張玉朝

（河南省南陽(yáng)市中心血站，河南 南陽(yáng) 473004）

抑癌基因PTEN在腎透明細(xì)胞癌組織中的表達(dá)及臨床意義

張玉朝

（河南省南陽(yáng)市中心血站，河南 南陽(yáng) 473004）

目的 探討抑癌基因PTEN在腎透明細(xì)胞癌中的表達(dá)及發(fā)生、發(fā)展中的意義。方法 采集自醫(yī)院的腎透明細(xì)胞癌組織（60例）及正常腎組織（20例），用免疫組織化學(xué)法檢測(cè)抑癌基因PTEN的表達(dá)情況。結(jié)果 PTEN在腎透明細(xì)胞癌組織和正常腎組織中的陽(yáng)性表達(dá)率分別為96.7%和5%（P＜0.05），差異顯著具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論 PTEN可作為評(píng)價(jià)腎透明細(xì)胞癌發(fā)生的生物學(xué)指標(biāo)。

PTEN；腎透明細(xì)胞癌；免疫組化

腎癌是泌尿系統(tǒng)惡性腫瘤中常見的疾病之一，研究表明，引起腎癌的因素較為復(fù)雜，抑癌基因PTEN(phosphotase and tensin homolog deleted from chromsome 10，PTEN)是較為重要的一種[1-3]，該基因編碼的蛋白具有磷酸酶的活性，在周期阻滯和細(xì)胞凋亡過(guò)程中起到非常關(guān)鍵的作用[4]。本研究運(yùn)用免疫組織化學(xué)的方法，檢測(cè)腎透明細(xì)胞癌及正常腎組織中抑癌基因PTEN的表達(dá)情況，探討PTEN在該病的發(fā)生、發(fā)展中的意義及對(duì)患者預(yù)后的影響。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本

病例樣本取自南陽(yáng)市第三人民醫(yī)院2008年至2012年經(jīng)手術(shù)切除并經(jīng)病理學(xué)證實(shí)的原發(fā)性腎透明細(xì)胞癌組織標(biāo)本60例，術(shù)前均未接受化、放療。

1.2 試劑及儀器

兔抗人PTEN多克隆抗體（上海億欣生物科技有限公司）；生物素二抗、DAB顯色試劑盒（碧云天生物技術(shù)公司），Olympus BH-2顯微鏡照相系統(tǒng)；Leica Q570c真彩圖像分析儀(Leica)。

1.3 免疫組化法檢測(cè)PTEN

常規(guī)石蠟包埋并切片。然后脫蠟，脫水，抗原修復(fù)，封閉30min后，滴加適當(dāng)稀釋(1∶100)后的兔抗人PTEN多克隆抗體，4℃過(guò)夜，洗脫后滴加二抗，反應(yīng)1h，DAB顯色、脫水、透明、封片。陽(yáng)性和陰性對(duì)照的設(shè)定：用已知的陽(yáng)性組織切片作為陽(yáng)性對(duì)照，緩沖液代替一抗作為陰性對(duì)照。用Olympus BH-2顯微鏡照相系統(tǒng)進(jìn)行照相后進(jìn)行分析。

1.4 結(jié)果判定

陽(yáng)性結(jié)果的判定標(biāo)準(zhǔn)：參考已發(fā)表文獻(xiàn)[5]的評(píng)分方法，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)計(jì)分標(biāo)準(zhǔn)：陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)＜5%判定為0；陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)＞5%，但≤35%判定為1；陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)＞35%，但≤70%判定為2；陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)＞70%判定為3。著色強(qiáng)度計(jì)分標(biāo)準(zhǔn)：完全沒有著色判定為0，著色很弱判定為1，呈明顯的棕黃色判定為2。陽(yáng)性分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)：上述兩項(xiàng)積分相加，0～1分之間為(-)，2分為(±)，3分為(+)，4分為(++)，5分為(+++)：+～+++判定為陽(yáng)性，- ～±判定為陰性。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

應(yīng)用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件SPSS 13.0，采用Krusca-Wallis進(jìn)行非參數(shù)檢驗(yàn)。P＜0.05表示差異顯著，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 免疫組織化學(xué)染色結(jié)果

免疫組化結(jié)果顯示，正常腎臟組織中PTEN蛋白陽(yáng)性表達(dá)率為5%(1/20)，明顯低于腎透明細(xì)胞癌組織96.7%（58/60）的表達(dá)率（P＜0.05），見表1、圖1。

表1 PTEN在正常腎組織、腎透明細(xì)胞癌組織中的表達(dá)

圖1 PTEN在腎透明細(xì)胞癌組織中的表達(dá)

2.2 PTEN表達(dá)與腎透明細(xì)胞癌患者臨床病理特征之間的關(guān)系

結(jié)果顯示組織的浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期等與PTEN的表達(dá)有較為密切的關(guān)系（表2）。

表2 PTEN基因的表達(dá)情況與腎透明細(xì)胞癌患者臨床病理特征之間的關(guān)系

3 討 論

抑癌基因PTEN又稱為MMAC1（mutated in multiple advanced cancers 1)，是研究者后來(lái)發(fā)現(xiàn)的一種抑癌基因，參與腫瘤細(xì)胞的浸潤(rùn)及腫瘤轉(zhuǎn)移的調(diào)節(jié)等過(guò)程[6]。

本實(shí)驗(yàn)用免疫組化的方法檢測(cè)了抑癌基因PTEN在腎透明細(xì)胞癌組織和正常腎臟組織中的表達(dá)情況。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，與正常腎組織相比，在腎透明細(xì)胞癌患者的組織內(nèi)有較強(qiáng)的PTEN的表達(dá)。本實(shí)驗(yàn)還發(fā)現(xiàn)，部分腎透明細(xì)胞癌組織中還有PTEN的異常表達(dá)或者表達(dá)缺失或表達(dá)減弱現(xiàn)象，本研究結(jié)果顯示，PTEN在正常腎臟組織中基本無(wú)表達(dá)，說(shuō)明PTEN能選擇性的表達(dá)于腎透明細(xì)胞癌組織中，具有一定的組織嗜性，分析認(rèn)為其表達(dá)可能是誘發(fā)腎透明細(xì)胞癌發(fā)生的重要因素之一。進(jìn)一步的分析PTEN表達(dá)情況與腎透明細(xì)胞癌之間的主要參數(shù)的關(guān)系，發(fā)現(xiàn)PTEN的表達(dá)與病理分期沒有明顯關(guān)系，與組織的浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期有明顯的關(guān)系。

綜上所述，PTEN是繼p53基因之后另外一個(gè)與腫瘤的發(fā)生密切相關(guān)的一個(gè)抑癌基因。研究其作用機(jī)制對(duì)腫瘤的診斷及其基因治療具有重要意義。

[1] Li J,Yen C,Liaw D,et al.PTEN,a putative protein tyrosine phosphatase gene mutated in human brain,breast,and prostate cancer[J]. Science,1997,275 (5308): 1943-1947.

[2] Li DM,Sun H.TEP1,encoded by a candidate tumor suppressor locus,is a novel protein tyrosine phosphatase regulated by transforming growth factor beta[J].Cancer Research,1997,57(11): 2124-2129.

[3] Steck PA,Pershouse MA,Jasser SA,et al.Identification of a candidate tumour suppressor gene,MMAC1,at chromosome 10q23.3 that is mutated in multiple advanced cancers[J].Nature Genetics,1997, 15(4): 356-362.

[4] Chu EC,Tarnawski AS.PTEN regulatory functions in tumor suppression and cell biology. Medical science monitor: international medical[J].J Expe Clin Res,2004,10(10): RA235.

[5] Shimizu M,Saitoh Y,Itoh H.Immunohistochemical staining of Haras oncogene product in normal,benign,and malignant human pancreatic tissues[J].Human Pathology,1990,21(6): 607-612.

[6] Keniry M,Parsons R.The role of PTEN signaling perturbations in cancer and in targeted therapy[J].Oncogene,2008,27(41): 5477-5485.

R737.11

B

1671-8194（2013）23-0185-02