張偉

【摘要】目的：探討一氧化氮（NO）及一氧化氮合酶（NOS）在肝硬化患者血清中的變化。方法： 硝酸鹽還原酶法。因為NO在血清中以穩(wěn)定的離子硝酸鹽離子（NO3-）和亞硝酸鹽離子（NO2-）存在，因此硝酸鹽離子和亞硝酸鹽離子可以準確地反映NO合成量。同時，根據(jù)NOS可以催化L-精氨酸生成NO，而NO與二價鐵結(jié)合成有色物的性質(zhì)，對NOS進行檢測。 結(jié)果： 我們對30例肝硬化患者及30例正常人血清中NO及NOS進行測定，其結(jié)果顯示如下：肝硬化如血清中NO：（50.4±19.0）umol/L，NOS：（6.72±2.37）u/ml，正常組血清中NO：（34.5±16.8） umol/L，NOS：（3.89±1.35）u/ml，經(jīng)過T檢驗結(jié)果為P<0.01。其結(jié)果顯示，正常人血清中的NO）及NOS均低于肝硬化組，而NO與NOS的含量變化基本成正相關(guān)。因為肝臟本身存在NOS，可以合成并釋放NO。 結(jié)論： 肝硬化患者血清中NO及NOS的含量均明顯高于正常對照組，提示可能與肝硬化的代謝、肝功能的損傷程度等有密切關(guān)系。

【中圖分類號】R197.324【文獻標識碼】A【文章編號】1004-4949（2013）09-26-02

肝硬化（liver cirrhosis）是一種常見的慢性肝病，可由一種或多種原因引起肝臟損害，肝臟呈進行性、彌漫性、纖維性病變。一氧化氮（NO）既是一種新型的生物信息傳遞體，又是一種反應(yīng)性極強的自由基。它兼有第二信使和神經(jīng)遞質(zhì)的作用，介導和調(diào)節(jié)多種病理生理過程，尤其對肝硬化患者血流動力學的影響具有重要的病理生理學作用。本研究通過對血清一氧化氮（NO）和一氧化氮合酶（NOS）的測定，對初步探討NO及NOS與肝硬化的發(fā)病關(guān)系，具有重要的意義。

1資料與方法

1.1一般資料 選擇2011.6～2012.12月間來我院肝病科的住院患者110例，其診斷符合《內(nèi)科學肝硬化》第六版中肝硬化的診斷標準[1]，隨機分為治療組和對照組各55例，治療組55例中，其中男性32例，女性23例；年齡32～66歲，平均年齡46.0±6.8歲；病程4～18年，平均病程8.1±3.7年；Chlld-pugh分級：B級31例，C級24例。其中乙肝肝硬化38例，丙肝肝硬化7例，酒精性肝硬化8例，原因不明的肝硬化2例；對照組55例中，其中男性33例，女性22例；年齡30～63歲，平均年齡44.0±6.1歲；病程3.8～17年，平均病程7.9±3.1年；Chlld pugh分級：B級30例，C級25例。治療組與對照組在性別、年齡、病情程度、Chlld-pugh、病因等方面比較差異均無統(tǒng)計學意義（P>0.05），具有可比性。

1.2實驗室檢測： 受試者于清晨采集空腹靜脈血2ml。離心分離出血清。檢測其NO及NOS的含量，NO及NOS測定均采用南京聚力生物工程研究所提供的試劑盒，NO的測定是利用硝酸還原酶特異地將：NO3-還原為NO2-，再通過其顯色劑形成有色物。而NOS可催化L-精氨酸生成NO，NO與二價鐵結(jié)合形成有色物，即代表NOS活性。

1.3統(tǒng)計學處理： 測定結(jié)果以（x±s）表示，兩組間比較采用成組設(shè)計的T檢驗。

2結(jié)果

見表1。從表中可以看出，肝硬化患者血清NO及NOS明顯高于正常對照組，P<0.01。

表1兩組患者血清NO及NOS測定結(jié)果（x±s）

組 別1n1 血清NO（umol/L）1 血清NOS（u/ml）治療組1601 34.5±16.81 3.98±1.58對照組1601 50.4±19.21 6.75±2.483討論

NO在許多生理系統(tǒng)和病理生理狀態(tài)中具有介質(zhì)、信使或細胞功能調(diào)節(jié)因子的功能，是一種很活躍的自由基[1]。近年來研究發(fā)現(xiàn)NO及NOS在肝硬化的發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)歸中起著重要作用。我們的檢測結(jié)果表明NO及NOS的含量在肝硬化時明顯升高，并且隨著病情的進展而升高，這可能與肝功能的損傷程度及肝硬化時免疫功能紊亂有關(guān)。

NO是一種具有多種病理生理學效應(yīng)的活性氮介質(zhì)，它以L-精氨酸為底物，在NOS的作用下，由血管內(nèi)皮細胞、肝細胞、枯否氏細胞、巨噬細胞等合成，合成NO的酶有兩種，即原生酶（cNOS）和誘生酶（iNOS），cNOS在生理狀態(tài)下少量合成NO，iNOS則在細胞損傷、某些因子如干擾素（INF）、白介素-1（IL-1）、腫瘤壞死因子（TNF）以及內(nèi)毒素等升高時被激活，而誘導合成大量NO，目前普遍認為肝硬化時，由于腸道菌群過度生長所致的腸道內(nèi)毒素的生成和攝取增多，肝臟對內(nèi)毒素清除功能減退，使內(nèi)毒素進入體循環(huán)并發(fā)生內(nèi)毒素血癥[2]；內(nèi)毒素血癥又可直接和（或）間接通過激活巨噬細胞、枯否細胞釋放Il-l、TNF等來誘導產(chǎn)生大量ON，造成NO水平升高，因此內(nèi)毒素是NO高水平的主要原因[3]。NO的合成和分泌增加，導致血管擴張，部分組織血流量增加，肝內(nèi)血流分布不均，最終導致門脈血流動力學紊亂，使肝病的病情加重。因此，檢測血清NOS、NO含量對臨床估計肝硬化的病情進展及療效觀察有一定的價值。

肝硬化患者多數(shù)為乙型、丙型肝炎發(fā)展而來，而最近研究表明，許多病毒如EBV、乙型和丙型肝炎病毒等在體外或活體內(nèi)都能誘導肝臟iNOS的表達。在分子水平上，鼠iNOS基因的調(diào)節(jié)區(qū)含有能與干擾素反應(yīng)因子-1相互作用的IFN特異反應(yīng)要素，啟動區(qū)含有核因子KB（NF-KB）的兩個結(jié)合位點，這兩個位點在IFN-r和內(nèi)毒素誘導iNOS的表達中起活化作用，因此認為，病毒不但可以通過IFN-r的介導，間接誘導肝細胞iNOS的表達，同時還可以通過某些特異的轉(zhuǎn)錄因子，直接調(diào)節(jié)肝臟iNOS的基因表達[4]。從而使NO合成水平升高。NO不但具有細胞毒作用，還具有病理性血管擴張和組織損傷的生物活性，動物實驗證實，肝硬化時，血管產(chǎn)生的NO濃度增加可引起周圍血管擴張，后者是肝硬水鈉潴留、腹水形成、腎功衰竭發(fā)生的始動因素，肝硬化時血清NO含量增加與肝硬化患者一些重要并發(fā)癥相關(guān)[5]。

總之，關(guān)于NO及NOS在肝硬化時的作用還有待于進一步研究，我們認為肝硬化患者血清NO及NOS的含量與其肝硬化的病情進展及并發(fā)癥密切相關(guān)，監(jiān)測其濃度的變化，對臨床判斷病情進展及療效觀察有重要價值。

參考文獻

[1] 郭津生，王吉耀.一氧化氮與門脈高壓高動力循環(huán)[J].胃腸病學和肝病學雜志，1997，6（1）：90-93.

[2] 羅宏.肝硬化患者血清一氧化氮、腫瘤壞死因子水平變化及意義[J].四川醫(yī)學，2003，24（7）：716-717.

[3] 葉任高.陸再英內(nèi)科學[M].第6版北京：人民衛(wèi)生出版社，2005：445.

[4] 危北海.張萬岱，陳治水，等.肝硬化中西醫(yī)綜合治療方案（草案） [J].中國中西醫(yī)結(jié)合雜志.2004，24（10）：869-87l

[5] 郭英君，李京濤，常戰(zhàn)杰.丹芪五苓散聯(lián)合安琺特治療肝硬化腹水40例[J]陜西中醫(yī).2009，30（0）：1122