海爾尼沙

【摘要】 目的： 探討酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）方法在診斷梅毒螺旋體（TP）感染中的臨床檢驗(yàn)應(yīng)用價(jià)值。方法： 選擇2010年1月至2013年5月接收的梅毒患者68例，采用甲基胺紅不加熱血清試驗(yàn)（TRUST）和ELISA試劑分別檢測68例梅毒患者和30例自身免疫性疾病患者的血清樣本，將檢測結(jié)果與梅毒螺旋體明膠顆粒凝集試驗(yàn)（TPPA）檢測結(jié)果進(jìn)行對比，比較TRUST和ELISA試劑的假陽性率和假陰性率。結(jié)果： TRUST假陽性率、假陰性率分別為16.67%（5/30）、26.47%（18/68）。ELISA的假陽性率、假陰性率均為0。ELISA與TPPA檢測結(jié)果完全一致，無假陽性和假陰性結(jié)果。ELISA方法檢測的假陽性率和假陰性率分別顯著性低于TRUST（P<0.05）。結(jié)論： ELISA方法檢測TP結(jié)果可靠，可以作為篩選和確認(rèn)梅毒的首選方法。

【關(guān)鍵詞】梅毒螺旋體；感染；ELISA法； 診斷

【中圖分類號】R453【文獻(xiàn)標(biāo)識碼】A【文章編號】1004-4949（2013）09-135-02

梅毒是一種傳染性強(qiáng)、危害性大的性疾病，病原體是梅毒螺旋體（TP）。血清學(xué)檢測是診斷梅毒的常用實(shí)驗(yàn)室檢測方法，即非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)和梅毒螺旋抗原血清試驗(yàn)[1]。一般用甲基胺紅不加熱血清試驗(yàn)（TRUST）、不加熱血清反應(yīng)素試驗(yàn)（USR）等非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)，其特異性較差，存在一定的假陽性率和假陰性率，常用于大樣本的初步篩選。TP-ELISA屬于梅毒螺旋抗原血清試驗(yàn)，敏感性和特異性均較強(qiáng)，常用作臨床梅毒的確認(rèn)實(shí)驗(yàn)，其特異性強(qiáng)，靈敏度高，操作簡單方便，可全自動化，可以用于大樣本的檢測。作者采用ELISA方法對本院2010年1月至2013年5月就診的梅毒患者68例進(jìn)行檢測，并與TRUST、梅毒螺旋體明膠顆粒凝集試驗(yàn)（TPPA）相對照，探討其在TP感染診斷中臨床檢驗(yàn)應(yīng)用價(jià)值，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料： 我院2010年1月至2013年5月性病?？平?jīng)過臨床診斷和血清學(xué)檢測診斷梅毒患者68例，其中Ⅰ期10例、Ⅱ期50例、Ⅲ期6例、潛伏期2例。同期內(nèi)，我院接收自身免疫性疾病患者30例，均采用臨床診斷和自身血清抗體檢測，排除了梅毒陽性患者。

1.2 血清樣本采集： 采集梅毒患者68例和自身免疫性疾病患者30例的靜脈血清樣本6 ml，冷藏備用。

1.3 儀器與試劑： 奧地利TECAN生產(chǎn)的全自動酶標(biāo)儀、美國BIO-RAD洗板機(jī)、恒溫水浴箱、上海榮盛生物技術(shù)有限公司的TRUST試劑盒（批號20100907）、廣州中山生物公司的ELISA試劑盒（批號20100713）、日本富士會社TPPA試劑盒（批號20101006）。

1.4檢測方法： 采用TRUST和ELISA試劑分別檢測研究對象血清樣本，具體操作步驟嚴(yán)格按照試劑盒說明書要求進(jìn)行檢測。比較兩種方法檢測結(jié)果的假陽性率和假陰性率。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理： 采用SPSS18.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行所有數(shù)據(jù)處理，計(jì)數(shù)資料與百分率表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)，P<0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 血清TRUST、ELISA、TPPA檢測結(jié)果： TRUST試驗(yàn)檢測陽性50例、陰性48例，其中潛伏期2例、Ⅰ期梅毒2例、Ⅱ期梅毒4例，以及已經(jīng)治愈的患者10檢測結(jié)果均是陰性。TRUST假陽性率、假陰性率分別為16.67%（5/30）、26.47%（18/68）。與TPPA檢測結(jié)果比較，TRUST假陽性率、假陰性率與TPPA有明顯差異（χ2=6.37，P<0.05）。TP-ELISA試驗(yàn)檢測陽性68例、陰性30例，TP-ELISA的假陽性率、假陰性率均為0。TP-ELISA與TPPA檢測結(jié)果完全一致，無假陽性和假陰性結(jié)果。TP- ELISA方法檢測的假陽性率和假陰性率分別顯著性低于TRUST（χ2=7.19，P<0.05）。

3 討論

TP-ELISA是近年隨著梅毒螺旋基因工程的研制進(jìn)而建立的診斷梅毒的新方法。Zrein等在1995年合成了TpN47和TpN15，將其用于梅毒檢測，發(fā)現(xiàn)ELISA方法的正確診斷率是99.8%，敏感性99.9%[2]。1996年，Gerber等采用PCR法擴(kuò)增梅毒螺旋抗原DNA，并與大腸桿菌結(jié)合進(jìn)行表達(dá)，產(chǎn)生了一系列梅毒螺旋體抗原，用ELISA方法進(jìn)行檢測，發(fā)現(xiàn)TpN44.5、TpN17和TpN47這3種抗原滴度最高，且相互結(jié)合敏感性更高。人體受到TP感染后4周～8周在血清中才能檢測到一定數(shù)量的抗體，特異性抗體較非特異性抗體早出現(xiàn)。梅毒患者治療后，非特異性抗體會逐漸轉(zhuǎn)陰。TRUST不適用于Ⅰ期梅毒的診斷，該方法對潛伏期梅毒敏感性也較低。本研究中發(fā)現(xiàn)，TRUST的假陽性率、假陰性率分別為16.67%（5/30）、26.47%（18/68）。有假陽性結(jié)果也有假陰性結(jié)果，表明TRUST用于梅毒螺旋體感染的初步篩查也不適用。TP-ELISA方法采用酶聯(lián)免疫吸附技術(shù)檢測血清中存在的特異性抗體，可以作為梅毒螺旋體感染的單一篩選方法。本研究中發(fā)現(xiàn)，TP-ELISA試驗(yàn)檢測陽性68例、陰性30例，TP-ELISA的假陽性率、假陰性率均為0。TP-ELISA與TPPA檢測結(jié)果完全一致，無假陽性和假陰性結(jié)果。

綜上所述，TP-ELISA方法利用了基因重組工程合成抗原，檢測血清中特異性抗體，特異性強(qiáng)、靈敏度高，與TPPA檢測結(jié)果保持一致。TP-ELISA方法檢測結(jié)果可靠，可以作為篩選和確認(rèn)梅毒的首選方法，值得臨床推廣應(yīng)用。

參考文獻(xiàn)

[1] 馬聰，王芳，徐武夷. 梅毒螺旋體實(shí)驗(yàn)室檢測技術(shù)的研究進(jìn)展[J]. 中華醫(yī)院感染學(xué)雜志，2002，12（12）：958-950

[2] 叢憲玲，姜日花，朱明姬，等. 580例梅毒患者實(shí)驗(yàn)室檢測結(jié)果分析[J].中國實(shí)驗(yàn)診斷學(xué)，2003，7（3）： 264-265.