魏鐵花,王慶國(guó),李珊珊,唐 強(qiáng),孫妲男,邊曉燕,王 丹

(1.深圳市光明新區(qū)人民醫(yī)院 康復(fù)科，廣東 深圳 518000；2.黑龍江中醫(yī)藥大學(xué) 博士后科研流動(dòng)站，黑龍江 哈爾濱 150040)

慢性腎小球腎炎在中醫(yī)學(xué)上可以歸入“血尿”“腰痛”“虛勞”“水腫”等范疇。慢性腎小球腎炎的發(fā)病通常比較隱匿，臨床上一般病程比較長(zhǎng)，在出現(xiàn)明顯癥狀前多有一段時(shí)間的無(wú)癥狀尿異常期，之后隨著疾病的緩慢持續(xù)發(fā)展，患者的腎功能可出現(xiàn)明顯減退，最終可導(dǎo)致慢性腎衰竭。目前關(guān)于慢性腎小球腎炎的治療方法的研究有很多，比如針刺[1]、黃蜀葵花總黃酮[2]、針?biāo)幗Y(jié)合[3]等。本研究通過(guò)艾灸治療系膜增生性腎小球腎炎(MsPGN)大鼠模型,觀察治療后尿蛋白、尿紅細(xì)胞計(jì)數(shù)、血清肌酐和尿素氮的變化，從而為系膜增生性腎小球腎炎在臨床實(shí)踐中的治療提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 雄性(SD)健康大鼠共56只，平均體質(zhì)量為(150±20)g，由長(zhǎng)春高新醫(yī)學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究中心提供。經(jīng)適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后，檢測(cè)尿常規(guī)、尿紅細(xì)胞、尿蛋白(自動(dòng)生化分析儀)，定性結(jié)果顯示均為陰性。

1.2 實(shí)驗(yàn)試劑 天津生化制品廠生產(chǎn)的小牛血清蛋白(BSA);長(zhǎng)春匯力生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)的血總蛋白試劑盒、血尿素試劑盒、血肌酐試劑盒。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法 模型制備[4-5]：正常組大鼠10只，模型組大鼠46只。對(duì)于模型組大鼠，從第1天開(kāi)始，隔日灌胃BSA 20 mg次(約l mL/100 g)，持續(xù)至實(shí)驗(yàn)結(jié)束(10周末)。在第1天與第8天經(jīng)大鼠皮下分點(diǎn)注射完全弗氏佐劑0.2 mg(含BSA 2 mg)，第8天和第15天可經(jīng)尾靜脈注射葡萄球菌腸毒素B(SEB)水溶液(0.4 mg/kg)各1次。從第6周開(kāi)始每周收集大鼠尿液，并對(duì)所有尿液進(jìn)行常規(guī)紅細(xì)胞、白細(xì)胞和尿蛋白檢測(cè)。當(dāng)?shù)鞍啄蚨ㄐ詸z測(cè)結(jié)果為陽(yáng)性時(shí)，可提示MsPGN大鼠模型制作取得成功，隨后繼續(xù)給大鼠灌胃BSA直到實(shí)驗(yàn)結(jié)束。

1.4 動(dòng)物分組 將大鼠隨機(jī)(采用隨機(jī)數(shù)字表)分為5組:正常組10只、模型組10只，灸背組12只，灸腹組12只，灸肢組12只。

1.4.1 正常組 該組大鼠不進(jìn)行造模與艾灸,每天參考艾灸組同樣的操作與時(shí)間進(jìn)行抓取固定。

1.4.2 模型組 該組大鼠造模成功后，不要艾灸,每天參考艾灸組同樣的操作與時(shí)間進(jìn)行抓取固定。

1.4.3 灸背組 選穴造模成功后，將大鼠固定在鼠籠內(nèi),使大鼠尾部自由活動(dòng)，頭與身體無(wú)法動(dòng)彈。大鼠進(jìn)行備皮消毒，參照“大鼠標(biāo)準(zhǔn)穴位圖譜”，取雙腎俞穴、命門；選用自制香煙型艾條(直徑約0.8 cm)，于穴位上方2～3 cm處懸灸，每個(gè)腎俞穴灸7 min，命門穴灸6 min,左腎俞穴、命門、右腎俞穴每次共20 min，每日1次，治療6次休息1 d，共治療6周。

1.4.4 灸腹組 造模成功后，將大鼠固定在鼠籠內(nèi),使大鼠尾部自由活動(dòng)，頭與身體無(wú)法動(dòng)彈。對(duì)大鼠進(jìn)行備皮消毒，參考“大鼠標(biāo)準(zhǔn)穴位圖譜”，選用自制的香煙型艾條(直徑約0.8 cm)，于穴位上方2～3 cm處懸灸，中脘、關(guān)元各10 min，先灸中脘穴、再灸關(guān)元穴，每次20 min，每日1次，治療6次休息1 d，共治療6周。

1.4.5 灸肢組 造模成功后，將大鼠固定在鼠籠內(nèi),使大鼠尾部自由活動(dòng)，頭與身體無(wú)法動(dòng)彈。對(duì)大鼠進(jìn)行備皮消毒，參考“大鼠標(biāo)準(zhǔn)穴位圖譜”，取后(足)三里、涌泉，灸法同灸背組，每個(gè)后(足)三里穴灸5 min,涌泉穴灸5 min,灸法順序左三里、右三里、左涌泉、右涌泉穴，每次20 min，每日1次，每治療6次后休息1 d，共治療6周。

1.5 標(biāo)本采集及指標(biāo)檢測(cè) 分別于10、12、14、16周末對(duì)大鼠24 h內(nèi)的尿液進(jìn)行尿蛋白定量檢驗(yàn)，分別于10、16周末對(duì)大鼠24 h內(nèi)的尿液進(jìn)行尿紅細(xì)胞檢驗(yàn)，分別于10、16周末尾靜脈取血10 mL，檢驗(yàn)血清尿素氮和肌酐水平。

2 結(jié)果

2.1 對(duì)各組大鼠一般狀況影響 正常對(duì)照組大鼠的精神狀態(tài)、反應(yīng)性、活動(dòng)度均較好，毛色普遍光澤，大小便正常。而通過(guò)觀察模型組大鼠發(fā)現(xiàn)，實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，大鼠普遍出現(xiàn)體形消瘦，精神不振，食欲降低，反應(yīng)下降，毛色光澤差，弓背豎毛，眼球、耳廓、尾巴蒼白，大小便異常。3個(gè)治療組所有大鼠精神狀態(tài)、反應(yīng)性、活潑度均較好,毛色普遍光澤，大小便正常。在實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，各組均出現(xiàn)大鼠死亡(可能與給藥損傷、操作不當(dāng)有關(guān),病理解剖證實(shí)死亡原因)。各組大鼠相關(guān)死亡情況:從造模開(kāi)始至治療前，總共有2只動(dòng)物死亡，灸背組1只，灸腹組1只。而從治療開(kāi)始到實(shí)驗(yàn)結(jié)束，灸肢組在12周時(shí)死亡1只，其余各組均未出現(xiàn)死亡。

2.2 對(duì)各組大鼠24 h尿蛋白的影響 見(jiàn)表1。

表1 對(duì)各組大鼠24 h尿蛋白的影響(±s) mg/L

2.3 對(duì)各組大鼠尿紅細(xì)胞計(jì)數(shù)的影響 見(jiàn)表2。

表2 對(duì)各組大鼠尿紅細(xì)胞計(jì)數(shù)的影響(±s) (個(gè)/視野)

2.4 對(duì)各組大鼠腎功能的影響 見(jiàn)表3。

表3 對(duì)各組大鼠腎功能的影響(±s)

3 討論

灸腹和灸背治療后，MsPGN大鼠的血清尿蛋白水平出現(xiàn)顯著的下降，提示2種治療方法可有效降低尿蛋白水平，但未恢復(fù)到正常對(duì)照組的水平。艾灸單一治療MsPGN能在一定程度上減輕尿蛋白，但還不能完全緩解MsPGN,本研究中也可能由于治療時(shí)間不夠長(zhǎng)而未能達(dá)到完全緩解。本研究還發(fā)現(xiàn)灸背組大鼠與灸腹組大鼠的尿紅細(xì)胞出現(xiàn)明顯減少，提示艾灸可能通過(guò)抑制腎小球系膜病變的疾病進(jìn)展，降低尿液中的紅細(xì)胞數(shù)目，從而緩解與改善系膜增生性腎炎的尿血癥狀，減少鏡下血尿。因此，艾灸可有效保護(hù)腎臟功能，提高腎小球?yàn)V過(guò)率，防止氮質(zhì)血癥的產(chǎn)生，特別是灸腹治療的療效顯著。

背部組取命門穴，腎俞；命門為督脈之穴，腎俞為調(diào)整腎臟機(jī)能的要穴，2穴單純補(bǔ)腎。腹部組取關(guān)元穴，中脘；關(guān)元穴為小腸募穴，足三陰會(huì)穴，足三陰任脈交會(huì)穴，為一身元?dú)馑?，中脘為胃?jīng)之募穴，2穴亦脾腎雙補(bǔ)，均為任脈之穴，且“命門者，下丹田精氣處也”其命門學(xué)說(shuō)定位在下丹田即關(guān)元穴。肢體組取足三里，涌泉穴；足三里為足陽(yáng)明胃經(jīng)之合穴，是五輸穴之一，胃腑的下合穴，涌泉穴為足少陰腎經(jīng)之井穴，2穴脾腎雙補(bǔ)，但與命門學(xué)說(shuō)關(guān)系甚微。

艾灸可有效減少M(fèi)sPGN大鼠尿蛋白含量，改善血尿，降低血尿素氮及血肌酐，同時(shí)能夠?qū)δＰ痛笫蟮哪I臟起到一定的保護(hù)作用,說(shuō)明艾灸組對(duì)實(shí)驗(yàn)所致大鼠MsPGN有一定的治療作用。在系膜增生性腎小球腎炎的針灸治療中，命門學(xué)說(shuō)脾腎雙補(bǔ)組，即腹部組，優(yōu)于命門學(xué)說(shuō)單純補(bǔ)腎組，即背部組，命門學(xué)說(shuō)單純補(bǔ)腎組優(yōu)于非命門學(xué)說(shuō)脾腎雙補(bǔ)組，即肢體組。

[1]魏鐵花,王慶國(guó),韓玉生,等.針刺對(duì)系膜增生性腎小球腎炎(MsPGN)大鼠的實(shí)驗(yàn)研究[J].醫(yī)學(xué)信息(上旬刊),2011,24(7):4123-4124.

[2]胡翠云,戴敏,陳君君,等.黃蜀葵花總黃酮對(duì)大鼠濕熱型慢性腎炎的作用及其對(duì)紅細(xì)胞免疫黏附功能的影響[J].安徽中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2011,30(1):57-61.

[3]卞勇,鞠曉云,范乃斌,等.針?biāo)幗Y(jié)合治療對(duì)慢性腎小球腎炎大鼠IL-1、IL-2的影響[J].安徽醫(yī)藥,2010,14(7):762.

[4]劉震,周樹(shù)錄,譚建三.大鼠系膜增生性腎模型的復(fù)制與改進(jìn)[J].華西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào),1996,27(2):182-184.

[5]賈慧,鄒萬(wàn)忠.改良慢性血清病性大鼠系膜增生性腎炎模型的建立[J].腎臟病與透析腎移植雜志,1996,5(3):21-25,98.