王 琦

（南陽市第一人民醫(yī)院，河南 南陽473000）

培養(yǎng)基加溫溶解次數(shù)對醫(yī)院制劑微生物檢測結(jié)果的影響分析

王 琦

（南陽市第一人民醫(yī)院，河南 南陽473000）

目的探討培養(yǎng)基加溫溶解次數(shù)對醫(yī)院制劑微生物檢測結(jié)果的影響。方法選擇玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基、青枯菌半選擇性培養(yǎng)基進(jìn)行金黃色葡萄球菌和白色念珠菌培養(yǎng)，培養(yǎng)基分別溶解3次。結(jié)果隨著溶解次數(shù)的增加，培養(yǎng)基上的金黃色葡萄球菌與白色念珠菌數(shù)都呈下降趨勢，不過對比差異不明顯。隨著溶解次數(shù)的增加，培養(yǎng)基上的pH值呈現(xiàn)明顯下降趨勢，對比差異明顯（P＜0.05）。結(jié)論培養(yǎng)基加溫溶解次數(shù)能影響醫(yī)院中成藥制劑的微生物檢測數(shù)與pH值，要盡量減少溶解次數(shù)，保證檢測的準(zhǔn)確性。

培養(yǎng)基；加溫溶解次數(shù)；藥劑；微生物

在當(dāng)前醫(yī)療環(huán)境下，醫(yī)藥中成藥制劑質(zhì)量直接關(guān)系到用藥者的安全和療效[1]。而微生物限度檢查在中成藥制劑質(zhì)量控制方面起著重要的質(zhì)量評估作用，其準(zhǔn)確與否直接關(guān)系到患者用藥的安全性和有效性[2]。但是在檢測過程中，很多含瓊脂類培養(yǎng)基的多次加溫溶解，造成培養(yǎng)基內(nèi)的成分被破壞和丟失，導(dǎo)致微生物檢測的不準(zhǔn)確[3,4]。本文為此具體探討了培養(yǎng)基加溫溶解次數(shù)對醫(yī)院中成藥制劑微生物檢測結(jié)果的影響，現(xiàn)報道如下。

1 材料與方法

1.1 儀器與試藥

玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基、青枯菌半選擇性培養(yǎng)基、金黃色葡萄球菌[CMCC（B）26003]、白色念珠菌[CMCC（B）44102]均購自中國藥品生物制品檢定所。無菌磷酸鹽緩沖液（pH 7.2）購自北京三藥科技開發(fā)公司。培養(yǎng)皿、吸管均按2005年版《中國藥典》要求合理清洗、消毒與高壓滅菌。

1.2 方法

1.2.1 菌檢率分析

將金黃色葡萄球菌、白色念珠菌分別按2005年版《中國藥典》要求配制成100個/mL的供試菌液。另將已配制好的玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基和青枯菌半選擇性培養(yǎng)基溶解，冷至約45℃后各取25mL分別對應(yīng)傾注在2個培養(yǎng)皿中，35℃培養(yǎng)48h和25℃培養(yǎng)72h后行計數(shù)。從培養(yǎng)基冷卻到加溫溶解循環(huán)3次，并記錄每次菌落數(shù)的變化。

1.2.2 pH值考察

取10%葡萄糖溶液300mL于三角燒瓶中，置水浴上加溫，沸后冷卻至室溫，測定其pH值。并將從葡萄糖冷卻到加溫至沸循3次，記錄各次的pH值變化。

1.3 統(tǒng)計分析

使用SPSS19.0數(shù)據(jù)庫進(jìn)行分析，菌數(shù)與pH值數(shù)對比采用卡方對比檢驗，P＜0.05代表有顯著性差異。

2 結(jié) 果

2.1 細(xì)菌生長數(shù)的變化

經(jīng)過觀察，隨著溶解次數(shù)的增加，培養(yǎng)基上的金黃色葡萄球菌與白色念珠菌數(shù)都呈下降趨勢，不過對比差異不明顯。見表1。

表1 不同加溫溶解次數(shù)對細(xì)菌生長數(shù)的影響結(jié)果

2.2 pH值的變化

經(jīng)過觀察，隨著溶解次數(shù)的增加，培養(yǎng)基上的pH值呈現(xiàn)明顯下降趨勢，對比差異明顯（P＜0.05）。見表2。

表2 不同加溫溶解次數(shù)對pH值的影響結(jié)果

3 討 論

當(dāng)前中成藥確切的臨床療效和較低廉的價格越來越得到認(rèn)可，使用的人群越來越多，但伴隨而來中成藥的安全性比以往則更需要引起重視[5]。中成藥安全性問題究其來源是多方面的，主要與中成藥本身特性和藥品受細(xì)菌污染程度等相關(guān)。中成藥細(xì)菌數(shù)測定是微生物的定量檢查，是用來判斷藥品被細(xì)菌污染程度和衛(wèi)生質(zhì)量評價的指標(biāo)，也是檢測中藥藥品質(zhì)量的指標(biāo)之一。在檢測方法中，培養(yǎng)基稀釋法是利用擴(kuò)大培養(yǎng)基的使用量或增加樣品的稀釋倍數(shù)，減少單位體積供試品的量，以達(dá)到降低供試品抑菌作用的目的。培養(yǎng)基稀釋法操作也較簡便，所需時間短，尤其適用于中成藥的微生物種類[6]。

但是在培養(yǎng)基檢測方法中，其加溫溶解次數(shù)過多將造成檢測的誤差。有調(diào)查顯示，10%葡萄糖溶液經(jīng)過1～6次加溫，溶液逐漸濃縮，pH值會明顯下降。而微生物也是一個生命體，在反復(fù)多次的加溫中，大量的礦物質(zhì)、蛋白質(zhì)和水分都被破壞和丟失，在這樣一個沒有充足營養(yǎng)的培養(yǎng)基中微生物不能生長繁殖[1]。經(jīng)過觀察，隨著溶解次數(shù)的增加，培養(yǎng)基上的金黃色葡萄球菌與白色念珠菌數(shù)都呈下降趨勢，不過對比差異不明顯。為此培養(yǎng)基的溶解數(shù)次不得＞3次，否則微生物限度檢查雖進(jìn)行了培養(yǎng)，但很難檢查出樣品中的菌量數(shù)。pH值是微生物檢測的重要影響因素，不同的檢測樣品具有不同的pH值，如果忽略pH值對反應(yīng)的影響，必然會使檢測結(jié)果產(chǎn)生偏差。本文經(jīng)過觀察，隨著溶解次數(shù)的增加，培養(yǎng)基上的pH值呈現(xiàn)明顯下降趨勢，對比差異明顯（P＜0.05）。在預(yù)防中，首先要嚴(yán)格熱水定容原則，溶解后都要對培養(yǎng)基進(jìn)行熱水定容，預(yù)防營養(yǎng)成分濃度不均。其次要檢測pH值的變化，確保pH值的穩(wěn)定性。

總之，培養(yǎng)基加溫溶解次數(shù)能影響醫(yī)院中成藥制劑的微生物檢測數(shù)與pH值，要盡量減少溶解次數(shù)，保證檢測的準(zhǔn)確性。

[1] 王琳琳,丁安偉,耿徑軍.藥品微生物學(xué)檢查方法學(xué)驗證執(zhí)行現(xiàn)狀[J].醫(yī)藥導(dǎo)報,2007,26(5):569-571.

[2] Malekazadeh HE,Hsasnifar M,Shahamat,Antibacterial activity of black mymbalan(Terminalia chebula Retz)against Helicobacter pylori[J].Int J Antimicr Agents,2010,8(10):85-88.

[3] 馬文漪,楊柳燕.環(huán)境微生物工程.南京:南京大學(xué)出版社,2008: 45-47.

[4] 舒柏華,趙志耀,徐順清,等.利用生物發(fā)光分析技術(shù)快速檢測微生物的方法學(xué)研究[J].發(fā)光學(xué)報,2009,20(1):77-80.

[5] 中國藥品生物制品檢定所.中國藥品檢驗標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)范[M].北京:中國醫(yī)藥科技出版社,2005:45-47.

[6] 張崇生,申遂揚(yáng).加味藿香正氣丸的微生物限度的檢查[J].醫(yī)藥導(dǎo)報,2007,26(1):76-77.

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1671-8194（2013）11-0071-02