨機(jī)的。兩組G/G、G/A、A/A基因頻率、A等位基因頻率對比無明顯差異，無統(tǒng)計學(xué)意義，詳細(xì)結(jié)果如表1、表2所示。

表1 兩組COMT基因頻率對比χ2

表2 兩組等位基因頻率對比

3 討 論

子宮內(nèi)膜異位癥是指患者的子宮內(nèi)膜中的腺體及間質(zhì)出現(xiàn)分布在子宮體以外的其他部位，但至今其發(fā)病的原因及其病機(jī)仍未明確。子宮內(nèi)膜異位癥是屬于雌激素的依賴性婦科疾病，它的發(fā)生發(fā)展與體內(nèi)的雌激素有著密切的關(guān)系，當(dāng)體內(nèi)雌激素量或代謝出現(xiàn)異常時，便會誘發(fā)子宮內(nèi)膜的生長失控，而生長在子宮體外形成子宮內(nèi)膜異位癥。兒茶酚-O-甲基轉(zhuǎn)移酶，簡稱COMT，屬于雌激素代謝解毒的主要酶，能催化兒茶酚類雌激素轉(zhuǎn)化為甲基雌二醇，把過多的雌激素及其代謝產(chǎn)物轉(zhuǎn)化為無毒的代謝物，并排出體外，這一轉(zhuǎn)化機(jī)制能防御發(fā)生雌激素引起的致癌效應(yīng)[6,8]。

目前，很多有關(guān)COMT基因多態(tài)性與內(nèi)異癥的易感性之間的相關(guān)關(guān)系報道結(jié)果不大一致，相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)白種人的內(nèi)異癥患者及健康對照者之間的COMT多態(tài)性和內(nèi)異癥之間的相關(guān)性不明顯。另有文獻(xiàn)報道COMT基因突變的純合子明顯降低內(nèi)異癥的發(fā)病率及風(fēng)險。

本次實驗研究的結(jié)果表明，子宮內(nèi)膜異位癥組中的COMT基因中的G/G、A/A、G/A基因組及A等位基因的頻率差異不具有統(tǒng)計學(xué)上的意義，這就提示說明內(nèi)異癥的遺傳易感性可能于COMT基因158Met出現(xiàn)的多態(tài)性無關(guān)。

[1] Samochowiec J,Samochowiec A,Stenpien G,et al.Association studies of MAO-A,COMT, and 5-HTT genes polymorphisms in patients with anxiety disorders of the phobic spectrum[J]. Psychiatry Res,2004,128(1):21-26.

[2] 張峰,趙潔,曲銀娥,等.COMT基因Met多態(tài)與子宮內(nèi)膜異位癥的關(guān)系[J].中國實驗診斷學(xué),2012,16(2):301-303.

[3] 尹安平,陳雪生.彩色多普勒超聲診斷剖宮產(chǎn)術(shù)后腹壁子宮內(nèi)膜異位癥的診斷價值[J].河北醫(yī)藥,2007,29(12):1309-1311.

[4] 孟津,金海紅,趙敏,等.Bcl-2在子宮內(nèi)膜異位癥中的表達(dá)和意義[J].河北醫(yī)藥,2011,33(23):3533-3535.

[5] 何艷琴,李學(xué)軍,龐淑蘭等.促紅細(xì)胞生成素在子宮內(nèi)膜異位癥組織中的表達(dá)及意義[J].河北醫(yī)藥,2008,30(11):1670-1671.

[6] 陳鳳玲,趙明彥,孫菊英,等.子宮內(nèi)膜異位癥患者在位內(nèi)膜和異位內(nèi)膜中的Bim和p21WAF1/CIP1表達(dá)及相關(guān)性研究[J].河北醫(yī)藥,2009,31(19):2547-2549.

[7] Craddock N,Owen MJ,O'Donovan MC,et al.The catechol-O-methyl transferase (COMT) gene as a candidate for psychiatric phenotypes: evidence and lessons[J].Mol Psychiatry,2006,11(5):446-458.

[8] 趙曉苗.COMT基因多態(tài)性與子宮內(nèi)膜癌及子宮內(nèi)膜增生過長的關(guān)系研究[D].廣州:中山大學(xué),2006.

Analysis of the COMT Gene Met Polymorphism with Endometriosis Relationship

PENG Li1, PENG Juan2

(1 Central Hospital of Yiyang, Yiyang 413000, China; 2 Loudi Central Hospital, Loudi 417000, China)

ObjectiveAnalysis of the COMT gene Met polymorphism with endometriosis relationship.MethodsFrom 2011 June to 2012 June in our hospital during the period 100 endometriosis patients into test group (including 45 patients with adenomyosis), with proteinase K digestion - saturated phenol chloroform method on peripheral blood cell genomic DNA extraction, and polymerase chain reaction - restriction fragment length polymorphism ( PCR-RFLP method for more patients ) were genotyped, another takes the same period 100 patients did not suffer from endometriosis ( including 50 cases of patients with adenomyosis ) patients as control group and test group, taking the same way of genotyping.ResultsComparison of the two groups of G/G, G/A, A/A genotype frequency, wherein the test group were 38%,37%,25%, the control group were 40%, 41%,19%, two groups of contrast difference is small, no statistical significance, P＞0.05;in contrast to the two group of A allele frequencies, experiment group 42.3%,control group for 34.1%, a smaller difference between the two groups, no statistical significance, P＞0.05.ConclusionsThe COMT gene Met polymorphism with endometriosis without obvious correlation.

Endometriosis;Polymorphism;COMT gene

R711.71

B

1671-8194（2013）18-0037-02