孫鵬等

【摘 要】目的：通過對精液常規(guī)與巴氏染色結果的分析，探討少、弱精子癥與精子形態(tài)之間的關系，為不育癥的診斷及所需采取的輔助生殖技術提供依據(jù)。方法：應用北京中科彩色精子質(zhì)量檢測分析系統(tǒng)及改良巴氏染色法對在我院進行診治的354例少、弱精子癥患者進行檢查，實驗資料采用SPSS10.0統(tǒng)計軟件包進行統(tǒng)計分析。結果：弱精子癥為精液異常的第一位原因，弱精子癥組正常形態(tài)精子百分率顯著低于正?；盍M，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05），少精子癥組合并弱精子癥組與少精子癥合并正?；盍M比較，正常形態(tài)精子百分率的差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05），各組間頭部缺陷和頸尾部缺陷間的比較亦無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。結論：精液改良巴氏染色檢查可以發(fā)現(xiàn)精液常規(guī)檢查正常而單純?yōu)榛尉影Y的患者，由于受精率與精子的活力、形態(tài)均有關系，因此正?；盍Χ螒B(tài)異常的精子仍可發(fā)生不受精，這類患者須行單精子卵胞漿內(nèi)注射（ICSI）助孕。

【關鍵詞】改良巴氏染色；男性不育；精子形態(tài)缺陷

在與男性生育能力相關的精液指標中，精子密度、活動力、形態(tài)非常重要，是決定男性生育力的主要因素。精子形態(tài)影響精子的受精能力，形態(tài)缺陷的精子受精率低下。為探討少、弱精子癥中精子形態(tài)缺陷的情況，本研究用精液常規(guī)和改良巴氏染色法對在我院進行診治的354例少、弱精子癥患者進行檢查；精液改良巴氏染色檢查是WHO推薦的精子形態(tài)分析的經(jīng)典方法[1]，可以詳細觀察精子的核染色質(zhì)性狀以及頂體的情況；依照2010年WHO修訂精子形態(tài)學檢查的標準，對精液常規(guī)和改良巴氏染色檢查的結果進行統(tǒng)計學分析研究，為不育癥的診斷及所需采取的輔助生殖技術提供依據(jù)。

1 對象與方法

1.1對象 2009.1～2012.12在生殖醫(yī)學中心就診的354例患者，其中少精子癥患者70例，正常密度患者284例（弱精子癥患者177例，正?；盍颊?07例）?；尉影Y患者193例。平均年齡30歲。

1.2 方法

1.2.1精液常規(guī)檢查： 應用北京中科彩色精子質(zhì)量檢測分析系統(tǒng)，按要求禁欲3～7d，在我中心取精，精液在37℃水浴箱中靜置液化，液化時間超過1h按相關操作處理[ 2]。

1.2. 2精液改良巴氏染色檢查： 采用世界衛(wèi)生組織（WHO）2010年《人類精液及精子-宮頸粘液相互作用實驗室檢驗手冊》第4版推薦的方法進行染色、形態(tài)分析和計數(shù)。精子形態(tài)缺陷的類型包括： 頭部缺陷、頸部和中段的缺陷、尾部缺陷、大于正常精子頭部50%的胞漿小滴等。所有形態(tài)學處于臨界狀態(tài)的精子均列為異常。在頭頸尾均有異常時計為頭部畸形。偶見特異結構缺陷的精子，如頂體發(fā)育失敗導致“小圓頭缺陷”或“球形精子癥”，計為異常。卷尾的精子可能與精子活力低有關，或提示精子已經(jīng)暴露于低滲透壓，不計為尾部缺陷。圓形精子細胞階段的未成熟精子細胞；精子頭部脫落或無精子頭精子；尖頭無尾者，均不作為精子計數(shù)。

1.3 相關檢查判斷標準

1.3.1弱精子癥： 連續(xù)3次以上的精液常規(guī)分析提示前向運動精子（A級+B級）小于50%或快速直線前向運動的精子小于25%，精液密度≥20×106/ml，其他參數(shù)正?；蚧菊！?/p>

1.3.2少精子癥： 指精子密度≤20×106/ml。

1.3.3畸形精子癥： 經(jīng)改良巴氏染色后正常形態(tài)精子百分率≤15%，精液密度≥20×106/ml。本研究中弱精子癥組和畸形精子癥組均為精液密度≥20×106/ml

1.4 統(tǒng)計學處理 結果以中位數(shù)表示，各組正常形態(tài)精子數(shù)之間的比較采用兩個獨立樣本的WILCOXON秩和檢驗。實驗資料采用SPSS10.0統(tǒng)計軟件包進行分析。

2結果

2.1 精液常規(guī)檢查 弱精子癥為精液異常的第一位原因。見表1。

2.2 不同組間在精子畸形上的差別 弱精子癥組正常形態(tài)精子百分率顯著低于正?；盍M，差異有統(tǒng)計學意義（ P<0.05）.少精子癥組合并弱精子癥組與少精子癥合并正常活力組比較，正常形態(tài)精子百分率的差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05），各組間頭部缺陷和頸尾部缺陷間的比較亦無統(tǒng)計學意義（P>0.05）.見表2。

3 結論

研究認為，精液常規(guī)檢查指標越趨正常，其人工授精（IUI）的成功率越高[3]。精子形態(tài)對于男性生育力有很好的預測價值，與受精率顯著相關，正常形態(tài)的精子比例越高，受精率越高。

我們對精子形態(tài)與活力關系的分析顯示，弱精子癥組正常形態(tài)精子百分率的中位數(shù)為6. 67，正常活力組則為10.89，差異有統(tǒng)計學意義。但弱精子癥組和正?；盍M在正常形態(tài)精子百分率分別為<4%、4%～15%及>15%時，兩組正常形態(tài)精子百分率的差異無統(tǒng)計學意義。究其原因，可能為樣本數(shù)量較少，需要大樣本資料的研究來證實。統(tǒng)計分析顯示，正常密度和正?；盍φ咂湔Ｐ螒B(tài)精子百分率在4%以下的發(fā)生率分別為29.72%和21.15%；正常密度和正常活力者其正常形態(tài)精子百分率在4%至15%之間的發(fā)生率分別為41.04%和40.38%，表明精液密度和活力正常的患者仍有可能發(fā)生畸形精子癥。精液改良巴氏染色檢查可以發(fā)現(xiàn)精液常規(guī)檢查正常而單純?yōu)榛尉影Y的患者。由于受精率與精子的活力、形態(tài)均有關系，因此正常活力而形態(tài)異常的精子仍可發(fā)生不受精。Bak-er發(fā)現(xiàn)精子的正常形態(tài)率≤5%時，體外受精-胚胎移植（IVF）受精率平均低于30%，這類患者須行單精子卵胞漿內(nèi)注射（ICSI）助孕。此外，在臨床常用的促、超排卵加IUI 技術中，精液常規(guī)正常而畸形精子比例過高的精子除易導致助孕失敗外，多次大量的促性腺激素的刺激會致卵巢大量優(yōu)質(zhì)卵母細胞凋亡，有可能降低以后促超排卵過程中卵母細胞的獲得率，甚至發(fā)生卵巢低反應。

我們在分析精子形態(tài)與密度的關系時發(fā)現(xiàn)，正常密度組的正常形態(tài)精子百分率中位數(shù)為8.59，少精子癥組則為2.97；少精子癥組與正常密度組在精子畸形上的差異有統(tǒng)計學意義，提示少精子癥者畸形精子比例增加，需要采取ICSI助孕的患者也相應增加。發(fā)生少精子癥的原因有多種，染色體核型異常和Y染色體微缺失是精子發(fā)生障礙的常見原因之一。有資料顯示，61例無精子癥患者中有22例染色體核型異常，異常率為36.10%；36例嚴重少精子癥患者中有1例染色體異常，異常率為2.78%[4]。近來發(fā)現(xiàn)，嚴重原發(fā)性少精子癥患者Y染色體微缺失的發(fā)生率為7%～10%。對45例精子密度低于5×106/ ml的患者進行Y染色體微缺失檢查，有14例發(fā)生微缺失，發(fā)生率為31%；且Y染色體微缺失可以通過ICSI助孕方式垂直傳播給子代。因此，對嚴重少精子癥除應行形態(tài)學分析外，還需進行染色體核型和基因異常的篩查。

精液改良巴氏染色檢查所定義的精子形態(tài)缺陷有：頭部缺陷、頸部和中段的缺陷、尾部缺陷、大于正常精子頭部50%的胞漿小滴等。統(tǒng)計分析顯示，少精子患者伴有畸形精子的比例增加，但分別比較少精子癥組和正常密度組的精子頭部缺陷和頸尾部缺陷時，則無統(tǒng)計學意義。比較弱精子癥組和正?；盍M精子頭部缺陷和頸尾部缺陷時，亦無統(tǒng)計學意義。精子的形態(tài)影響精子和卵細胞的受精，但有關精子不同類型的形態(tài)異常與受精的關系還有待進一步研究。精液改良巴氏染色檢查可以發(fā)現(xiàn)精液常規(guī)檢查正常而單純?yōu)榛尉影Y的患者，對不育癥者進行精液常規(guī)分析時聯(lián)合改良巴氏染色檢查，可發(fā)現(xiàn)因形態(tài)學改變導致不育的患者，有助于選擇合適的輔助生殖技術助孕及對遺傳性疾病進行阻斷。本結果有待擴大樣本數(shù)量深入探討。

參考文獻：

[1] 刁英，楊智敏，譚兵兵，等. Testsimplets染色玻片法與改良巴氏染色法分析精子形態(tài)的比較[J].臨床檢驗雜志，2008，5（26）：356-357

[2] 郭應祿，李宏軍，主編.男性不育癥[M].北京：人民軍醫(yī)出版社，2003，224-229.

[3] 谷翊群，陳振文，于和鳴，主編.人類精液及精子-宮頸粘液相互作用實驗室檢驗手冊[M].第4版.北京：人民衛(wèi)生出版社，2001.15-64.

[4] 周桂香，劉雨生，駱麗華，等.嚴重生精功能障礙患者細胞遺傳學檢查[J].中國男科學雜志，2005，19（3）：29-31