金軼

【摘要】 目的 通過(guò)比較不同年齡段小兒骨骼維生素K的營(yíng)養(yǎng)狀況，進(jìn)一步了解骨代謝在兒童期的特點(diǎn)及演變趨勢(shì)。方法 將于2012年1月——2012年6月于我院進(jìn)行常規(guī)體檢的0-14歲兒童隨機(jī)抽取80例，按照年齡分為四組：0-1歲為A組22例，-3歲為B組18例，-9歲為C組20例，9歲以上為D組20例。采用ELISA法，檢測(cè)血清未羧化骨鈣蛋白及總骨鈣蛋白的含量，計(jì)算出骨鈣蛋白的未羧化率，并對(duì)其結(jié)果作進(jìn)一步的評(píng)價(jià)與分析。結(jié)果 1 A、 B、 C、 D組之間的血清未羧化的骨鈣蛋白水平比較p<0.001，存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。2四組之間的血清總骨鈣蛋白水平比較p<0.001，存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。 3 四組的血清未羧化骨鈣蛋白/總骨鈣蛋白*100之間比較p<0.001（F=15.65），存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。4血清未羧化骨鈣蛋白及總骨鈣蛋白均與年齡呈正相關(guān)，即年齡越大，未羧化骨鈣蛋白及骨鈣蛋白的含量越高。而小兒年齡與體內(nèi)未羧化骨鈣蛋白/骨鈣蛋白的比率無(wú)相關(guān)性，r=-0.48，P=0.709。結(jié)論 1不同年齡段小兒骨鈣蛋白未羧化率不同，這意味著骨骼維生素K水平在兒童期隨年齡的增長(zhǎng)呈現(xiàn)出動(dòng)態(tài)演變過(guò)程。20-1歲小兒骨鈣蛋白未羧化率最高；1-3歲小兒次之，而后為3-9歲、9歲-14歲。這表明0-1歲小兒成骨細(xì)胞的維生素K的相對(duì)缺乏程度最重，并進(jìn)一步證明維生素K可以作為評(píng)價(jià)小兒骨代謝的又一客觀指標(biāo)。

【關(guān)鍵詞】 骨骼維生素K；骨鈣蛋白未羧化率；骨代謝；兒童

過(guò)去人們認(rèn)為骨在細(xì)胞水平上是不活躍的，但事實(shí)上骨的細(xì)胞在不停地進(jìn)行著細(xì)胞代謝，骨代謝主要包括兩個(gè)過(guò)程，一個(gè)是成骨細(xì)胞合成骨基質(zhì)，使骨量增加，即骨形成的過(guò)程，另一個(gè)是破骨細(xì)胞吸收骨基質(zhì)的過(guò)程，無(wú)論是骨形成或骨吸收均會(huì)釋放及分泌多種代謝產(chǎn)物，這些進(jìn)入血液或尿液中的代謝產(chǎn)物，既可作為評(píng)價(jià)骨代謝的生化標(biāo)志物，其中骨鈣蛋白是唯一在礦化組織中大量存在的骨代謝標(biāo)志物，是骨形成的最直接反映^[1]。而維生素K作為一種古老的營(yíng)養(yǎng)素，除了在凝血方面發(fā)揮重要作用外，其又是骨鈣蛋白中谷氨酸r位羧化的重要輔酶，因此維生素K參與了骨代謝，關(guān)于兩者之間相關(guān)性的研究近年來(lái)成為各個(gè)醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的熱門(mén)話題，本研究則著眼于0-14歲兒童，將其分為不同的年齡段，通過(guò)測(cè)定骨鈣蛋白未羧化率來(lái)評(píng)價(jià)維生素K與兒童骨代謝的密切關(guān)系，具體方法如下：

1 材料與方法

1.1 臨床資料分組 將2012年01月——2012年6月于我院進(jìn)行常規(guī)體檢的0-14歲兒童隨機(jī)抽取80例（均無(wú)血液系統(tǒng)疾病、肝臟系統(tǒng)疾病史，未服用過(guò)影響維生素K代謝藥物史）。按照年齡分為四組：0-1歲為A組22例，-3歲為B組18例，-9歲為C組20例，9歲以上為D組20例

1.2 標(biāo)本采集 所有入選兒童均在上午8-9時(shí)采集清晨空腹靜脈血4ml，待血液充分凝固后，3000r/min離心5min，分別留取血清，置-20℃冰箱保存待測(cè)。

2 儀器及試劑盒

2.1 儀器 全自動(dòng)酶標(biāo)儀（Wellscan MK3，芬蘭），全自動(dòng)洗板機(jī)（DEM-II，北京）。

2.2 試劑盒 骨鈣蛋白試劑盒為美國(guó)DSL公司的骨鈣蛋白酶聯(lián)免疫測(cè)定盒；未羧化的骨鈣蛋白試劑盒為日本TakaRa公司的未羧化的骨鈣蛋白酶聯(lián)免疫測(cè)定盒（Glu-OC EIA Kit）。

3 對(duì)待測(cè)標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè)并計(jì)算

總骨鈣蛋白= 羧化骨鈣蛋白+ 未羧化骨鈣蛋白。以未羧化骨鈣蛋白/ 總骨鈣蛋白計(jì)算出骨鈣蛋白未羧化率。

4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（χ±s）表示，進(jìn)行正態(tài)性和方差齊性檢驗(yàn)。兩組比較應(yīng)用t檢驗(yàn)，多組比較用方差分析（one-way ANOVA），兩組之間比較用SNK-q檢驗(yàn)；兩變量之間相關(guān)性用Pearson相關(guān)分析。設(shè)定α=0.05。若P≤0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P≤0.01為差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

5 結(jié) 果

5.1 0-1歲組（A組），-3歲組（B組），-9歲組（C組），9歲以上組（D組）的血清未羧化的骨鈣蛋白水平分別為2.17±0.59 ng/mL、1.65±0.82 ng/mL、1.96±0.91 ng/mL和2.59±0.80 ng/mL，四組之間比較p<0.001（F=17.58），存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，兩組之間比較均存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

5.2 A、B、C、D組的血清總骨鈣蛋白水平分別為33.38±19.69 ng/mL、26.07±17.62 ng/mL、35.66±15.10 ng/mL和63.13±35.60ng/mL，四組之間比較p<0.001（F=22.56），存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，兩組之間比較均存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

5.3 A、 B、 C、 D組的血清未羧化骨鈣蛋白/總骨鈣蛋白*100分別為6.38±2.75、4.87±3.22、5.16±2.31、4.35±1.63.四組之間比較p<0.001（F=15.65），存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

5.4 血清未羧化骨鈣蛋白與年齡呈正相關(guān)，r=0.49，p<0.01；血清骨鈣蛋白與年齡呈正相關(guān)r=0.38，p<0.01；即年齡越大，未羧化骨鈣蛋白及骨鈣蛋白的含量越高。而小兒年齡與體內(nèi)未羧化骨鈣蛋白/骨鈣蛋白的比率無(wú)相關(guān)性，r=-0.48，P=0.709，見(jiàn)表1。

6 討 論

兒童骨骼是一個(gè)新陳代謝非常旺盛的器官，通過(guò)合成和吸收兩個(gè)過(guò)程對(duì)骨進(jìn)行不斷的塑造和重建，在這兩個(gè)過(guò)程中成骨細(xì)胞合成的酶類及有機(jī)基質(zhì)以及破骨細(xì)胞作用下的降解產(chǎn)物均會(huì)進(jìn)入血液循環(huán)及尿液中，檢測(cè)這些物質(zhì)在血或尿中的濃度即可用于評(píng)價(jià)骨的生長(zhǎng)及進(jìn)行疾病研究^[2]，因此它們可以作為骨的生化代謝標(biāo)志物動(dòng)態(tài)地反映骨的形成及吸收情況。

骨鈣蛋白作為目前公認(rèn)的一種骨生化代謝標(biāo)志物，其由成熟的成骨細(xì)胞分泌，主要作用于骨基質(zhì)的礦化階段，是反映骨形成的特異性指標(biāo)^[1]。骨鈣蛋白分子中含有3個(gè)谷氨酸殘基，只有當(dāng)谷氨酸殘基羧化為羧化谷氨酸時(shí)，骨鈣蛋白才會(huì)被激活促進(jìn)骨的礦化，而谷氨酸殘基的羧化過(guò)程需要有維生素K作為輔酶才能完成，維生素K缺乏將會(huì)導(dǎo)致骨鈣蛋白不能被羧化，預(yù)示著骨礦物質(zhì)密度減低及高風(fēng)險(xiǎn)髖骨骨折^[3]。細(xì)胞培養(yǎng)同時(shí)證實(shí)骨鈣蛋白的合成受維生素D與維生素K的共同調(diào)節(jié)，維生素D直接在基因轉(zhuǎn)錄水平發(fā)揮作用，維生素K參與蛋白質(zhì)的翻譯后羧化修飾過(guò)程^[4]，因此可以通過(guò)測(cè)定血清骨鈣蛋白的未羧化率來(lái)評(píng)價(jià)機(jī)體的骨骼維生素K營(yíng)養(yǎng)狀況，本研究即以以上病生理基礎(chǔ)作為實(shí)驗(yàn)原理，將80名0-14歲兒童按照年齡分為4組，大體為嬰兒組、幼兒組、學(xué)齡前組及學(xué)齡期組，通過(guò)ELISA法測(cè)定以上各組小兒血清骨鈣蛋白及未羧化骨鈣蛋白的濃度，并計(jì)算出骨鈣蛋白的未羧化率，進(jìn)一步了解在兒童期骨代謝與維生素K的相關(guān)性。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示小兒血清骨鈣蛋白及未羧化骨鈣蛋白的濃度隨年齡增長(zhǎng)整體呈現(xiàn)出上升趨勢(shì)，而不同年齡段小兒骨鈣蛋白的未羧化率不同，這意味著骨骼維生素K水平在兒童期隨年齡的增長(zhǎng)呈現(xiàn)出動(dòng)態(tài)演變過(guò)程。其中0-1歲小兒骨鈣蛋白未羧化率最高；1-3歲小兒次之，而后為3-9歲、9歲-14歲。這表明0-1歲小兒成骨細(xì)胞的維生素K的相對(duì)缺乏程度最重，這正與我們臨床觀察到的嬰兒期最易發(fā)生佝僂病等骨代謝異常的特點(diǎn)相吻合，同時(shí)提醒我們兒童期尤其是嬰兒期補(bǔ)充維生素K對(duì)改善骨代謝，減少佝僂病等的發(fā)病有著重要的意義。

骨代謝是一個(gè)受多種維生素、激素和細(xì)胞因子調(diào)節(jié)的復(fù)雜的生理過(guò)程，而在兒童期又受年齡增長(zhǎng)、性別、生長(zhǎng)速率、營(yíng)養(yǎng)狀況以及青春期階段等更多因素的影響，因此對(duì)兒童期的骨代謝進(jìn)行評(píng)價(jià)及判斷難度更大，因樣本量有限，迄今為止，國(guó)內(nèi)還沒(méi)有兒童骨代謝標(biāo)志物的正常參考值，同時(shí)本研究提醒我們兒童期在不同的年齡段應(yīng)確立不同的參考值，由于單個(gè)骨代謝標(biāo)志物在兒童骨骼發(fā)育中的敏感性和預(yù)測(cè)價(jià)值有限，因此在兒童骨骼發(fā)育的縱向檢測(cè)中除需監(jiān)測(cè)骨合成及吸收的指標(biāo)，同時(shí)需監(jiān)測(cè)骨代謝的調(diào)節(jié)指標(biāo)^[5]，而骨骼維生素K水平即可作為評(píng)價(jià)骨代謝的一項(xiàng)重要生化指標(biāo)，但對(duì)其更準(zhǔn)確、簡(jiǎn)便的檢測(cè)手段以及正常值的建立，還需要我們?cè)谝院蟮呐R床工作和實(shí)驗(yàn)中作更深一步的探討及研究。

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