趙振軍　劉勤晉

摘要：采用高效液相色譜等技術(shù)分析了下關(guān)小沱茶新茶、下關(guān)小沱茶發(fā)酵茶的主要功能成分，并以高脂飼料喂養(yǎng)昆明種小白鼠，建立了高血脂癥模型，觀察下關(guān)小沱茶對小白鼠肝臟指數(shù)變化及血清指標(biāo)中血脂成分和動脈硬化指數(shù)等方面的影響。結(jié)果表明，下關(guān)小沱茶新茶中的水浸出物、茶多酚、酯型兒茶素（EGCG、ECG、GCG）與非酯型兒茶素（EGC、DL-C、EC）等功能成分的含量均高于下關(guān)小沱茶發(fā)酵茶；下關(guān)小沱茶發(fā)酵茶中沒食子酸的含量高于下關(guān)小沱茶新茶，并含有少量的洛伐他汀成分。下關(guān)小沱茶能顯著降低小白鼠的肝臟指數(shù)，并能顯著降低血清中甘油三酯（TG）、總膽固醇（TC）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）含量和動脈硬化指數(shù)，提高高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）含量。由于下關(guān)小沱茶發(fā)酵茶中含有茶多酚、兒茶素及洛伐他汀等功能成分，是一種非常好的降脂保健飲料。

關(guān)鍵詞：下關(guān)小沱茶；功能成分；降血脂作用

中圖分類號：TS272.5+4；Q946；R589.2 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A 文章編號：0439-8114（2013）06-1334-04

下關(guān)小沱茶是近年來云南省大理市下關(guān)鎮(zhèn)等地生產(chǎn)的一種攜帶便利、沖泡方便的特種緊壓茶，根據(jù)生產(chǎn)工藝的不同，分為新茶（生沱茶）和發(fā)酵茶（熟沱茶）。由于采用了最新的原料配方、緊壓成形等技術(shù)并結(jié)合下關(guān)地區(qū)具有地域特點(diǎn)的微生物發(fā)酵優(yōu)勢，形成了其特有的生化品質(zhì)與降脂功能，因而深受廣大消費(fèi)者的喜愛。雖然針對普洱茶、生沱茶中生化成分與品質(zhì)形成、降血脂作用等的研究較多[1-3]，但關(guān)于下關(guān)小沱茶（包括新茶與發(fā)酵茶）這種新興的緊壓茶產(chǎn)品的功能成分及降脂作用的研究至今未見報道。一般認(rèn)為茶葉中具有降脂作用的成分主要是茶多酚，宋小鴿等[4]通過對高血脂癥大鼠茶多酚溶液灌胃試驗，發(fā)現(xiàn)茶多酚可降低大鼠體內(nèi)的甘油三酯（TG）、總膽固醇（TC）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）的含量，同時提高了高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）的含量，具有防治高血脂癥的作用。普洱茶中調(diào)節(jié)血脂的藥用有效成分洛伐他汀的發(fā)現(xiàn)則為研究普洱茶的降血脂功能提供了新的思路[5， 6]。試驗通過對下關(guān)小沱茶（包括新茶與發(fā)酵茶）的功能成分進(jìn)行分析，同時結(jié)合下關(guān)小沱茶的小白鼠降血脂試驗，試圖為探索下關(guān)小沱茶降血脂作用機(jī)理提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

試驗材料選擇當(dāng)年生產(chǎn)的下關(guān)小沱茶（新茶與新茶發(fā)酵茶）和存放5年的發(fā)酵茶，茶樣均由云南下關(guān)沱茶（集團(tuán)）股份有限公司提供；試驗動物為清潔級昆明種小白鼠；普通顆粒狀基礎(chǔ)飼料、高脂飼料均由重慶滕鑫生物公司提供，高脂飼料配方由10.0%豬油、1.0%膽固醇、10.0%蛋黃粉、0.2%牛膽鹽和78.8%基礎(chǔ)飼料組成；所用生化試劑盒均購于上海北海生物技術(shù)工程有限公司，其他化學(xué)試劑均為分析純。儀器與設(shè)備主要有FA2004A電子天平（上海精天電子儀器有限公司），旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器（上海青浦滬西儀器廠），DNP-9052型電熱恒溫培養(yǎng)箱（上海精宏實驗設(shè)備有限公司），BS-IE振蕩培養(yǎng)箱（浙江金壇市富華儀器有限公司）；2010型液相色譜儀（日本島津公司）；TU-1900PC 型紫外-可見分光光度計（北京普析通用儀器有限責(zé)任公司）等。

1.2 方法

1.2.1 茶湯制備 稱取磨碎的下關(guān)小沱茶3種茶樣各25 g，在100 ℃沸水中用500 mL煮沸的去離子水回流萃取30 min，過濾后將茶湯真空低溫干燥（45～50 ℃），完全干燥后加去離子水溶解，最后定容制備成濃度為500 mg/mL的茶湯，4 ℃貯藏，備用。

1.2.2 高血脂癥模型建立及試驗動物分組 選擇生長健康、體格健壯的成年小白鼠144只，按體重隨機(jī)分為10個組，其中普通對照組（CK）有小白鼠16只，喂普通顆粒狀基礎(chǔ)飼料；高血脂癥模型組（HF）有小白鼠16只，喂高脂飼料；沱茶茶湯灌胃組有8個組，每組14只小白鼠，按灌胃茶湯的類型與濃度分為新茶灌胃組（RTHF），編號分別為1～4組，對應(yīng)的新茶茶湯濃度分別為500、1 000、2 000、5 000 mg/（kg·bw）；發(fā)酵茶（存放5年的發(fā)酵茶）灌胃組（FTHF），編號分別為5～8組，對應(yīng)的發(fā)酵茶茶湯濃度分別為500、1 000、2 000、5 000 mg/（kg·bw）。每組小白鼠雌雄各半，組間小白鼠體重經(jīng)單因素統(tǒng)計分析沒有出現(xiàn)顯著差異。

1.2.3 功能成分測定 下關(guān)小沱茶3種茶樣茶湯的水浸出物含量采用重量法[7]測定、茶多酚含量采用酒石酸鐵法[7]測定、氨基酸含量采用茚三酮比色法[7]測定；咖啡堿、沒食子酸與兒茶素組分（包含酯型兒茶素EGCG、ECG、GCG與非酯型兒茶素EGC、DL-C、EC）分析及洛伐他汀含量的檢測采用高效液相色譜法[2，8]。

1.2.4 小白鼠有關(guān)指標(biāo)測定 茶湯灌胃40 d后，各組小白鼠禁食16 h以上，然后摘眼球取血，并取出肝臟稱重；血液樣本在常溫下靜置30 min后3 000 r/min離心15 min[9，10]，獲得的小白鼠血清在冰箱中4 ℃保存，備用。應(yīng)用生化試劑盒分別測定小白鼠血清中的總膽固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白膽固醇、低密度脂蛋白膽固醇的含量，具體操作參照生化試劑盒使用說明書完成。計算肝臟指數(shù)和動脈硬化指數(shù)，肝臟指數(shù)=肝重/體重；動脈硬化指數(shù)（AI）=低密度脂蛋白含量/高密度脂蛋白含量[11]。

1.3 統(tǒng)計方法

采用SPSS 10.0統(tǒng)計軟件對小白鼠生長指標(biāo)與血清指標(biāo)進(jìn)行方差分析（ANOVA）和鄧肯氏多重極差檢驗（Duncans multiple range test），所得數(shù)據(jù)以“均值±標(biāo)準(zhǔn)誤”表述。

2 結(jié)果與分析

2.1 下關(guān)小沱茶的功能成分

下關(guān)小沱茶各茶樣主要成分檢測結(jié)果見表1。由表1可見，下關(guān)小沱茶茶湯中水浸出物和茶多酚含量隨發(fā)酵時間的增加呈降低趨勢；而沒食子酸的含量隨發(fā)酵時間增加逐漸升高；蛋白質(zhì)、咖啡堿的含量變化不大，幾乎不受發(fā)酵及貯藏年限等因素的影響。此外，從發(fā)酵茶中檢測到了洛伐他汀的存在，其含量以存放5年的發(fā)酵下關(guān)小沱茶最高，當(dāng)年生產(chǎn)并發(fā)酵的下關(guān)小沱茶要低一些，而當(dāng)年下關(guān)小沱茶新茶不含洛伐他汀。

2.2 下關(guān)小沱茶中兒茶素組分分析

下關(guān)小沱茶各茶樣中兒茶素組分分析檢測結(jié)果見表2。從表2可見，當(dāng)年生產(chǎn)的下關(guān)小沱茶新茶中酯型兒茶素（EGCG、ECG、GCG）與非酯型兒茶素（EGC、DL-C、EC）的含量均高于發(fā)酵的下關(guān)小沱茶；當(dāng)年生產(chǎn)的下關(guān)小沱茶新茶、 當(dāng)年生產(chǎn)并發(fā)酵的下關(guān)小沱茶及存放5年的發(fā)酵下關(guān)小沱茶中的酯型兒茶素與非酯型兒茶素的比值分別為2.55、1.77和0.55，這個結(jié)果與下關(guān)小沱茶發(fā)酵時間長短呈現(xiàn)出一種負(fù)相關(guān)的關(guān)系。

2.3 下關(guān)小沱茶茶湯灌胃對小白鼠生長的影響

下關(guān)小沱茶茶湯灌胃對小白鼠體重生長的影響結(jié)果見表3。在實驗期間觀察到，普通對照組、高血脂癥模型組以及下關(guān)小沱茶茶湯灌胃各濃度組的小白鼠毛質(zhì)潔白、具光澤，飲食正常、無稀便出現(xiàn)；其中新茶灌胃組隨茶湯濃度的增加，小白鼠的興奮度增強(qiáng)，特別是高濃度的新茶組（2、3、4組）出現(xiàn)了高頻率的小白鼠爭斗現(xiàn)象，并有7只雄性小白鼠因為爭斗而死亡；而存放5年的發(fā)酵茶灌胃組的小白鼠其行為未出現(xiàn)異常。在保證飼料不出現(xiàn)剩余的前提下，每天喂食小白鼠正常所需的飼料量，結(jié)果高血脂癥模型組小白鼠的體重極顯著高于普通飼料組和下關(guān)小沱茶茶湯灌胃組的小白鼠體重（P﹤0.01）。在茶湯灌胃等量濃度前提下，新茶組小白鼠體重高于發(fā)酵茶組的小白鼠體重；隨著灌胃濃度的增加，小白鼠體重總體上呈降低的趨勢。在肝臟指數(shù)上，高血脂癥模型組小白鼠的肝臟指數(shù)極顯著高于普通對照組和下關(guān)小沱茶茶湯灌胃各濃度組的小白鼠肝臟指數(shù)（P<0.01）。

2.4 下關(guān)小沱茶茶湯灌胃對小白鼠血清指標(biāo)中血脂成分的影響

下關(guān)小沱茶茶湯灌胃對小白鼠血脂指標(biāo)的影響結(jié)果見表3。從表3可見，下關(guān)小沱茶茶湯灌胃的新茶、存放5年的發(fā)酵茶2大組的小白鼠血清總膽固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白膽固醇含量及動脈硬化指數(shù)與高血脂癥模型組相比極顯著降低（P<0.01），高密度脂蛋白膽固醇含量較高血脂癥模型組與普通對照組的極顯著升高（P<0.01）；下關(guān)小沱茶茶湯灌胃濃度相同的新茶、存放5年的發(fā)酵茶之間對降低小白鼠血清總膽固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白膽固醇含量的效果沒有顯著差異（P>0.05）；隨著茶湯灌胃濃度的增加，小白鼠血清中的甘油三酯、低密度脂蛋白膽固醇含量基本上呈下降趨勢，而高密度脂蛋白膽固醇含量呈升高趨勢；下關(guān)小沱茶茶湯灌胃的新茶、存放5年的發(fā)酵茶2大組的小白鼠動脈硬化指數(shù)極顯著低于高血脂癥模型組（P<0.01），其中存放5年的發(fā)酵茶灌胃后降低動脈硬化指數(shù)的效果比同等濃度新茶組灌胃的要好，并且高濃度比低濃度的效果要好。

3 討論

研究顯示，當(dāng)年生產(chǎn)并發(fā)酵的的下關(guān)小沱茶和存放5年的發(fā)酵下關(guān)小沱茶中的主要功能成分茶多酚、酯型兒茶素與非酯型兒茶素等的含量明顯低于當(dāng)年生產(chǎn)的下關(guān)小沱茶新茶，但沒食子酸含量高于當(dāng)年生產(chǎn)的下關(guān)小沱茶新茶，個中原因可能與下關(guān)小沱茶在發(fā)酵過程中，茶葉中的茶多酚特別是酯型兒茶素與非酯型兒茶素均發(fā)生氧化降解，形成了小分子沒食子酸類等物質(zhì)有關(guān)[12，13]。與非酯型兒茶素相比，酯型兒茶素更容易氧化降解，導(dǎo)致下關(guān)小沱茶發(fā)酵茶中非酯型兒茶素占總兒茶素的比例逐漸增加。

當(dāng)年生產(chǎn)的下關(guān)小沱茶（包括新茶、發(fā)酵茶）與存放5年的發(fā)酵下關(guān)小沱茶中咖啡堿的含量沒有明顯差異，說明下關(guān)小沱茶中咖啡堿的含量不會受到發(fā)酵的影響；但是在下關(guān)小沱茶茶湯灌胃小白鼠試驗過程中發(fā)現(xiàn)，新茶灌胃組隨濃度增加，小白鼠興奮度增加，特別是高濃度的新茶灌胃組（2、3、4組）出現(xiàn)了高頻率的小白鼠爭斗現(xiàn)象，并有7只雄性小白鼠因為爭斗而死亡，而發(fā)酵茶灌胃組的小白鼠行為未見異常。相同濃度的新茶、發(fā)酵茶其咖啡堿含量相當(dāng)，而小白鼠興奮度出現(xiàn)差異的結(jié)果說明新茶、發(fā)酵茶中的咖啡堿對神經(jīng)系統(tǒng)的興奮作用出現(xiàn)了差異，這可能與新茶、發(fā)酵茶中的咖啡堿存在形態(tài)有關(guān)。有研究表明，普洱發(fā)酵茶中的咖啡堿是以與茶多酚絡(luò)合的形態(tài)存在[14]，而絡(luò)合態(tài)的咖啡堿對動物神經(jīng)系統(tǒng)的興奮刺激能力明顯降低。

試驗還從發(fā)酵的下關(guān)小沱茶中檢測到了洛伐他汀的存在（含量為0.08～0.09 μg/g），洛伐他汀是下關(guān)小沱茶在發(fā)酵過程中由青霉屬（Penicillium spp.）[15]和木霉屬（Trichoderma spp.）[16]的部分真菌產(chǎn)生的一種內(nèi)酯化合物，其在降低人類及動物的總膽固醇和低密度脂蛋白膽固醇方面具有顯著效果。

高血脂癥主要是指人類體內(nèi)血清總膽固醇、甘油三酯高于正常值上限的脂代謝障礙病癥[17]，血清總膽固醇、甘油三酯水平升高是動脈粥樣硬化性疾病的重要危險因素，尤其是同時伴有低密度脂蛋白膽固醇升高或高密度脂蛋白膽固醇降低時危險性更大，因為低密度脂蛋白膽固醇是影響動脈粥樣硬化疾病發(fā)生的重要誘導(dǎo)因素，其含量水平與冠心病發(fā)病率呈正相關(guān)[18]。動脈硬化指數(shù)是血脂各成分及其之間的關(guān)系結(jié)合起來進(jìn)行綜合考慮、可反映患動脈硬化疾病可能性高低的重要指標(biāo)。下關(guān)小沱茶茶湯灌胃高血脂癥模型小白鼠試驗表明，下關(guān)小沱茶茶湯對小白鼠血清總膽固醇、甘油三酯和低密度脂蛋白膽固醇均有明顯的降低作用。在不改變高脂飲食的情況下，通過下關(guān)小沱茶茶湯灌胃可以顯著降低高脂小白鼠的血清總膽固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白膽固醇的水平以及動脈硬化指數(shù)，說明下關(guān)小沱茶具有較好的降血脂和降低高脂小白鼠患動脈硬化疾病的能力。

下關(guān)小沱茶降血脂動物試驗結(jié)果表明，發(fā)酵茶的效果優(yōu)于當(dāng)年新茶，說明下關(guān)小沱茶降血脂功效可能跟茶多酚或兒茶素（特別是酯型兒茶素EGCG）的含量高低沒有必然的聯(lián)系；決定下關(guān)小沱茶降血脂功效高低的因素可能與其他功能成分如洛伐他汀有關(guān)，并且可能是下關(guān)小沱茶中的茶多酚與其他功能成分（如洛伐他汀等）協(xié)同作用的結(jié)果。

致謝：試驗得到云南下關(guān)沱茶（集團(tuán)）股份有限公司多次提供樣品，特此致謝。

參考文獻(xiàn)：

[1] 邵宛芳，楊樹人.云南普洱茶品質(zhì)與化學(xué)成分關(guān)系的初步研究[J].云南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報，1994，9（1）：17-22.

[2] 徐仲溪，王坤波，周躍斌，等.沱茶生化成分與品質(zhì)形成的關(guān)系[J].湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報（自然科學(xué)版），2005，31（1）：53-56.

[3] 吳文華.曬青毛茶、普洱茶降血脂功能比較[J].福建茶葉，2004（4）：30.

[4] 宋小鴿，唐照亮，侯正明，等.茶多酚對大鼠高血脂預(yù)防作用[J]. 中醫(yī)研究，1998，11（1）：19-20.

[5] HWANG L S， LIN L C， CHEN N T， et al. Hypolipidemic effect and antiatherogenic potential of pu-erh tea[J]. ACS Symp Ser，2003（59）：87-103.

[6] 謝春生，謝知音.普洱茶中降血脂的有效成分他汀類化合物的新發(fā)現(xiàn)[J].河北醫(yī)學(xué)，2006（12）：1326-1327.

[7] 鐘 蘿，王月根，施兆鵬，等.茶葉品質(zhì)理化分析[M].上海：上海科學(xué)技術(shù)出版社，1989.235-248.

[8] MIAO X S， METCALFE C D. Determination of cholesterol-lowering statin drugs in aqueous samples using liquid chromatography-electrospray ionization tandem mass spectrometry[J]. Journal of Chromatography A，2003，989：131-141.

[9] 郭于瑜.血液的抗凝及血清的分離方法簡介[J].貴州畜牧獸醫(yī)，2002，26（3）：29-30.

[10] 陸 潔.一次性塑料試管對血清分離的影響[J].中國現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志，2000，10（11）：105.

[11] 吳文華. 曬青毛茶和普洱茶降血脂作用比較試驗[J]. 中國茶葉，2006（1）：15.

[12] 陳宗道，劉勤晉，周才瓊.微生物與普洱茶發(fā)酵[J].茶葉科技，1985（4）：4-7.

[13] 周紅杰，李家華，趙龍飛，等.渥堆過程中主要微生物對云南普洱茶品質(zhì)形成的研究[J]. 茶葉科學(xué)，2004，24（3）：212-218.

[14] 劉勤晉.中國普洱茶之科學(xué)讀本[M].廣州：廣東旅游出版社，2005.

[15] ENDO A， KURODA M， TASUJITA Y. ML-236A， ML-236B and ML-236C， new inhibitors of cholestrogenesis produced by Penicillium citrinum[J]. J Antibiot，1976，29：1346-1348.

[16] ENDO A， HAUSAMI K， YAMADA A， et al. The synthesis of compactin（ML-236B） and monacolin K in fungi[J]. J Antibiot，1986，39： 1609-1616.

[17] 張潔宏，趙 鵬，李 彬，等.清輕膠囊輔助降血脂功能的實驗研究[J].中國熱帶醫(yī)學(xué)， 2009，9（1）：53-54.

[18] 李 博，李志西，魏 瑛，等.麩皮及黑曲對玉米醋減肥降血脂作用的影響[J].西北農(nóng)林科技大學(xué)學(xué)報（自然科學(xué)版），2009，37（2）：194-198.