梁大立 李介華 藍(lán)永樂(lè) 邱瑞霞 黃延峰

暨南大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬清遠(yuǎn)醫(yī)院 清遠(yuǎn)市人民醫(yī)院檢驗(yàn)中心，廣東清遠(yuǎn) 511500

電化學(xué)發(fā)光免疫分析 （electrochemiluminescence immunoassay，ECLIA）是電化學(xué)發(fā)光和免疫測(cè)定相結(jié)合的新一代標(biāo)記免疫測(cè)定技術(shù)。因標(biāo)志物為非放射性物質(zhì)，而且實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化，具有快速、簡(jiǎn)便、靈敏、特異等特點(diǎn)，己廣泛應(yīng)用于各種激素、腫瘤標(biāo)志物、藥物及其他微量生物活性物質(zhì)的測(cè)定[1]，但配套試劑均需進(jìn)口，測(cè)定成本高，為獨(dú)立包裝、固定測(cè)試數(shù)、條碼自動(dòng)記錄，使瓶中殘余試劑不能再利用而造成浪費(fèi)。為充分利用醫(yī)學(xué)資源，在保證檢驗(yàn)質(zhì)量的前提下，筆者對(duì)羅氏E170電化學(xué)發(fā)光免疫分析儀殘余試劑混合再利用的可行性進(jìn)行研究，現(xiàn)報(bào)道如下：

1 儀器與試藥

1.1 儀器

瑞士羅氏公司E170全自動(dòng)電化學(xué)發(fā)光免疫分析儀。

1.2 試藥

定標(biāo)物為羅氏原裝配套，PCT質(zhì)控物為羅氏公司提供，批號(hào)為168843、168845；CA72-4質(zhì)控物為美國(guó)伯樂(lè)公司提供，批號(hào)為54551、54553。新試劑為羅氏E170原裝配套試劑；混合試劑為羅氏E170同一項(xiàng)目、同一批號(hào)的試劑，經(jīng)儀器掃描條碼為0測(cè)試，將瓶中殘余試劑每3～4瓶混合為1瓶。所有試劑均在有效期內(nèi)使用。

2 方法與結(jié)果

2.1 方法

2.1.1 手工輸入條碼信息 將羅氏三聯(lián)裝試劑白色瓶上的15位數(shù)字信息，輸入到相應(yīng)的試劑位空白欄。

2.1.2 定標(biāo)與質(zhì)控 按要求保養(yǎng)儀器，對(duì)E170分析儀所檢驗(yàn)項(xiàng)目進(jìn)行定標(biāo)及常規(guī)質(zhì)控，定標(biāo)通過(guò)及室內(nèi)質(zhì)控在控方可進(jìn)行以下實(shí)驗(yàn)。

2.1.3 混合試劑精密度試驗(yàn) 根據(jù)《體外診斷試劑分析性能評(píng)估指導(dǎo)原則》進(jìn)行，取高、低2個(gè)濃度的質(zhì)控物，每天做2批次的測(cè)試，每批次測(cè)試時(shí)，對(duì)同一樣品作雙份測(cè)定，共做20 d。得80個(gè)測(cè)試結(jié)果，計(jì)算批內(nèi)及批間精密度。

2.1.4 混合試劑準(zhǔn)確性測(cè)試 兩種試劑分別檢測(cè)PCT、CA72-4高、低濃度質(zhì)控物各20次，檢查分析結(jié)果是否在允許范圍內(nèi)，并進(jìn)行結(jié)果比較。

2.1.5 標(biāo)本測(cè)定 用新試劑和混合試劑對(duì)80例血清樣本進(jìn)行PCT、CA72-4測(cè)定，對(duì)結(jié)果進(jìn)行比較及相關(guān)性分析。

2.1.6 回收試驗(yàn) 分別在1000μL正常血清內(nèi)加入PCT、CA72-4低值、高值質(zhì)控血清100μL，制成2個(gè)待測(cè)標(biāo)本進(jìn)行回收試驗(yàn)，每樣本用混合試劑重復(fù)檢測(cè)3次，取平均值，計(jì)算回收率?；厥章蕿?0%～110%，結(jié)果為可接受[2]。

2.1.7 穩(wěn)定性試驗(yàn) 每天用羅氏與伯樂(lè)低值、高值質(zhì)控物作為監(jiān)控品，對(duì)混合試劑進(jìn)行3周監(jiān)控。

2.2 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

本研究所有數(shù)據(jù)采用SPSS 12.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料以（）表示，進(jìn)行 t檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2.3 結(jié)果

2.3.1 混合試劑精密度檢測(cè)結(jié)果 混合試劑檢測(cè)質(zhì)控物PCT、CA72-4批內(nèi)、批間CV均 ＜5%，符合衛(wèi)生部臨床檢驗(yàn)中心的要求（＜ 10%）（表 1）。

表1 原裝與混合試劑檢測(cè)質(zhì)控血清PCT、CA72-4批內(nèi)、批間CV的比較（%）

2.3.2 混合試劑準(zhǔn)確性檢測(cè)結(jié)果 混合試劑測(cè)得PCT、CA72-4低、高濃度質(zhì)控物各20次結(jié)果與靶值結(jié)果比較，PCT、CA72-4其20次結(jié)果均在質(zhì)控允許范圍內(nèi)，經(jīng)單樣本t檢驗(yàn)，兩項(xiàng)目各濃度測(cè)定值差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）（表 2）。

表2 混合試劑準(zhǔn)確性檢測(cè)結(jié)果

表2 混合試劑準(zhǔn)確性檢測(cè)結(jié)果

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2.3.3 原裝試劑與混合試劑檢測(cè)血清樣本結(jié)果 原裝新試劑與混合試劑檢測(cè)80例血清樣本的PCT、CA72-4的結(jié)果相關(guān)系數(shù)（r）分別為0.998、0.997，兩種試劑測(cè)定結(jié)果經(jīng)配對(duì)樣本t檢驗(yàn)，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均 ＞0.05）（表3）。

表3 80例標(biāo)本原裝試劑與混合試劑檢測(cè)血清PCT、CA72-4結(jié)果

表3 80例標(biāo)本原裝試劑與混合試劑檢測(cè)血清PCT、CA72-4結(jié)果

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2.3.4 混合試劑回收試驗(yàn)結(jié)果 PCT、CA72-4的低值回收率分別是96.3%、101.5%，PCT、CA72-4的高值回收率分別是96.8%、105.9%。

2.3.5 混合試劑穩(wěn)定檢測(cè)結(jié)果 低、高值質(zhì)控品21次檢測(cè)結(jié)果有均在允許范圍之內(nèi)，未出現(xiàn)失控，經(jīng)單樣本t檢驗(yàn)，兩項(xiàng)目各濃度測(cè)定值差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）（表4）。

3 討論

羅氏E170電化學(xué)發(fā)光免疫分析儀克服了放射免疫分析試劑有效期短和輻射污染、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)易受溫度、酸堿度變化的影響，以及化學(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù)中發(fā)光分子只能利用一次的缺點(diǎn)，分析過(guò)程可通過(guò)電場(chǎng)精確控制，因此具有特異性好、靈敏度高、線性測(cè)定范圍寬、操作的自動(dòng)化程度高等優(yōu)點(diǎn)[3]，國(guó)內(nèi)外均有文獻(xiàn)對(duì)其綜合性能進(jìn)行了分析并給予較高評(píng)價(jià)[4-6]。

表4 混合試劑準(zhǔn)確性檢測(cè)結(jié)果

表4 混合試劑準(zhǔn)確性檢測(cè)結(jié)果

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羅氏E170電化學(xué)發(fā)光試劑為專用試劑，每套試劑條碼記錄為100個(gè)測(cè)試，當(dāng)檢測(cè)了100個(gè)樣本后，儀器即默認(rèn)該套試劑為“零”個(gè)測(cè)試，試劑瓶?jī)?nèi)雖有殘余試劑，但儀器不會(huì)再進(jìn)行檢測(cè)。經(jīng)2年多實(shí)踐觀察，每套試劑殘余量約為25%，與文獻(xiàn)報(bào)道的每套試劑有20%～30%的試劑剩余量相近，因此棄之不用，造成較大浪費(fèi)[7]。

本研究結(jié)果顯示，對(duì)混合的殘余試劑進(jìn)行21 d監(jiān)控，PCT、CA72-4兩項(xiàng)目高、低水平質(zhì)控物測(cè)定結(jié)果均在控，兩項(xiàng)目各濃度差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，說(shuō)明混合試劑3周內(nèi)有較好的穩(wěn)定性；混合試劑檢測(cè)質(zhì)控物PCT、CA72-4兩項(xiàng)目的精密度、準(zhǔn)確性、回收率等實(shí)驗(yàn)性能指標(biāo)均符合相關(guān)實(shí)驗(yàn)要求，新試劑與混合試劑檢測(cè)患者血清樣本的PCT、CA72-4的結(jié)果相關(guān)性良好，且測(cè)定結(jié)果差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，說(shuō)明混合試劑性能穩(wěn)定，檢測(cè)質(zhì)量可靠。實(shí)踐工作中應(yīng)注意每盒試劑的穩(wěn)定期，羅氏E170試劑盒開封后2～8℃可穩(wěn)定12周，放在E170免疫分析儀上4周，如置20～25℃約為20 h。因此，檢測(cè)完畢后，試劑盡快放入4℃冰箱保存，蓋緊試劑瓶，防止試劑水分蒸發(fā)，造成變質(zhì)。同一項(xiàng)目、同一批號(hào)的混合殘余試劑在一定時(shí)間內(nèi)檢測(cè)結(jié)果可靠，殘余試劑在4周內(nèi)盡快再利用[8]。殘余試劑混合再利用檢測(cè)前應(yīng)先進(jìn)行定標(biāo)，檢測(cè)時(shí)設(shè)置高、低水平質(zhì)控在檢測(cè)前、中、后進(jìn)行嚴(yán)密監(jiān)控，在定標(biāo)曲線合格和質(zhì)控都在控的情況下測(cè)定結(jié)果方為有效。實(shí)踐證明E170試劑盒的殘余試劑混合再利用，操作簡(jiǎn)便可行、穩(wěn)定性好、測(cè)定結(jié)果可靠，能節(jié)約1/4檢測(cè)成本，減少醫(yī)學(xué)資源浪費(fèi)。

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