雷新開(kāi)

摘要：對(duì)黃牛多次免疫接種牛羊口蹄疫O型亞洲1型滅活苗的抗體效價(jià)進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果表明，首免、二免、三免多次免疫牛羊口蹄疫O型亞洲1型滅活苗獲得免疫效果和抗體水平依次不同。其中首免、二免的免疫抗體水平較低，免疫合格率為63%左右，三免的免疫抗體水平較高，免疫合格率達(dá)93.3%以上，免疫的整體水平達(dá)到國(guó)家規(guī)定要求。

關(guān)鍵詞：口蹄疫；免疫接種；抗體檢測(cè)；比較試驗(yàn)

中圖分類(lèi)號(hào)：S851.35 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：B 文章編號(hào)：1007-273X（2013）06-0029-02

口蹄疫是由口蹄疫病毒引起的以偶蹄動(dòng)物為主的急性、熱性、高度接觸性傳染病。被列為A類(lèi)傳染病的首位，我國(guó)將它列為一類(lèi)動(dòng)物傳染病?？谔阋卟《居?個(gè)血清型，其中O型亞洲Ⅰ型影響最為嚴(yán)重。為有效預(yù)防口蹄疫的發(fā)生和傳播，實(shí)行以春秋兩季免疫為主，長(zhǎng)期進(jìn)行全覆蓋強(qiáng)制免疫的口蹄疫免疫程序。在具體操作過(guò)程中，發(fā)現(xiàn)首次接種疫苗主要是激活免疫細(xì)胞產(chǎn)生免疫記憶，產(chǎn)生的抗體水平不高，也存在有個(gè)體免疫應(yīng)答的差異。免疫間隔時(shí)間長(zhǎng)短也直接影響免疫抗體水平的高低，不能形成較高的保護(hù)力，達(dá)不到抵御外界病毒侵襲的抗體水平。為使畜群免疫抗體水平能始終保持在有效保護(hù)的狀態(tài)，應(yīng)用牛羊口蹄疫病毒O型亞洲Ⅰ型滅活疫苗進(jìn)行多次免疫對(duì)比試驗(yàn)，檢測(cè)黃牛體內(nèi)的免疫抗體水平情況和形成保護(hù)力的狀況，旨在為有效防控該病提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

（1）試驗(yàn)動(dòng)物。選擇昭平縣五將鎮(zhèn)義德村黃新牛場(chǎng)30頭黃牛作為試驗(yàn)對(duì)象。

（2）抗體檢測(cè)儀器。酶標(biāo)分析儀ZMX-988B型全自動(dòng)酶標(biāo)洗板機(jī)，臺(tái)式高速離心機(jī)（sigma1-15K），KH系列智能型電熱恒溫器；96孔ELISA板、U型96孔抗原抗體反應(yīng)板、封板膜等。

（3）疫苗及試劑。牛羊口蹄疫病毒O型亞洲Ⅰ型滅活疫苗由賀州市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心統(tǒng)一調(diào)撥，是新疆金宇保靈生物有限公司生產(chǎn)，批號(hào)2216006，檢測(cè)O型亞洲Ⅰ型口蹄疫抗體所用正向間接血凝試劑為中國(guó)農(nóng)科院蘭州獸醫(yī)研究所生產(chǎn)，批號(hào)20121013，均在有效期內(nèi)。

1.2 方法

（1）試驗(yàn)方法。選擇30頭2～3歲的黃牛進(jìn)行首次免疫注射牛羊口蹄疫病毒O 型亞洲Ⅰ型二價(jià)滅活疫苗，每頭2.0 mL，間隔30 d進(jìn)行二次免疫，依次間隔30 d，對(duì)30頭黃進(jìn)行第3次免疫接種，要求免疫接種口蹄疫病毒O型亞洲Ⅰ型滅活疫苗的時(shí)間和間隔時(shí)間要一致。

（2）采樣方法。分為2個(gè)試驗(yàn)組，即二免組（2B組）和三免組（3B組）。二免后30 d，分別對(duì)已進(jìn)行第二次免疫的30頭試驗(yàn)黃牛進(jìn)行血液采樣，共采血30份，每頭牛采血10 mL，并將采集的血樣離心，分離出血清樣品不能溶血，無(wú)菌分離血清待檢。三免后30 d，同樣對(duì)已經(jīng)免疫第3次的30頭試驗(yàn)黃牛進(jìn)行血液采樣，共采血30份，每頭牛采血10 mL，將采集的血樣離心，分離的血清樣品不能溶血，無(wú)菌分離血清待檢。

（3）檢測(cè)方法。按照國(guó)標(biāo)《正向間接血凝試驗(yàn)監(jiān)測(cè)口蹄疫抗體操作規(guī)程》進(jìn)行。將待檢血清滅活，56 ℃水浴滅活 30 min；然后用稀釋液將待檢血清分別稀釋成1：2、1：4、1：8、1：16、1：32、1：64、1：128、1：256、1：512、1：1 024；用稀釋液將陰性對(duì)照血清稀釋成1：16，再將陽(yáng)性對(duì)照血清稀釋成1：512；在干凈的V型96孔血凝板上每排的第1～8孔加各稀釋度待檢血清50 μL，第10孔加1：16的陰性對(duì)照血清，50 μL，第11孔加陽(yáng)性對(duì)照血清（1：512）50 μL，第12孔各加稀釋液50 μL（空白對(duì)照）；將液體診斷液混勻，每排1～8孔和10～12孔加診斷液，每孔25 μL。

（4）振蕩。將加完樣品的V型滴定板在微量振蕩器上振蕩1 min，置室溫1.5～2.0 h，最后判定結(jié)果。

（5）結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)?？贵w效價(jià)≥1：128，99%以上起保護(hù)作用；抗體效價(jià)在1：（32～90），50%保護(hù)；抗體效價(jià)≤1：16不保護(hù)。

2 結(jié)果與分析

2.1 檢測(cè)結(jié)果

二免組和三免組各30頭黃牛的免疫抗體效價(jià)狀況見(jiàn)表1。由表1可見(jiàn)，二免組抗體效價(jià)較低，抗體效價(jià)≥1：32的為19份，占63.3%，最高抗效價(jià)為1：64；三免組抗體效價(jià)較高，抗體效價(jià)≥1：28的有28份，占93.3%，最高抗體效價(jià)達(dá)1：512。三免效果明顯好于二免。

2.2 分析

①在山區(qū)環(huán)境，同一條件下， 因個(gè)體差異，存有產(chǎn)生免疫抗體水平不一致的現(xiàn)象。

②首次免疫30 d后，進(jìn)行二次免疫，間隔30 d開(kāi)始血液采樣，檢測(cè)結(jié)果表明此階段牛體內(nèi)產(chǎn)生的免疫抗體水平比較低，無(wú)法達(dá)到有效的保護(hù)力。

③按照免疫程序，二免后間隔30 d，進(jìn)行第三次免疫，30 d后采樣檢測(cè)，檢測(cè)結(jié)果表明此階段牛體內(nèi)產(chǎn)生的免疫抗體水平比較高，并形成較高的保護(hù)力可抵御外界病毒侵襲，有效地防控該病的發(fā)生。

3 結(jié)論

從試驗(yàn)結(jié)果分析來(lái)看，兩次免疫注射口蹄疫疫苗的2B組省工省錢(qián)，但是免疫動(dòng)物體內(nèi)產(chǎn)生的抗體有效保護(hù)率較低，易被野毒和病毒感染，給疫病的發(fā)生、傳播留下了機(jī)會(huì)；而3B組雖然費(fèi)工費(fèi)時(shí)，費(fèi)用比較高，但是免疫動(dòng)物體內(nèi)產(chǎn)生的抗體效價(jià)保持在一個(gè)相對(duì)均衡的水平上，起到了預(yù)防疫病的目的。因此，建議在生產(chǎn)中按免疫程序?qū)εＪ褂妹庖呓臃N3次口蹄疫疫苗的免疫方案。

參考文獻(xiàn)：

[1] 丁永志.牛羊口蹄疫病毒O型亞洲1型滅活苗多次免疫程序免疫抗體效價(jià)對(duì)比試驗(yàn)[J].甘肅獸醫(yī)導(dǎo)刊，2011（5）：31-33.