張巍巍*

（河南省新鄉(xiāng)市中心醫(yī)院腫瘤放射治療科，河南 新鄉(xiāng) 453000）

COX-2和VEGF在食管鱗狀細(xì)胞癌原發(fā)灶與復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移灶表達(dá)及意義

張巍巍*

（河南省新鄉(xiāng)市中心醫(yī)院腫瘤放射治療科，河南 新鄉(xiāng) 453000）

目的 探討食管癌原發(fā)灶與復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移灶間 COX-2 和 VEGF 表達(dá)情況及其臨床意義。方法 應(yīng)用免疫組化方法檢測(cè) 47 例乳腺癌患者的原發(fā)灶和復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移灶中 COX-2 和 VEGF 的表達(dá)情況及其相關(guān)性。結(jié)果 COX-2 和 VEGF 在原發(fā)灶和復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移灶的陽(yáng)性表達(dá)率分別為82.9%、61.7% 和 87.2%、68.1%，且 COX-2 與 VEGF 表達(dá)在原發(fā)灶和復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移灶中均有相關(guān)性。COX-2 和 VEGF 在原發(fā)灶和復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移灶中發(fā)生變化的比例分別為 8.5% 和 10.6%。結(jié)論 COX-2 和 VEGF 在食管癌的發(fā)生發(fā)展中可能起到不同作用，在腫瘤進(jìn)展的不同階段其表達(dá)存在明顯差異。

食管癌；COX-2；VEGF

食管癌是世界上常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，2008年全世界新增發(fā)病48萬(wàn)，病死人數(shù)達(dá)40萬(wàn)[1]。我國(guó)為其高發(fā)區(qū)之一，嚴(yán)重威脅著我國(guó)人民群眾的生命健康，復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移仍是治療失敗的主要原因[2]。COX-2和VEGF均為腫瘤血管形成中的重要調(diào)節(jié)因子，在腫瘤的復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移中起著重要作用。因此我們選擇上述兩個(gè)蛋白，檢測(cè)其在食管癌原發(fā)灶及復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移灶之間的表達(dá)，分析其臨床意義。

1 資料與方法

1.1 資料收集

2008年1月1日至2011年12月31日新鄉(xiāng)市中心醫(yī)院經(jīng)病理組織學(xué)確診的47例食管癌癌組織及其轉(zhuǎn)移灶標(biāo)本。其中男性26例，女性21例；年齡34～84歲，中位年齡58歲；病理類型均為鱗狀細(xì)胞癌；其中胸腔復(fù)發(fā)15例，鎖骨上淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移17例，肺轉(zhuǎn)移5例，腦轉(zhuǎn)移2例，骨轉(zhuǎn)移5例，腹腔轉(zhuǎn)移3例。

1.2 主要試劑

COX-2和VEGF受體抗體均購(gòu)自福州邁新生物技術(shù)開(kāi)發(fā)有限公司，EDTA緩沖液、DAB、Maxvision、二抗等試劑也購(gòu)自福州邁新生物科技有限公司，二甲苯、乙醇、蘇木精等其他試劑購(gòu)于市售。

1.3 免疫組化檢測(cè)

所有標(biāo)本組織標(biāo)本均在手術(shù)后30min后放入中性福爾馬林固定液中固定，經(jīng)脫水、浸蠟等常規(guī)步驟后石蠟包埋。進(jìn)行4μm厚連續(xù)切片，二甲苯脫蠟后，常規(guī)梯度乙醇脫苯入水，3%過(guò)氧化氫處理30min，PBS充分洗滌后置入檸檬酸緩沖液，高壓鍋進(jìn)行抗原熱修復(fù)，自然冷卻至室溫，滴加COX-2和VEGF抗體，放入濕盒中4℃冰箱孵育過(guò)夜，PBS充分洗滌后滴加生物素標(biāo)記二抗，室溫孵育60min，PBS充分洗滌后DAB顯色，蒸餾水沖洗，蘇木精復(fù)染，然后脫水、透明、中性樹(shù)脂封片。用已知的陽(yáng)性切片作陽(yáng)性對(duì)照，用PBS替代一抗作為陰性對(duì)照。

1.4 COX-2和VEGF結(jié)果判斷

根據(jù)細(xì)胞著色的情況對(duì)每張切片進(jìn)行半定量評(píng)價(jià)，參照文獻(xiàn)[3]方法，首先將切片色強(qiáng)度分為：0分陰性，1分弱陽(yáng)性（染色強(qiáng)度為淡黃或淺棕色），2分強(qiáng)陽(yáng)性（染色強(qiáng)度為黃或棕色）；然后根據(jù)染色強(qiáng)度部分所占比例計(jì)為為0分：0%～4%；1分：5%～24%；2分：25%～49%；3分：50%～74%；4分：75%～100%。兩者乘積后各個(gè)部分相加作為每一張切片的最后計(jì)分。結(jié)果判定由三位資深病理學(xué)醫(yī)師單獨(dú)進(jìn)行，取兩者平均值。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS15.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行處理，采用卡方檢驗(yàn)與Spearman等級(jí)相關(guān)檢驗(yàn)進(jìn)行結(jié)果分析。P＜0.05為差異有顯著性，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 COX-2和VEGF在原發(fā)灶及復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移灶間的表達(dá)

COX-2在食管癌原發(fā)灶與復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移灶的陽(yáng)性率分別為82.9%和87.2%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；VEGF在食管癌原發(fā)灶與復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移灶的陽(yáng)性率分別為61.7%和68.1%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見(jiàn)表1。

表1 COX-2及VEGF在食管癌原發(fā)灶及復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移灶表達(dá)［n(%)］

2.2 COX-2和VEGF表達(dá)的相關(guān)性

在食管癌原發(fā)灶中，COX-2與VEGF共陽(yáng)性7例，共陰性3例，兩者之間有相關(guān)性（P＜0.05）；在食管癌復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移灶中，COX-2與VEGF共陽(yáng)性9例，共陰性2例，兩者之間有相關(guān)性（P＜0.05）。

2.3 COX-2和VEGF在原發(fā)灶與復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移灶間的表達(dá)變化

在47例食管癌癌患者中，COX-2的表達(dá)由陽(yáng)性轉(zhuǎn)為陰性1例，陰性轉(zhuǎn)為陽(yáng)性3例，共4例發(fā)生COX-2表達(dá)的變化，占8.5%；VEFG的表達(dá)由陽(yáng)性轉(zhuǎn)為陰性1例，陰性轉(zhuǎn)為陽(yáng)性4例，共例發(fā)生VEGF表達(dá)的變化，占10.6%。

3 討 論

食管癌是世界上常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，我國(guó)為其高發(fā)區(qū)之一，且食管癌患者就診時(shí)大多屬于晚期，嚴(yán)重威脅著我國(guó)人民群眾的生命健康。隨著對(duì)食管癌研究的深入，食管癌根治性切除術(shù)有了很大的進(jìn)步。但由于淋巴結(jié)清除的局限性和隱匿微小轉(zhuǎn)移的存在，術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移仍是治療失敗的主要原因[2]。

人類COX-2基因定位于1號(hào)染色體的1q25，全長(zhǎng)8.3kb，由10個(gè)外顯子和9個(gè)內(nèi)含子構(gòu)成，編碼604個(gè)氨基酸殘基組成的多肽。COX-2是誘生型花生四烯酸的環(huán)氧酶代謝途徑中的限速酶，可催化花生四烯酸轉(zhuǎn)化為前列腺素。在正常狀態(tài)下，COX-2在各種因素（如細(xì)胞因子、缺氧、內(nèi)毒素、高脂飲食、致癌劑、癌基因、病毒癌基因產(chǎn)物以及紫外線等）的刺激下增加表達(dá)?，F(xiàn)在的研究發(fā)現(xiàn)：COX-2可通過(guò)促進(jìn)細(xì)胞增殖、抑制細(xì)胞凋亡、促進(jìn)血管形成、抑制免疫功能等機(jī)制，參與腫瘤的發(fā)生和發(fā)展。體內(nèi)外食管癌的研究中表明，COX-2在食管癌細(xì)胞的增殖及癌變中起著重要作用[4,5]。人VEGF基因定位于染色體6p21，由8個(gè)外顯子和7個(gè)內(nèi)含子組成，全長(zhǎng)14kb。由于外顯子剪切的不同而形成不同的亞型，編碼產(chǎn)物為34-45kD的同源二聚體糖蛋白。VEGF經(jīng)過(guò)轉(zhuǎn)錄水平的剪切，可產(chǎn)生5種異構(gòu)體，根據(jù)氨基酸的長(zhǎng)短依次命名為VEGFl2l，VEGFl45，VEGFl65，VEGFl89和VEG206，其中VEGF121、VEGF165和VEGF189在人類表達(dá)。VEGF是腫瘤組織中最重要的促血管生長(zhǎng)因子，它參與腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)增殖、分化及轉(zhuǎn)移等過(guò)程。Liu等的研究表明：VEGF-C在食管癌組織中的表達(dá)明顯高于癌旁組織[6]；VEGF-C和VEGFR-D在食管癌中高表達(dá)可以促進(jìn)腫瘤的轉(zhuǎn)移[6,7]。本研究發(fā)現(xiàn)，食管癌原發(fā)灶及其復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移灶組織中COX-2、VEGF的表達(dá)均高表達(dá)，且COX-2和VEGF在食管癌原發(fā)灶及其復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移灶組織中的表達(dá)差異有顯著意義，與國(guó)內(nèi)外眾多報(bào)道相一致，且表明COX-2和VEGF在食管癌的復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移中起著重要作用。此外，COX-2和VEGF在食管癌原發(fā)灶與復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移灶間存在變化，變化率分別為8.5%和10.6%，表明COX-2和VEGF在食管癌的演進(jìn)過(guò)程可能發(fā)揮著重要作用。

此外，我們的研究還發(fā)現(xiàn)，COX-2與VEGF在食管癌原發(fā)灶及其復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移灶中的表達(dá)存在相關(guān)性，表明COX-2可能通過(guò)某種機(jī)制上調(diào)了VEGF的表達(dá)，從而促進(jìn)腫瘤的血管形成，加速其發(fā)展轉(zhuǎn)移。YEON等的研究發(fā)現(xiàn)，VEGF- C在食管鱗狀細(xì)胞癌中的表達(dá)與COX-2的表達(dá)密切相關(guān)，且VEGF-C與原發(fā)腫瘤的浸潤(rùn)深度，腫瘤分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)[8]。Su等在肺腺癌的研究中發(fā)現(xiàn)，COX-2可上調(diào)VEGF-C的表達(dá)，進(jìn)而促進(jìn)淋巴管生成和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移[9]。

總之，COX-2和VEGF在食管癌原發(fā)灶及其復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移灶中呈高表達(dá)狀態(tài)，且兩者之間存在有相關(guān)性。COX-2和VEGF均為食管癌發(fā)生發(fā)展中的重要因子，可能在不同的階段存在差異性表達(dá)，發(fā)揮不同的作用。

[1]Jemal A,Bray F,Center MM,et al.Global cancer statistics[J].CA Cancer J Clin,2011,61(2):69-90.

[2]Satoru N,Tatsuo K,Shin-ichi K,et al.Recurrence pattern of squamous cell carcinoma of the thoracic esophagus after extended radical esophagectomy with three field lymphadenectomy[J].J Am Coll Surg,2004,198(2):205-211.

[3]于鐘,袁宇紅,詹俊,等.食管癌中COX-2表達(dá)與其臨床病理特征及預(yù)后的關(guān)系[J].中國(guó)病理生理雜志,2006,22(11):2212-2217.

[4]Zhang L,Tu J, Yu ZL,et al.Effects of the inhibition of cyclooxygenase-2 on human esophageal cancer cells: inhibition of cell proliferation and induction of apoptosis[J].Pathol Oncol Res, 2010,16(1):39-45.

[5]Zhi H,Wang L,Zhang J,et al.Significance of COX-2 expression in human esophageal squamous cell carcinoma[J].Carcinogenesis, 2006,27(6):1214-1221.

[6]Liu P,Zhou J,Zhu H,et al.VEGF-C promotes the development of esophageal cancer via regulating CNTN-1 expression[J].Cytokine, 2011,55(1):8-17.

[7]Kozlowski M,Naumnik W,Niklinski J,et al.Vascular endothelial growth factor C and D expression correlates with lymph node metastasis and poor prognosis in patients with resected esophageal cancer[J].Neoplasma,2011,58(4):311-319.

[8]Byeon JS,Jung HY,Lee YJ,et al.Clinicopathological significance of vascular endothelial growth factor-C and cyclooxygenase-2 in esophageal squamous cell carcinoma[J].J Gastroenterol Hepatol, 2004,19(6):648-654.

[9]Su JL,Shih JY,Yen ML,et a1.Cyclooxygenase-2 induces EP1-and HER-2/N eu-dependent vascular endothelial growth factor-C up-regulation:a novel mechanism of lymphangiogenesis in lung adenocarcinoma [J].Cancer Res,2004,64(2):554-564.

The Expression and the Significance of COX-2 and VEGF in the Primary and Recurrent Focuses of Esophagus Cancer

ZHANG Wei-wei
(Department of Cancer Radiotherapy, Xinxiang Center Hospital, Xinxiang 453000, China)

ObjectiveTo investigate expressions of COX-2 and VEGF in the primary and recurrent focuses of esophagus cancer patients and their clinical significance.Methods47 cases of esophagus cancer patients were analysised on the expressions and the correlation between COX-2 and VEGF in the primary and recurrent focuses of esophagus cancer by immunohistochemistry.ResultsThe positive expression rates of COX-2 and VEGF were 82.9%, 61.7% in the primary esophagus cancer, and 87.2%, 68.1% in its recurrent focuses. COX-2 was related to VEGF in primary esophagus cancer and its recurrent focuses. The proportion of COX-2 and VEGF’s changing between the primary and recurrent esophagus cancer was 8.5% and 10.6% respectively.ConclusionCOX-2 and VEGF may act different effects in the development and progression of esophagus cancer, and their expressions are obviously different.

Esophagus cancer; COX-2; VEGF

R735.1

：B

：1671-8194（2013）04-0007-02

*通訊作者：E-mail：zww3654@126.com