蘇 賡，周志宇，李國成，莫秋榮，溫 偉

（1.廣西壯族自治區(qū)民族醫(yī)院 病理科，廣西 南寧530001；2.廣西壯族自治區(qū)民族醫(yī)院 神經(jīng)外科，廣西 南寧530001；3.廣西腦科醫(yī)院 神經(jīng)外科，廣西 柳州545005）

星形細(xì)胞瘤是最常見的神經(jīng)上皮性腫瘤，占顱內(nèi)腫 瘤 的 13%－26%，占 膠 質(zhì) 瘤 的 21.2%－50.6%［1］。腫瘤較易復(fù)發(fā)，臨床上預(yù)后較差，其主要的原因是星形細(xì)胞瘤大多呈侵襲性生長，手術(shù)難以徹底根治［2］。本文通過應(yīng)用免疫組化方法對(duì)50例星形細(xì)胞瘤進(jìn)行研究，以探討Galectin－3、nm23和CyclinD1蛋白在星形細(xì)胞瘤組織中的表達(dá)及其與復(fù)發(fā)和預(yù)后關(guān)系，為臨床提供參考研究。

1 材料與方法

1.1臨床資料

取我院和廣西腦科醫(yī)院自2001年1月年至2008年12月經(jīng)手術(shù)切除，病理確診、臨床資料較完整的50例星形細(xì)胞瘤進(jìn)行免疫組化研究，病程為1月至1年不等，術(shù)前均未經(jīng)放、化療，無糖尿病及甲亢等疾病。患者年齡為15－65歲，中位年齡為39歲，其中男性29例，女性21例；按照2000年WHO中樞神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤分類標(biāo)準(zhǔn)，其中Ⅰ級(jí)11例，Ⅱ級(jí)20例，高度惡性的Ⅲ－Ⅳ級(jí)共19例，全部病例跟蹤隨訪，并以3年內(nèi)是否復(fù)發(fā)作為反映預(yù)后的指標(biāo)。標(biāo)本經(jīng)10%福爾馬林液固定，常規(guī)石蠟包埋，3μm連續(xù)切片。

1.2免疫組化染色

Galectin－3、nm23和CyclinD1單克隆即用型抗體和S－PKits均購自北京中杉生物技術(shù)公司產(chǎn)品，按 S－P 法 操 作，DAB 顯 色。以 已 知 Galectin－3、nm23和CyclinD1陽性組織切片作為陽性對(duì)照，以PBS代替一抗作為陰性對(duì)照。

1.3結(jié)果判定

Galectin－3和nm23陽性表達(dá)定位于腫瘤細(xì)胞胞漿內(nèi)，CyclinD1陽性表達(dá)定位于腫瘤細(xì)胞胞核內(nèi)，均以出現(xiàn)棕褐色顆粒為陽性。每張切片隨機(jī)選擇10個(gè)高倍視野（10×40），計(jì)數(shù)1000個(gè)細(xì)胞，陽性細(xì)胞＜10%為陰性，≥10%為陽性。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)分析采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)所得數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，組間數(shù)據(jù)用χ2檢驗(yàn)，相關(guān)分析用Spearman等級(jí)相關(guān)分析，均以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 星形細(xì)胞瘤患者臨床病理特征與Galectin－3、nm23和CyclinD1蛋白表達(dá)的關(guān)系

50例星形細(xì)胞瘤中CyclinD1陽性表達(dá)者35例（70.00%）（見圖1），Galectin－3陽性表達(dá)者28例 （56.00%）（見圖2），nm23陽性表達(dá)者27例（54.00%）（見圖3）；Galectin－3、nm23和 CyclinD1蛋白表達(dá)均與星形細(xì)胞瘤的分化程度相關(guān)（P＜0.05），Galectin－3蛋白和CyclinD1蛋白的表達(dá)率隨著腫瘤分級(jí)升高表達(dá)率升高，nm23蛋白表達(dá)率隨著腫瘤分級(jí) 升 高 表 達(dá) 率 下 降；Galectin－3、nm23 和 CyclinD1蛋白表達(dá)均與患者性別和年齡不相關(guān)（P＞0.05），見表1。

表1 星形細(xì)胞瘤患者臨床病理特征與Galectin－3、nm23和CyclinD1蛋白表達(dá)的關(guān)系

圖1 Cyclin D1在IV型星形細(xì)胞瘤中的表達(dá)SP法X400倍

圖2 Galectin－3在IV型星形細(xì)胞瘤中的表達(dá)SP法X400倍

圖3 nm23在IV型星形細(xì)胞瘤中的表達(dá)SP法X400倍

2.2 星形細(xì)胞瘤中 CyclinD1、Galectin－3和 nm23蛋白表達(dá)的相關(guān)性

在35例CyclinD1陽性表達(dá)的星形細(xì)胞瘤中nm23陽性15例（42.86%），而CyclinD1陰性表達(dá)的15星形細(xì)胞瘤中nm23陽性12例（80.00%）（r＝0.342，P＝0.015）；在28例 Galectin－3陽性表達(dá)的星形細(xì)胞瘤中nm23陽性11例（39.29%），而Galectin－3陰性表達(dá)的22例星形細(xì)胞瘤中nm23陽性16例（72.73%）（r＝－0.333，P＝0.018），nm23與CyclinD1、Galectin－3在星形細(xì)胞瘤中的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)系，見表2。

2.3 星形細(xì)胞瘤患者 Galectin－3、nm23kip2和 CyclinD1蛋白表達(dá)與腫瘤復(fù)發(fā)關(guān)系

50例星形細(xì)胞瘤患者隨訪調(diào)查發(fā)現(xiàn)，其中3年內(nèi)復(fù)發(fā)者31例，無復(fù)發(fā)者19例。CyclinD1蛋白陽性表達(dá)組復(fù)發(fā)率為83.87%，明顯高于陰性表達(dá)組（47.37%），P＜0.05；Galectin－3蛋白陽性表達(dá)組復(fù)發(fā)率為70.97%，明顯高于陰性表達(dá)組（31.58%），P＜0.05；nm23蛋白陽性表達(dá)組復(fù)發(fā)率為38.71%，明顯低于陰性表達(dá)組（78.95%），P＜0.05，見表3。

表2 星形細(xì)胞瘤中Galectin－3、CyclinD1和nm23蛋白表達(dá)的相關(guān)性

表3 星形細(xì)胞瘤患者Galectin－3、nm23和CyclinD1蛋白表達(dá)與腫瘤復(fù)發(fā)關(guān)系

3 討論

細(xì)胞周期蛋白最早是通過35S－Met標(biāo)記法在早期分裂的海膽卵中發(fā)現(xiàn)的，因?yàn)槠錆舛群坑兄芷谛缘牟▌?dòng)，在有絲分裂前增加，在有絲分裂后消失，故稱周期蛋白［3］。其中Cyclin D1是細(xì)胞周期蛋白家族中的重要成員，其定位于11區(qū)13染色體，是G1期細(xì)胞增殖信號(hào)感受的關(guān)鍵蛋白，在蛋白質(zhì)G1－S期轉(zhuǎn)化中發(fā)揮正性調(diào)節(jié)作用［4］。有研究表明，Cyclin D1過度表達(dá)可使細(xì)胞G1期縮短，體積變小，對(duì)分裂原的依賴性減弱。其過度表達(dá)是多種人類原發(fā)性腫瘤的特征［5］，Cyclin D1已經(jīng)被證明在人類多種惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展中起重要作用，如生殖系統(tǒng)腫瘤、頭頸部腫瘤等［6，7］。本實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果顯示Cyclin D1蛋白在人腦星形細(xì)胞瘤中的表達(dá)從低級(jí)別組到高級(jí)別組表達(dá)水平依次增高，分別為45.45%，60.00%，94.74%，并且Cyclin D1陽性表達(dá)組復(fù)發(fā)率（83.87%）明顯高于Cyclin D1陰性性表達(dá)組復(fù)發(fā)率（47.37%），經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn)，具有顯著性（P＜0.05）。說明Cyclin D1的表達(dá)隨著星形細(xì)胞瘤惡性程度升高而升高，提示其表達(dá)可作為評(píng)價(jià)星形細(xì)胞瘤惡性程度的一個(gè)客觀指標(biāo)。

Galectin－3是一個(gè)31kD的β半乳糖蛋白，是一種細(xì)胞內(nèi)和細(xì)胞外的凝集素，主要與細(xì)胞內(nèi)的糖蛋白、細(xì)胞表面分子和細(xì)胞外基質(zhì)蛋白作用，參與前提mRNA剪切，調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖、粘附、侵襲和凋亡［8］。許多研究報(bào)道Galectin－3表達(dá)與人腦星形膠質(zhì)細(xì)胞瘤的侵襲、惡性程度分級(jí)及預(yù)后等生物學(xué)行為方面有不同的觀點(diǎn)。Bresalier（1997年）研究表明Galectin－3的表達(dá)水平與 WHO的分級(jí)呈正相關(guān)，即隨著惡性程度增加而增加［9］。然而，Gordower卻認(rèn)為星形細(xì)胞瘤中Galectin－3的表達(dá)水平是從低級(jí)到高級(jí)逐步降低，即Galectin－3的表達(dá)水平與 WHO的分級(jí)呈負(fù)相關(guān)［10］。Camby等研究表明 Galectin－3調(diào)節(jié)膠質(zhì)母細(xì)胞瘤遷移的潛能大，而遷移又與侵襲密切相關(guān)［11］；對(duì) H4、U373等細(xì)胞的裸鼠移植瘤實(shí)驗(yàn)也證實(shí)：腦實(shí)質(zhì)侵襲部分的Galectin－3表達(dá)顯著性高于非侵襲部分；不過Debray等應(yīng)用Galectin－3反義質(zhì)粒轉(zhuǎn)染膠質(zhì)母細(xì)胞瘤株U373細(xì)胞，結(jié)果侵襲性和粘附性均無顯著性改變［12］。在本研究中，我們發(fā)現(xiàn)星形細(xì)胞瘤Galectin－3的表達(dá)與腫瘤的 WHO分級(jí)呈正相關(guān)，即高級(jí)別星形細(xì)胞瘤中Galectin－3表達(dá)陽性率比低級(jí)別星形細(xì)胞瘤明顯增加，另外Galectin－3陽性表達(dá)率高的星形細(xì)胞瘤患者與陽性率低者相比，術(shù)后腫瘤復(fù)發(fā)率較高，分析原因可能是Galectin－3水平高的腫瘤侵襲性較強(qiáng)。我們的觀點(diǎn)與Bresalier類似，他研究發(fā)現(xiàn)星形細(xì)胞膠質(zhì)瘤浸潤帶內(nèi)有超過5%以上的細(xì)胞表達(dá)Galectin－3，而相鄰的正常腦組織內(nèi)細(xì)胞不表達(dá)Galectin－3，由此推測Galectin－3可能在腫瘤對(duì)周圍組織侵襲過程中起重要作用，我們可以推測Galectin－3是重要的腦星形細(xì)胞瘤預(yù)后相關(guān)因子。

Nm23基因是Steeg等［13］于1988年首次從小鼠黑色素瘤K－1735細(xì)胞株中用消減雜交法分離出來的能抑制肺癌轉(zhuǎn)移的相關(guān)基因，是一種腫瘤抑制基因，人類nm23基因定位于17號(hào)染色體的q22區(qū)。nm23基因編碼的蛋白產(chǎn)物通過信號(hào)傳導(dǎo)影響腫瘤細(xì)胞微管的組合，從而影響細(xì)胞微管、微絲等細(xì)胞骨架蛋白的活動(dòng)，通過參與調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)微管系統(tǒng)的狀態(tài)抑制腫瘤的轉(zhuǎn)移［14］。nm23基因在惡性腫瘤細(xì)胞內(nèi)具有等位基因缺失及基因突變的遺傳學(xué)特征［15］，其缺失與表達(dá)降低與多種惡性腫瘤的浸潤和轉(zhuǎn)移有關(guān)［16］。研究認(rèn)為，nm23與腫瘤的分化程度具有相關(guān)性［17］。本實(shí)驗(yàn)也表明nm23蛋白在人腦星形細(xì)胞瘤中的表達(dá)從低級(jí)別組到高級(jí)別組表達(dá)水平依次降低，分別為81.82%，60.00%，31.58%，nm23蛋白的表達(dá)率隨著星形細(xì)胞瘤惡性程度升高而降低；nm23蛋白陽性表達(dá)組復(fù)發(fā)率為38.71%，明顯低于陰性表達(dá)組（78.95%），差別有顯著性（P＜0.05），說明nm23蛋白在抑制星形細(xì)胞瘤復(fù)發(fā)機(jī)制中發(fā)揮著負(fù)性調(diào)控的作用。

另外本研究發(fā)現(xiàn)在星形細(xì)胞瘤中nm23與CyclinD1、Galectin－3在星形細(xì)胞瘤中的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)系（r＝ －0.342，P＝0.015；r＝ －0.333，P＝0.018），說明nm23與 CyclinD1、Galectin－3可能共同參與了星形細(xì)胞瘤的發(fā)生與發(fā)展。可能情況是，nm23作為腫瘤抑制基因與CyclinD1及Galectin－3相互制約，處于一種動(dòng)態(tài)平衡狀態(tài)，當(dāng)某種信號(hào)刺激下，腫瘤抑制基因nm23表達(dá)降低，CyclinD1及Galectin－3表達(dá)增強(qiáng)，促進(jìn)了腫瘤的發(fā)生發(fā)展及增殖侵襲作用。

本研究結(jié)果表明，本實(shí)驗(yàn)中CyclinD1、Galectin－3和nm23蛋白表達(dá)水平均顯示與星形細(xì)胞瘤生物學(xué)行為和預(yù)后相關(guān)，CyclinD1、Galectin－3蛋白高表達(dá)、nm23蛋白低表達(dá)或陰性者，腫瘤惡性程度程度高，進(jìn)展快，復(fù)發(fā)率高，預(yù)后差。筆者認(rèn)為聯(lián)合檢測人腦星形細(xì)胞瘤中CyclinD1、Galectin－3和nm23蛋白表達(dá)水平對(duì)判斷人腦星形細(xì)胞瘤惡性程度及預(yù)后的有指導(dǎo)意義。至于能否根據(jù)CyclinD1、Galectin－3和nm23蛋白的異常表達(dá)為星形細(xì)胞瘤患者提供有效的、個(gè)體化的治療方案還有待于進(jìn)一步的臨床實(shí)踐研究。

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